诱导分泌表达生产重组葎草主要致敏蛋白Humj3的方法

    公开(公告)号:CN101993888A

    公开(公告)日:2011-03-30

    申请号:CN200910091766.4

    申请日:2009-08-25

    Inventor: 尹佳 周俊雄 程璇

    Abstract: 本发明提供一种在酵母系统中诱导表达重组葎草花粉主要致敏蛋白Hum j 3的方法,包括:构建表达SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的重组表达载体;线性化重组表达载体,转化感受态酵母细胞;筛选阳性克隆,得重组菌株,并扩大培养;重组菌株的诱导表达以及筛选:Hum j 3蛋白在酵母中以α-factor信号肽蛋白引导的分泌表达;以高活性的重组菌株为种子菌进行高密度的诱导表达重组Humj 3蛋白;收集培养上清并分离纯化Humj 3。本发明首次在国际上确证了葎草主要致敏蛋白的全基因序列,并首次成功进行了酵母分泌表达,且证实了该重组蛋白具有免疫活性,为葎草花粉过敏患者的分子诊断和临床免疫治疗提供了全新的蛋白。

    用于Humj3检测的夹心ELISA试剂盒

    公开(公告)号:CN101988928A

    公开(公告)日:2011-03-23

    申请号:CN200910090769.6

    申请日:2009-08-06

    Abstract: 本发明提供一种用于Hum j3检测的夹心ELISA试剂盒,其通过天然葎草花粉纯化主要致敏蛋白Hum j3的制备、小鼠杂交瘤单抗的制备和筛选、夹心ELISA方法两种单抗的选择、夹心ELISA方法试验条件的确定、夹心ELISA方法敏感性、特异性、线性范围、稳定性等方法学指标的确定等步骤建立夹心ELISA法。本发明试剂盒包括该方法的运用包括:捕捉抗体和检测抗体,所述捕捉抗体包被于酶标板中,所述检测抗体为酶标记抗体,所述捕捉抗体和检测抗体分别特异性地针对Hum j3的不同抗原决定簇。本发明在临床实践、变应原制药工业生产、质控与新药研发、气候与环境中Hum j3含量监测与预报中有重要的运用价值。

    葎草花粉主要致敏蛋白

    公开(公告)号:CN101392023A

    公开(公告)日:2009-03-25

    申请号:CN200710122176.4

    申请日:2007-09-21

    Inventor: 尹佳 李宏 程璇

    Abstract: 本发明公开了葎草花粉主要致敏蛋白,该蛋白可从葎草花粉中分离获得,其能与89%以上葎草花粉过敏病人血清特异性IgE结合,经SDS-PAGE测定其表观分子量约为12kDa,等电点为4.7,N端序列为:NH4+-MDNPFENGMKA-COO-。该蛋白的分离纯化为其变应原制剂标准化的实现奠定了基础。

    一种地肤花粉变应原浸提物、其浸提液及其制备方法

    公开(公告)号:CN110201188B

    公开(公告)日:2021-08-03

    申请号:CN201910440773.4

    申请日:2019-05-24

    Abstract: 本发明提供了本发明涉及一种地肤花粉变应原浸提物、其浸提液及其制备方法,地肤花粉变应原浸提物其含有致敏蛋白Koc S1’,其含有如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。该地肤花粉变应原浸液,其含有治疗有效量或诊断有效量的地肤花粉变应原。该浸液还可经地肤花粉收集、干燥、脱脂、提取、超滤浓缩、冷冻干燥、复溶等工艺方法制得。该地肤花粉变应原浸液具有特异性高的特点,地肤致敏蛋白组分提取充分,总生物效价稳定,有效期长,无菌效果好;可有效用于变态反应疾病的皮肤点刺试验诊断、体外嗜碱性粒细胞活化试验诊断及特异性免疫治疗,可有效诊断由地肤花粉诱发的变态反应疾病并对其进行特异性免疫治疗。

    葎草花粉过敏性哮喘免疫治疗小鼠模型的建立方法

    公开(公告)号:CN107669743B

    公开(公告)日:2020-08-25

    申请号:CN201711187985.3

    申请日:2017-11-24

    Inventor: 尹佳 孔瑞 席广鹏

    Abstract: 本发明提供一种葎草花粉过敏性哮喘免疫治疗小鼠模型的建立方法,包括步骤:第一步:分别于第1天、第8天和第15天对BALB/c小鼠颈后皮下注射25μg葎草花粉变应原粗浸液对小鼠致敏;第二步:第22‑24天,雾化吸入1%的葎草花粉变应原粗浸液激发,连续3天,每天30min;第三步:第25天开始,颈后皮下注射300μg葎草花粉变应原粗浸液脱敏,隔天一次,共8次;第四步:第43‑49天,雾化吸入1%的葎草花粉变应原粗浸液再次激发,连续7天,每天30min;造模成功;本发明建立了一种有效的过敏性哮喘特异性免疫治疗小鼠模型,为研究葎草花粉过敏性哮喘免疫治疗作用机制提供良好的载体。

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