公开(公告)号：CN118562746A

公开(公告)日：2024-08-30

申请号：CN202410578707.4

申请日：2024-05-11

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)

Inventor： 郑海学 ,  党文 ,  许凡 ,  丁明洋 ,  李涛 ,  杜煜 ,  刘华南 ,  石正旺 ,  田宏 ,  朱紫祥

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/85 ,  A61K39/12 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种缺失三个基因的减毒非洲猪瘟病毒株及作为疫苗的应用。本发明在ASFV‑CN/GS‑2018病毒中联合缺失MGF‑100‑1R、MGF‑100‑2L和MGF‑100‑3L共计3个基因，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株减毒非洲猪瘟疫苗株；所述减毒非洲猪瘟疫苗株免疫猪后对猪完全致弱、免疫猪健康，且能够对ASFV CN/GS/2018强毒株攻毒提供良好的免疫保护，可作为安全有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。

公开(公告)号：CN116870145A

公开(公告)日：2023-10-13

申请号：CN202310648279.3

申请日：2023-06-02

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  茹毅 ,  刘华南 ,  郭建宏 ,  田宏 ,  曹伟军 ,  卢炳州 ,  杨帆 ,  申超超 ,  张伟 ,  李亚军 ,  杨洋 ,  郝荣增 ,  朱紫祥 ,  石正旺 ,  张克山 ,  何继军 ,  靳野 ,  李丹 ,  毛箬青 ,  张贵财 ,  党文 ,  马旭升 ,  秦晓东 ,  刘湘涛

IPC: A61K39/12 ,  A61K39/385 ,  A61K9/14 ,  A61K47/34 ,  A61K47/32 ,  A61K47/36 ,  A61K47/10 ,  A61K47/42 ,  A61K47/02 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种九组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒疫苗。本发明首先提供了一种由非洲猪瘟病毒抗原P34蛋白、P30蛋白、P54蛋白、A104R蛋白、X蛋白、E165R蛋白、C129R蛋白、P72蛋白和Y蛋白组成的九组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒组合，其中至少一种抗原与纳米颗粒载体形成含有所述抗原或其抗原表位的纳米颗粒；所述九组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒组合能够刺激机体产生较强的免疫反应；制备的九组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒疫苗对亲本非洲猪瘟强毒株的攻毒具有良好的免疫保护率，无生物安全风险，突破了国内外现有非洲猪瘟亚单位疫苗无法为猪体提供有效免疫保护的难题。

公开(公告)号：CN116819075A

公开(公告)日：2023-09-29

申请号：CN202310591184.2

申请日：2023-05-24

Applicant: 中国农业科学院特产研究所 ,  中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 白雪 ,  郑海学 ,  田宏 ,  石正旺 ,  张成琪 ,  孙亚杰 ,  胡博 ,  李双双 ,  刘佳佳 ,  许丽文

IPC: G01N33/569 ,  C12N5/20 ,  G01N33/543 ,  G01N33/533 ,  G01N33/577 ,  C07K16/08

Abstract: 本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种用于检测犬细小病毒的荧光试纸条及杂交瘤细胞、单克隆抗体和应用。本发明的试纸条在结合垫内包被有荧光微球标记犬细小病毒单克隆抗体和荧光标记兔IgG；在硝酸纤维素膜表面上设置有检测线和质控线，在检测线内包被有犬细小病毒单克隆抗体，在质控线内包被有兔抗IgG；其中，犬细小病毒单克隆抗体为采用保藏号为C202355的杂交瘤细胞分泌得到。本发明的试纸条可用于同时检测猫细小病毒、犬细小病毒以及犬细小病毒的各基因型，具有较高的灵敏度和特异性，并且具有准确、快速且简便的技术优势。

公开(公告)号：CN116589538A

公开(公告)日：2023-08-15

申请号：CN202310373357.3

申请日：2023-04-10

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  茹毅 ,  刘华南 ,  郭建宏 ,  田宏 ,  曹伟军 ,  卢炳州 ,  杨帆 ,  申超超 ,  张伟 ,  李亚军 ,  杨洋 ,  石正旺 ,  张克山 ,  何继军 ,  靳野 ,  李丹 ,  朱紫祥 ,  毛箬青 ,  郝荣增 ,  张贵财 ,  党文 ,  马旭升 ,  秦晓东 ,  刘湘涛

IPC: C07K14/01 ,  C07K19/00 ,  A61K39/12 ,  A61K39/295 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种七组分抗原非洲猪瘟亚单位疫苗。本发明首先提供了一种由非洲猪瘟病毒P34蛋白、P30蛋白、P54蛋白、A104R蛋白、X蛋白、C129R蛋白和Y蛋白组成的非洲猪瘟病毒抗原蛋白组合，所述非洲猪瘟病毒抗原蛋白组合能够产生较强的免疫反应；其次本发明制备了包含上述非洲猪瘟病毒抗原蛋白组合的七组分抗原非洲猪瘟亚单位疫苗，所述七组分抗原非洲猪瘟亚单位疫苗对亲本非洲猪瘟强毒株的攻毒具有良好的免疫保护率，无生物安全风险，突破了国内外现有非洲猪瘟亚单位疫苗无法为猪体提供有效免疫保护的难题，证明了非洲猪瘟亚单位疫苗研究方案的可行性。

公开(公告)号：CN116444652A

公开(公告)日：2023-07-18

申请号：CN202310039309.0

申请日：2023-01-12

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  杨波 ,  田宏 ,  石正旺 ,  王丽娟 ,  罗俊聪

IPC: C07K16/08 ,  C07K16/00 ,  C12N15/13 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗非洲猪瘟病毒特异性单链抗体的制备方法。包括以下步骤：S1：提取猪淋巴细胞总RNA并合成cDNA，并以所述cDNA为模板，扩增组装ScFv的基因Vκ/Vλ‑linker‑VH；S2：通过同源重组反应将ScFv的基因插入到噬菌粒中，转化感受态细胞，培养、分离纯化噬菌体，获得VH‑Vκ与VH‑Vλ免疫库；S3：筛选免疫库中的特异性抗体，获得目标ScFv；S4：对S3筛选到的目标ScFv进行ELISA鉴定，获得噬菌体阳性单克隆；S5：对S4的噬菌体阳性单克隆进行表达、验证。本发明通过构建噬菌体抗体库，筛选出了具有生物活性强、结合抗原能力强的抗ASFV单链抗体。

公开(公告)号：CN116042908A

公开(公告)日：2023-05-02

申请号：CN202211003354.2

申请日：2022-08-19

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  田宏 ,  石正旺 ,  罗俊聪 ,  万颖 ,  周改静 ,  廖焕陈 ,  周静 ,  张成琪 ,  张晓阳

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种用于快速检测非洲猪瘟病毒的RPA扩增与测流层析免疫试纸条相结合的试剂盒。该试剂盒包含用于检测非洲猪瘟病毒的引物以及探针，其中所述的引物由上游引物和下游引物组成，该试剂盒中还包含用于检测非洲猪瘟病毒的扩增混合酶，该混合酶中含有UNG酶。与现有技术相比，本发明为ASFV的分子诊断提供了一个快速、简便、准确的检测试剂，特别是具有对仪器设备要求低，只需要一个恒温水浴锅或者恒温装置，检测速度快，约30min即可，不仅适用于科研单位定量分析，而且适合于各级防控单位，基层兽医站，大中型养殖场等的病原检测分析，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN113278066B

公开(公告)日：2021-12-14

申请号：CN202110573254.2

申请日：2021-05-25

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  曹丽艳 ,  田宏 ,  王琦 ,  孔祥雨 ,  宋锐 ,  石正旺

IPC: C07K16/08 ,  C12N15/13 ,  C12N15/85 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  A61K39/42 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种全猪源非洲猪瘟病毒单克隆抗体及其制备的方法和应用。所述单克隆抗体包括重链恒定区、重链可变区、轻链恒定区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:5所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:6所示。本发明的特异性针对非洲猪瘟病毒的全猪源单克隆抗体，保留了轻链、重链可变区的天然配对，具有基因多样性好、全猪源、抗体亲和力好、特异性强等优势，可在真核表达系统中进行高效表达。本发明为开发非洲猪瘟病毒诊断试剂盒提供了新型原材料，也为研制全猪源单克隆抗体的预防与治疗性药物提供了新的技术支持。

公开(公告)号：CN112500478B

公开(公告)日：2021-07-16

申请号：CN202011452597.5

申请日：2020-12-12

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  王丽娟 ,  田宏 ,  石正旺 ,  罗俊聪 ,  杨波 ,  张克山 ,  茹毅 ,  李丹 ,  杨帆

IPC: C07K16/08 ,  C12N15/13 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  G01N33/569 ,  A61K39/42 ,  A61P31/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ6及其制备方法。ScFv抗体VH‑VLλ6的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体，转化BL21（DE3）感受态细胞，筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ6，对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ6进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。

公开(公告)号：CN113092753A

公开(公告)日：2021-07-09

申请号：CN202110364113.X

申请日：2021-04-03

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  田宏 ,  万颖 ,  石正旺 ,  罗俊聪 ,  彭高闯 ,  王丽娟 ,  茹毅 ,  麻园 ,  周改静 ,  宋锐

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种用于全程监测非洲猪瘟病毒抗体的胶体金双联检测试纸条及其制备方法，所述试纸条包括PVC底板，所述的PVC底板上从左到右依次设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述结合垫包被胶体金标记的ASFV p30蛋白和ASFV p72蛋白，所述检测线包被ASFV p72和ASFV p30蛋白，所述质控线C包被抗ASFV p30蛋白单克隆抗体和/或抗ASFV p72蛋白单克隆抗体；本发明通过优化结合垫的制备，实现了非洲猪瘟病毒抗体的全程监控，相比于单个的p30或p72试纸条可以更加准确的获悉机体的感染时期，同时结合其特异性好、灵敏性较高，有望成为非洲猪瘟抗体的现场或者实验室检测的技术手段，为非洲猪瘟的精确、快速诊断提供一种新思路。

公开(公告)号：CN111560069B

公开(公告)日：2021-07-02

申请号：CN202010412676.7

申请日：2020-05-15

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  王丽娟 ,  田宏 ,  石正旺 ,  罗俊聪 ,  杨帆

IPC: C07K16/08 ,  C12N15/13 ,  C12N15/70 ,  G01N33/569 ,  G01N33/68 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒的单链抗体及其制备方法和用途，本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离到的淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至pET‑30a载体，转化BL21感受态细胞，从转化后的单个菌落中筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体(VH‑VLκ6)，采用ELISA试验对筛选得到的ScFv抗体(VH‑VLκ6)进行初步活性鉴定，表明此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供了新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术手段。