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公开(公告)号:CN116814593A
公开(公告)日:2023-09-29
申请号:CN202310199723.8
申请日:2023-03-05
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 发明涉及基因工程和蛋白质工程领域,具体涉及一种提高碱性蛋白酶热稳定性的方法及突变体ThAPT3‑M6、7、8、9和应用。本发明以碱性蛋白酶PA3为亲本,分别将loop18区域优化后的突变体ThAPT3‑M2、α8‑helix区域优化后的突变体ThAPT3‑M4和loop19区域优化后的突变体ThAPT3‑M5分别进行双区域叠加和三区域叠加,产生了四个突变体。突变体的Tm值提高了7.2℃、4.3℃、5.7℃、7.5℃,55℃下的t1/2分别提高到亲本的10.6倍、6.9倍、8.5倍、12.2倍,60℃下的t1/2分别提高到亲本的21.2倍、13.2倍、17.6倍、39.7倍。突变体M6、M7、M8和M9的比活力相较于亲本分别提高了23%、25%、20%和62%。因此,本发明提供的碱性蛋白酶突变体相较于野生型有着更好的热稳定性和催化活性,具有更好的工业应用前景。
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公开(公告)号:CN115595344B
公开(公告)日:2023-08-04
申请号:CN202211587193.6
申请日:2022-12-12
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明涉及农业生物技术领域,具体涉及儿茶素作为裂解性多糖单加氧酶降解纤维素的电子供体的应用。木质纤维素类生物质中天然存在的化合物能作为裂解性多糖单加氧酶电子供体,显著降低裂解性多糖单加氧酶的使用成本,促进其大规模地推广应用。
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公开(公告)号:CN116218821A
公开(公告)日:2023-06-06
申请号:CN202310199721.9
申请日:2023-03-05
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明涉及基因工程和蛋白质工程领域。具体地,涉及到一种提高碱性蛋白酶热稳定性的方法及突变体ThAPT3‑M1、ThAPT3‑M2和应用。本发明以碱性蛋白酶PA3为亲本,通过区段替换和定点突变,从而获得了热稳定性显著提高的蛋白酶突变体。亲本PA3在60℃条件下处理10min和20min后,剩余酶活分别为1.9%和1.6%。突变体ThAPT3‑M1和ThAPT3‑M2在60℃下处理10min后,剩余酶活分别为62%和69%;突变体ThAPT3‑M1和ThAPT3‑M2在60℃下处理20min后,剩余酶活分别为39%和43%。此外,突变体ThAPT3‑M2的比活力提高了25%。因此,本发明提供的碱性蛋白酶突变体相较于野生型有着更好的热稳定性和催化活性,具有更好的工业应用前景。
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公开(公告)号:CN116083475A
公开(公告)日:2023-05-09
申请号:CN202310243947.4
申请日:2023-03-15
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/81 , C12N15/62 , C07K19/00 , C07K14/475 , C12R1/84
Abstract: 本发明涉及基因工程领域,具体涉及一种在毕赤酵母中表达人IGF‑1或其类似物LR3IGF‑1的方法。为了提高人IGF‑1或其类似物LR3IGF‑1的重组表达能力,本发明在毕赤酵母中通过融合蛋白促进目的蛋白的表达,本申请在IGF‑1或LR3IGF‑1的N端融合木聚糖酶基因XynCDBFV,实现了XynCDBFV‑IGF‑1或LR3IGF‑1融合蛋白的表达。通过融合蛋白之间设计TEV蛋白酶位点,然后纯化时利用TEV蛋白酶切割实现了融合蛋白的分离,得到具有生物活性的人IGF‑1及LR3IGF‑1蛋白。另外,通过高密度发酵,实现了融合蛋白的高效表达。
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公开(公告)号:CN116083468A
公开(公告)日:2023-05-09
申请号:CN202211395400.8
申请日:2022-11-09
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/74 , C12N15/54 , C12N15/31 , C12N15/61 , C12N15/53 , C12N9/12 , C12N1/21 , C12P7/02 , C12R1/01
Abstract: 本发明涉及农业生物技术领域,具体涉及构建以葡萄糖、甘油和CO2为碳源生产肌醇的罗尔斯通氏菌工程菌的方法及菌株。本申请通过对罗尔斯通氏菌基因组中编码N‑乙酰氨基葡萄糖特异性磷酸转移酶系统的基因nagE进行突变(G265R)、并敲除编码GntR家族的转录调节因子的nagR使罗尔斯通氏菌能够高效利用葡萄糖。在此基础上构建了一株以可再生底物(葡萄糖、甘油)以及可直接以CO2为碳源合成肌醇的罗尔斯通氏菌H16工程菌株。基于该项技术,不但能够实现生物活性物质的合成,同时也是一种高效消除大气中的温室气体的方法。
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公开(公告)号:CN114736881B
公开(公告)日:2022-09-27
申请号:CN202210648730.7
申请日:2022-06-09
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明属于饲料生物技术领域,具体涉及葡萄糖氧化酶GoxM10的酸稳定性提高的突变体A4D及其衍生突变体和应用。本发明以高热稳定性葡萄糖氧化酶GoxM10为研究材料,采用蛋白质工程改造技术对其进行酸稳定性的改良研究。最后获得酸稳定性提升的突变体,从而促进了Gox在饲料工业中的应用。
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公开(公告)号:CN105296451B
公开(公告)日:2022-08-05
申请号:CN201510895568.9
申请日:2015-12-08
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明涉及基因工程领域,具体涉及一种获得高活力的里氏木霉融合纤维素酶的方法及重组菌株。所述方法包括在宿主细胞中融合表达来自里氏木霉的纤维素酶cbhI基因片段和eg1基因片段,或纤维素酶cbhI基因片段和egII基因片段的步骤。表达融合纤维素酶CBHI‑EGI和CBHI‑EGII的转化子在BMMY培养基中诱导培养2天后,其纤维素酶的滤纸酶活分别为5583U/μmol和8405U/μmol;PASC酶活分别为:5053U/μmol和14272U/μmol;CMC酶活分别为:11939U/μmol和18594U/μmol;大麦葡聚糖的酶活分别为:14023U/μmol和29783U/μmol;其活性均较单独两个酶的协同作用的酶活提高了约1‑3倍。
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公开(公告)号:CN114736880A
公开(公告)日:2022-07-12
申请号:CN202210648724.1
申请日:2022-06-09
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明属于饲料生物技术领域,具体涉及酸稳定性提高葡萄糖氧化酶GoxM10的突变体D497N及其衍生突变体和应用。本发明以高热稳定性葡萄糖氧化酶GoxM10为研究材料,采用蛋白质工程改造技术对其进行酸稳定性的改良研究。最后获得酸稳定性提升的突变体,从而促进了Gox在饲料工业中的应用。
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公开(公告)号:CN114686459A
公开(公告)日:2022-07-01
申请号:CN202210564605.8
申请日:2022-05-23
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明涉及农业生物技术领域,具体涉及里氏木霉纤维素酶转录抑制因子70351的应用及提高纤维素酶表达量和酶活的方法。本发明提供的这种纤维素酶表达相关的转录抑制因子70351对于纤维素酶活性表达具有调节作用,通过构建该基因的敲除质粒,并用其转化宿主菌,在宿主菌中敲除转录抑制因子70351的表达可提高宿主菌的蛋白表达量和纤维素酶酶活。本发明丰富了里氏木霉纤维素酶的转录调控网络,为提高纤维素酶产量,降低纤维素酶成本,实现纤维素有效利用提高了新途径。
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公开(公告)号:CN114107360A
公开(公告)日:2022-03-01
申请号:CN202210104206.3
申请日:2022-01-28
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/80 , C12N15/113 , C12N9/42 , C12R1/885
Abstract: 本发明涉及基因工程领域,具体涉及一种通过干扰磷酸酶基因提高里氏木霉纤维素酶表达的方法。本发明对里氏木霉参与细胞内蛋白降解相关的磷酸酶基因ymr1进行了RNAi介导的基因沉默,此操作提高了里氏木霉的蛋白表达量和纤维素酶酶活。
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