公开(公告)号：CN111850066A

公开(公告)日：2020-10-30

申请号：CN202010686630.4

申请日：2020-07-16

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 张风丽 ,  胡恒 ,  李志勇

IPC: C12P17/16 ,  C12N1/20 ,  C07D417/12 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明公开了一种前体指导的Bacillamide卤代类似物的制备方法，包括如下步骤：将海洋来源萎缩芽孢杆菌Bacillus atrephaeus C89经菌种活化，种子培养后用于摇瓶发酵，在菌株摇瓶发酵的5-7h添加终浓度为0.2-0.6mM的6-氯-色氨酸，在发酵48h后终止发酵，发酵培养液经分离纯化后获得6-Cl-Bacillamide C。本发明方法利用微生物胞内酶的底物宽泛性，将色氨酸的衍生物6-氯-色氨酸添加到培养基中，通过生物合成的方法将氯元素引入到了天然产物中。

公开(公告)号：CN106167809B

公开(公告)日：2019-11-01

申请号：CN201610396756.1

申请日：2016-06-06

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 张风丽 ,  王惟佳 ,  金结平 ,  李志勇

IPC: C12N15/75 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明提供了一种海洋萎缩芽孢杆菌外源DNA的转入方法，包括如下步骤：对供体菌株、辅助菌株和受体菌株分别进行培养，并分别检测供体菌株培养液、辅助菌株培养液和受体菌株培养液的OD600；将前步骤中培养后的供体菌株、辅助菌株和受体菌株等量混匀，进行三亲本杂交，并筛选出杂交成功的菌株，记为三亲本杂交菌株；筛选出带有质粒菌株的萎缩芽孢杆菌C89/pRP1028；提取质粒pRP1028；将质粒pRP1028转化到大肠杆菌中，并提取大肠杆菌的质粒，进行测序验证。本发明具有如下的有益效果：对特殊培养和难于转化菌株的外源基因的转化带有借鉴意义。

公开(公告)号：CN103497976A

公开(公告)日：2014-01-08

申请号：CN201310274691.X

申请日：2013-07-02

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 殷颖 ,  李志勇 ,  张风丽 ,  肖岚 ,  丁烨天 ,  于一能

IPC: C12P7/38 ,  C12N1/14 ,  C12R1/66

Abstract: 本发明公开了一种用于海绵共附生土曲霉发酵生产(+)-Terrein的人工海水及培养基；所述人工海水包括如下各组分：蒸馏水、氯化镁、硫酸镁、氯化钾、碳酸氢钠、溴化钠；向海绵共附生土曲霉发酵培养基中添加人工海水，即可促进(+)-Terrein的合成。本发明还涉及用于海绵共附生土曲霉发酵生产(+)-Terrein的培养基，包括如下组分：葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、麦芽提取物、谷氨酸钠、氯化铵，人工海水。本发明较现有人工海水相比，本发明使用含有人工海水的培养基制得(+)-Terrein产量达到6.68g/L，其产量明显提高53.8%，降低了人工海水盐度80%以上，减小了对金属制生物反应器的腐蚀风险。

公开(公告)号：CN101948891B

公开(公告)日：2012-08-22

申请号：CN201010278110.6

申请日：2010-09-10

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 金靓婕 ,  李志勇 ,  张风丽

IPC: C12P21/00 ,  C12R1/07

Abstract: 一种细菌培养技术领域的发酵萎缩芽孢杆菌制备Bacillamide C的培养基及其制备及应用方法，该培养基的组分及含量为：3.64g/L玉米淀粉、6.0g/L胰蛋白胨、6.29g/L碳酸钙、4.0g/L大豆蛋白胨、0.10g/L半胱氨酸和0.02g/L色氨酸，溶剂为人工海水。本发明不仅能满足摇瓶实验的需要，亦能满足发酵罐发酵大量制备Bacillamide C的要求。

公开(公告)号：CN100398647C

公开(公告)日：2008-07-02

申请号：CN200610024278.8

申请日：2006-03-02

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 李志勇 ,  吴杰

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/12

Abstract: 一种大片段海绵宏基因组DNA快速提取方法，无菌条件下用无钙镁人工海水浸泡海绵样品并撕成1-3mm3小块，浸泡使海绵细胞及其共附生微生物分散于溶液中，静置、吸取上层混合细胞悬浮液，加入乙二胺四乙酸、十二烷基肌氨酸钠组成的碱性破壁缓冲液和含Ca2+的蛋白酶K溶液消化细胞壁，采用Tris-饱和酚、氯仿、异戊醇混合溶液以及氯仿、异戊醇混合溶液提取DNA，再加入醋酸钠及异丙醇得到DNA沉淀，70-75%乙醇洗涤、干燥、溶于TE缓冲液，采用RNase酶消解RNA，琼脂糖凝胶电泳检测DNA。本发明简单快捷，适合大于40000个碱基以上的海绵宏基因组DNA提取，可满足宏基因组文库构建和功能基因筛选的需要。

公开(公告)号：CN1740186A

公开(公告)日：2006-03-01

申请号：CN200510029320.0

申请日：2005-09-01

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 李志勇 ,  何丽明

IPC: C07H21/04 ,  C12Q1/68

Abstract: 一种海绵共附生微生物群落总DNA的快速提取方法，先将海绵样品切成小块，悬浮于TE缓冲液中放置冰上直接研磨，完成海绵组织的裂解，然后在得到的TE悬浮海绵裂解物中，加入溶菌酶、十二烷基磺酸纳及蛋白酶K处理，离心后加入Tris－饱和酚抽提，然后依次采用Tris－饱和酚、氯仿、异戊醇溶液及氯仿、异戊醇溶液提取，再依次加入NaCl及异丙醇得到DNA沉淀，洗涤后溶解于TE缓冲液，采用RNA酶消解RNA，最后琼脂糖凝胶电泳分析检测提取的DNA样品。本发明可在一般实验室快速、方便地得到大片段的海绵共附生微生物的群落总DNA样品，可满足基于核酸的海绵共附生微生物种群结构与多样性分析的需要。