结核分枝杆菌的分子分型方法

    公开(公告)号:CN112501321A

    公开(公告)日:2021-03-16

    申请号:CN202011302347.3

    申请日:2020-11-19

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 本发明涉及生物领域,并具体涉及一种对结核分枝杆菌进行分子分型方法。本发明的方案解决了传统方案中PCR扩增稳定性差、检测通量低、对长片段分辨率低、结果判读困难、人工操作步骤多的难题,能够对>98%的标本进行准确的VNTR‑9分型,对>95%的标本进行准确的HV‑3分型,仅需对工作人员进行简单培训即可进行操作。

    一种染色体非整倍体异常的检测方法及检测试剂盒

    公开(公告)号:CN111088325A

    公开(公告)日:2020-05-01

    申请号:CN201911301212.2

    申请日:2019-12-17

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 本发明公开一种染色体非整倍体异常的检测方法及检测试剂盒。本方法运用全基因组中重复序列(SD,segmental duplication)为检测原理,建立快速准确、操作简单的诊断技术,可同时应用于微滴式数字PCR平台的拷贝数定量分析和多重荧光PCR平台的熔解曲线分析,同步检测多种染色体非整倍体异常。本发明大大缩短了检测周期,具有高灵敏度、高特异性、高通量、低成本、无污染等优点。

    一种熔点编码的结核分枝杆菌间隔寡核苷酸分型方法

    公开(公告)号:CN104862403A

    公开(公告)日:2015-08-26

    申请号:CN201510288801.7

    申请日:2015-05-29

    Applicant: 厦门大学

    CPC classification number: C12Q1/6813 C12Q2563/107 C12Q2527/107

    Abstract: 一种熔点编码的结核分枝杆菌间隔寡核苷酸分型方法,涉及结核分枝杆菌。1)在直接重复序列上设计一对通用引物扩增所有间隔子;在GyrA保守区域设计一对引物;2)根据43个间隔子序列、GyrA序列设计与之特异杂交的双标记荧光探针,并将探针设计为4组,每组配备相同的荧光基团,通过调整探针长度和/或碱基组成对每条探针的熔点值进行人为控制;3)将荧光探针分布在三个反应管,通过反应管、荧光基团和熔点温度值的组合,每个间隔子分别形成一个三维编码并由软件自动读取结果。只需一步操作,操作简便、特异性高、重复性好、耗时短,价格相对低廉,将为探索和研究我国结核病的流行和传播规律提供有力的工具。

    一种耳聋易感基因突变检测试剂盒及其制备方法与应用

    公开(公告)号:CN104263848A

    公开(公告)日:2015-01-07

    申请号:CN201410583806.8

    申请日:2014-10-24

    Applicant: 厦门大学

    CPC classification number: C12Q1/6883 C12Q2600/156

    Abstract: 一种耳聋易感基因突变检测试剂盒及其制备方法与应用,涉及基因突变检测。试剂盒设有盒体、盒盖、隔板、HHL PCR混合液A瓶、HHL PCR混合液B瓶、HHL PCR混合液C瓶、HHL PCR混合液D瓶、HHL酶混合液瓶、HHL标准对照瓶、HHL阴性对照瓶。先制备扩增试剂和对照试剂,将扩增试剂和对照试剂设在瓶内,即得耳聋易感基因突变检测试剂盒。所述试剂盒可在临床进行遗传性耳聋基因筛查、致聋基因类型的识别中的应用,从而预防耳聋疾病的发生。

    一种单管定性并定量检测多个目标核酸序列的方法

    公开(公告)号:CN102559868B

    公开(公告)日:2014-11-05

    申请号:CN201110386430.8

    申请日:2011-11-28

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 李庆阁 廖逸群

    Abstract: 本发明公开了一种单管定性并定量检测多个目标核酸序列的方法,其包括如下步骤:(1)在目标对象基因序列中选取相对保守的区域设计通用扩增引物;(2)在引物扩增产物中选取差异度较大的区域设计能够识别各种目标核酸序列的特异探针,同时设计多个检测通道,将探针设计为多组,每组的探针配备相同的荧光基团作为一个检测通道,在探针设计过程中通过调整探针的长度和/或探针的碱基组成对每条探针的熔点(Tm)值进行人为控制,使得同一检测通道内针对不同目标序列的检测探针Tm值都间隔合适的差值;(3)通过熔点曲线分析分辨靶序列。本发明单个反应管内的每个荧光通道均可定性检测多个目标核酸序列;同时能够确定各个目标核酸序列的拷贝数;在多个目标序列共存的情况下能够判断目标序列间的比例。

    一种结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变的检测方法及试剂盒

    公开(公告)号:CN102229989B

    公开(公告)日:2013-04-17

    申请号:CN201110137819.9

    申请日:2011-05-25

    Abstract: 一种结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变的检测方法及试剂盒。涉及结核分枝杆菌耐药突变的检测技术,提供一种设计简单,可简化操作、提高分析灵敏度、成本低廉的结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变的检测方法及试剂盒。提取结核分枝杆菌样本的DNA;根据结核分枝杆菌embB基因序列,利用引物设计软件PrimerPremier 5设计引物和探针;构建PCR反应体系,进行PCR检测;进行熔解曲线分析及检测结果判断:通过分析熔解曲线的Tm变化确定该探针所覆盖区域是否发生突变。采用3对引物4条探针建立双管双色体系体系从而实现对位于embB基因上的6个密码子306、368、378、380、406和497的突变检测。

    一种稀土荧光二氧化硅纳米颗粒的制备方法

    公开(公告)号:CN102504808A

    公开(公告)日:2012-06-20

    申请号:CN201110320221.3

    申请日:2011-10-19

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种稀土荧光二氧化硅纳米颗粒的制备方法,涉及一种纳米颗粒材料。将水、油、表面活性剂、助表面活性剂混合,自发形成各向异性、透明、热力学稳定的分散体系,得表面带有羟基的二氧化硅纳米颗粒;将带有功能基团的硅烷试剂与稀土离子配合物反应,得稀土离子配合物前驱体;将制得的稀土离子配合物前驱体与四乙氧基硅烷混合后加入所得的表面带有羟基的二氧化硅纳米颗粒中,稀土离子配合物即可键合至二氧化硅纳米颗粒表面;在油包水微乳体系中加入稀土离子,即可与固定在二氧化硅纳米颗粒表面的稀土离子配合物螯合而形成具有荧光的稀土络合物,经丙酮封闭反应体系后,洗涤,即得产物稀土荧光二氧化硅纳米颗粒。操作简单、易于实现,荧光强度更高。

    一种基因稀有突变的定量检测方法

    公开(公告)号:CN101381766B

    公开(公告)日:2012-04-18

    申请号:CN200810071202.X

    申请日:2008-06-11

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种基因稀有突变的定量检测方法,涉及一种基因的检测方法,尤其是涉及一种基因稀有突变的定量检测方法。提供一种基因稀有突变的定量检测方法。1)根据需要定量检测的基因稀有突变,设计并制备相应的引物序列,引物的3’末端为突变位点特异核苷酸,除了最后一位核苷酸,其余序列均可通过商业合成,最后一位核苷酸为修饰核苷酸,使引物在常规PCR反应中无法延伸,修饰核苷酸添加至引物末端;2)在含有特定DNA聚合酶和焦磷酸的反应体系中,采用步骤1)设计并制备的引物对待定量检测的基因稀有突变进行扩增,并利用实时荧光PCR仪进行定量检测;3)通过分析实时荧光PCR仪所记录的扩增曲线,即可获得基因稀有突变的定量检测信息。

    一种结核分枝杆菌链霉素耐药突变的检测方法及试剂盒

    公开(公告)号:CN102229991A

    公开(公告)日:2011-11-02

    申请号:CN201110138242.3

    申请日:2011-05-25

    Abstract: 一种结核分枝杆菌链霉素耐药突变的检测方法及试剂盒。涉及耐药突变的检测技术,提供一种有效提高灵敏度及特异性、操作简便、周期短结核分枝杆菌链霉素耐药突变的检测方法。根据结核分枝杆菌全序列和结核分枝杆菌基因组rpsL和rrs基因序列,设计引物和探针;提取结核分枝杆菌样本的DNA;构建PCR反应体系;进行PCR扩增及熔解曲线分析。利用特异性引物和探针,分别于两管中实验,采用耐热DNA聚合酶、四种核苷酸单体等成分,并应用实时PCR技术实现靶核苷酸序列的核算片段扩增以及之后的熔解曲线分析。荧光PCR熔解曲线法特异性好,可快速、准确地检测结核分枝杆菌链霉素耐药常见突变,有望直接用于临床样本链霉素耐药性检测。

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