牛骨骼肌分化相关DNA甲基化酶TET1与m6A甲基化酶METTL3的互作鉴定和应用

    公开(公告)号:CN114480670A

    公开(公告)日:2022-05-13

    申请号:CN202210111782.0

    申请日:2022-01-26

    Inventor: 杨昕冉 昝林森

    Abstract: 本发明提供了牛骨骼肌分化相关DNA去甲基化酶TET1的mRNA上m6A甲基化位点的鉴定方法,提供了鉴定TET1的m6A甲基化水平的引物序列和方法,根据m6A‑seq测序和m6A‑IP‑qPCR鉴定了TET1的m6A水平在成肌分化中的变化;通过m6A位点的同义突变改变TET1的m6A甲基化水平,证明了TET1的m6A甲基化具有影响骨骼肌分化的功能;提供了检测TET1受m6A甲基化修饰调控的方法,通过双荧光素酶报告系统和RIP实验证明TET1的表达受METTL3‑m6A‑YTHDF1的调控;提供了检测DNA甲基化影响m6A甲基化修饰的方法,证明了牛骨骼肌分化中DNA甲基化与RNA甲基化的互作。为m6A甲基化修饰调控肌肉生长发育的功能研究提供参考,鉴定了骨骼肌发育中的一种新的互作机制,为肉牛的定向选育提供了一种新的分子标记。

    一种与肉牛肉质性状相关联的BBS2分子标记及其检测试剂盒

    公开(公告)号:CN113186301A

    公开(公告)日:2021-07-30

    申请号:CN202110514527.6

    申请日:2021-05-08

    Abstract: 本发明公开了一种与肉牛肉质性状相关的BBS2分子标记、检测试剂盒及其应用,该分子标记位于BBS2基因编码区的g.24223562G/A位点、g.24226239C/T位点和g.24227851G/A位点,与肉牛眼肌面积、眼肌深度、肌间脂肪含量肉质性状显著相关。是一个潜在的秦川牛为代表的地方黄牛肉用选育遗传标记。基于这一发现,研制了快速检测BBS2基因型预测肉牛肉质性状的试剂盒,可用于秦川牛为代表的地方黄牛早期选种,加快肉牛遗传进展,节约生产成本。实现肉牛早期选种留种,加快肉牛肉用选育进程。

    一种牛PDHB基因腺病毒干扰载体构建及其鉴定方法

    公开(公告)号:CN106811484B

    公开(公告)日:2020-03-10

    申请号:CN201710018350.4

    申请日:2017-01-11

    Abstract: 本发明公开了一种牛PDHB基因腺病毒干扰载体构建及其鉴定方法,序列为:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3。构建方法包括:载体用BamH I,EcoR I双酶切;酶切完成后胶回收;目的片断利用3’和5’的单链退火获得:目的片段与载体连接反应;转化感受态细胞:DH5a;转化后挑菌,摇菌14小时,测序;将重组腺病毒载体质粒PDHB shRNA与pHBAd‑BHG骨架载体共转染HEK293A细胞,获得重组腺病毒Ad‑PDHB shRNA。本发明的shRNA1、shRNA2和shRNA3对PDHB基因的干扰效率分别为:95.12%、12.69%和97.76%。

    一种秦川肉牛肌内脂肪细胞分离的方法

    公开(公告)号:CN109486752A

    公开(公告)日:2019-03-19

    申请号:CN201811547543.X

    申请日:2018-12-18

    Abstract: 本发明涉及一种秦川肉牛肌内脂肪细胞的分离纯化和鉴定方法,使用II型胶原酶对秦川肉牛背最长肌进行消化,经II型胶原酶消化后的组织块用含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中和,经过滤、离心得到细胞,细胞再经洗涤、离心后重悬于含有10%FBS的DMEM/F12培养基中,计数后,将细胞接种在培养皿中,在CO2培养箱中培养1.5小时,用无菌磷酸缓冲盐溶液洗涤除去非粘附细胞,然后将细胞培养在37℃、CO2浓度为5%的培养箱中,每隔2天换一次培养基,待细胞汇合度达到70%-80%后,进行细胞免疫荧光标记阳性细胞鉴定。该方法获得的肉牛肌内脂肪细胞具有较高的前脂肪细胞阳性比率,为提高肌内脂肪沉积的同时不增加皮下及内脏脂肪沉积的研究奠定了基础。

    一种ARN数据库平台及其分析构建科学假说的方法

    公开(公告)号:CN106126550A

    公开(公告)日:2016-11-16

    申请号:CN201610428047.7

    申请日:2016-06-15

    Inventor: 昝林森 黄艳

    Abstract: 本发明公开了一种ARN数据库平台及其分析构建科学假说的方法,以ARN数据库中的3万多条脂肪生成分子调控信息为基础,基于开放的和闭合的两种构建科学假说的方法,根据用户的特定科研目的,可以快速构建出脂肪生成相关的科学假说,并可以根据数据库现有的数据,对各假说进行初步的评价。本发明将数据库技术与基于文献的科学假说建立方法相结合,充分发挥了数据库对于数据的强大储存和整合功能,赋予了基于文献的科学假说建立方法充分的灵活性,为脂肪生成相关基因和通路的发现提供帮助。同时,也可为其他专业数据库的开发利用提供参考依据。

    一种山羊乳酪蛋白源抗菌肽的制备方法

    公开(公告)号:CN104031965A

    公开(公告)日:2014-09-10

    申请号:CN201410247225.7

    申请日:2014-06-05

    Abstract: 本发明公开了山羊乳酪蛋白源抗菌肽的制备方法,采用木瓜蛋白酶将山羊乳酪蛋白酶解,酶解物经过大孔非极性树脂分离及脱盐,再经过半制备凝胶色谱仪纯化,冷冻干燥,即加工成山羊乳酪蛋白源抗菌肽粉,经申请人进行的抗菌功能试实验结果表明,制得的该山羊乳酪蛋白源抗菌肽的分子量均在3000以下,易于吸收利用,所得山羊乳酪蛋白源抗菌肽二级结构主要为无规则卷曲,为无毒性的绿色天然抗菌肽,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌等具有优良的抗菌性能,在乳与乳制品、化妆品和其他食品保鲜方面具有极其广阔应用前景。

    一种抗疲劳寡肽饼干的制备方法

    公开(公告)号:CN102160563B

    公开(公告)日:2012-09-26

    申请号:CN201110053353.4

    申请日:2011-03-07

    Abstract: 本发明公开了一种抗疲劳寡肽饼干的制备方法,包括酪蛋白寡肽粉的制备、枸杞汁粉的制备和抗疲劳酪蛋白寡肽饼干的制备三部分。将制得的牛乳酪蛋白、羊乳酪蛋白用中性蛋白酶和碱性蛋白酶复酶在规定条件下酶解后,酪蛋白大多数变为易于吸收利用的寡肽。寡肽粉和枸杞汁粉,不但能增加饼干的营养价值,而且还能增强饼干的抗氧化活性和抗疲劳功能。本发明方法制备的抗疲劳寡肽饼干,是旅游、救灾、军队、职工误餐、学生课间补餐的良好食品,具有极其广阔的市场前景。

    一种用ZBTB38基因检测黄牛体型大小的方法

    公开(公告)号:CN101906479A

    公开(公告)日:2010-12-08

    申请号:CN201010274180.4

    申请日:2010-09-07

    Inventor: 刘永峰 昝林森

    Abstract: 本发明公开了一种用ZBTB38基因检测黄牛体型大小的方法,该方法根据牛ZBTB38基因序列设计一对引物;利用该引物对牛的基因组DNA进行PCR扩增;并对PCR产物进行反向测序,检测出ZBTB38基因外显子1的第2145位、2286位、2323位、2325位、2409位、2457位、2583位、2643位和2676位共9个位点处形成的T/C、T/C、G/A、C/T、T/C、G/C、C/T、G/A和G/A共9个突变,分别命名为T2145C、T2286C、G2323A、C2325T、T2409C、G2457C、C2583T、G2643A和G2676A变异位点。根据实验结果表明,9个变异位点的分析可以由T2145C、G2323A和T2409C三个变异位点代表,且T2145C、G2323A和T2409C3个变异位点的联合基因型中TTAATT和TCGATC基因型的体尺性状指标均高于其他基因型;G2323A位点的基因型与黄牛群体的体长、体高和尻长显著相关(P

    一种用GDF5基因预示和鉴定秦川牛体尺大小的分子标记方法

    公开(公告)号:CN101525662A

    公开(公告)日:2009-09-09

    申请号:CN200910021827.X

    申请日:2009-04-02

    Abstract: 本发明公开了一种用GDF5基因预示和鉴定秦川牛体尺大小的分子标记方法,该方法根据牛GDF5基因序列设计一对引物;利用该引物对牛的基因组DNA进行PCR扩增;并利用限制性内切酶Mva I消化扩增的PCR产物;然后使用2.5%的琼脂糖凝胶对消化后的PCR产物进行电泳分离,检测出GDF5基因外显子1的586位点处的T/C变异位点;分别对牛GDF5基因外显子1中变异位点为C碱基、T碱基及T/C杂合碱基进行命名。根据实验结果表明,具有TT基因型个体的体长比CC基因型个体的体长低5.64~6.87cm;具有TT基因型个体的腰角宽比CC基因型个体的腰角宽低3.46~4.00cm。该方法操作简单、费用低、精确度高,可进行快速检测。

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