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公开(公告)号：CN116536278A
公开(公告)日：2023-08-04
申请号：CN202310488497.5
申请日：2023-05-04
Applicant: 东北林业大学
IPC: C12N9/00 , C12N15/52 , C12N15/113 , C12N15/70 , C12N15/87 , A01K67/033 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种柳蝙蛾液泡ATP酶A亚基(PeV‑ATPase A)基因、其dsRNA及其合成方法和抗虫性应用，通过转录组分析，设计并合成PeV‑ATPase A基因开放阅读框的特异性引物对SEQ ID NO：4和SEQ ID NO:5，经过基因克隆获得PeV‑ATPase A基因序列，核苷酸序列为SEQ ID NO：1，氨基酸序列为SEQ ID NO:2，然后选择序列为SEQ ID NO：3的基因片段为RNAi靶序列，设计并合成带有酶切位点的引物对SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7，PCR扩增，构建原核表达载体并诱导dsRNA表达。通过对柳蝙蛾幼虫进行dsRNA的饲喂，干扰PeV‑ATPase A基因的表达，柳蝙蛾幼虫出现进食障碍死亡等异常表型，靶标基因表达量显著降低，幼虫死亡率升高。本发明为林业柳蝙蛾的害虫防治提供高效性、特异性和安全性的广泛应用前景。
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公开(公告)号：CN114703188B
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202210336613.7
申请日：2022-03-31
Applicant: 东北林业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/10 , C12N15/70 , C12N15/84 , A01H5/00 , A01H6/00 , C12Q1/6897
Abstract: 本发明涉及一种水曲柳U6基因启动子proFmU6.6及其克隆与应用。本发明首次成功克隆了水曲柳RNA聚合酶Ⅲ型启动子——水曲柳内源U6基因启动子proFmU6.6，并成功构建了水曲柳U6基因启动子活性检测载体，通过瞬时转化水曲柳幼苗、GUS染色及gus基因转录表达验证，证明该启动子具有高效转录活性。实验证明四种水曲柳U6基因截短启动子proFmU6.6.1、proFmU6.6.2、proFmU6.6.3、proFmU6.6.4均有启动活性，并成功在CRISPR/Cas9系统中应用。水曲柳U6基因启动子proFmU6.6克隆及启动子活性的表达分析，为研究水曲柳及近缘植物的转化研究提供了高效的启动子序列，也可以实现对水曲柳高效精准的种质创新与品种遗传改良。
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公开(公告)号：CN113046386A
公开(公告)日：2021-06-29
申请号：CN202110311143.4
申请日：2021-03-24
Applicant: 东北林业大学
Abstract: 本发明公开了一种水曲柳高效遗传转化方法，选取水曲柳种子浸泡24h，去掉外种皮，表面消毒后进行预培养，在预培养时加柠檬酸钾，将预培养之后的成熟合子胚子叶部分及胚根部分切去，剩余的下胚轴放入WY4培养基中，密封好后，放入超声波清洗机中超声90s，把WY4培养基倒掉，将下胚轴与OD600＝0.6的农杆菌菌液混合后密封好，放入真空装置中，真空泵开启后约3min，真空压力达到0.8Mpa，在此压力下持续10‑15min，关闭真空泵开关，打开阀门，2min后恢复为标准大气压，在超净工作台中将下胚轴取出，无菌滤纸吸去多余菌液后，将下胚轴接入不定芽诱导培养基中，之后按照常规方法进行共培养、脱菌、选择培养、PCR检测，确定转基因植株。该方法的建立，一方面可用于提高水曲柳的转化效率，达到遗传转化的要求；其次，可以用于水曲柳遗传转化辅助育种；第三，也可以通过遗传转化筛选突变体，获得优良品种。
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公开(公告)号：CN104651238B
公开(公告)日：2017-06-16
申请号：CN201510054540.2
申请日：2015-02-02
Abstract: 本发明公开了一株尾孢属内生真菌菌株及其应用。该产生次生代谢产物的真菌是尾孢属(Cercospora sp.nov.)WDL2，在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 2014518。本发明提供的尾孢属WDL2(Cercospora sp.nov.WDL2)CCTCC NO：M 2014518菌丝体生长速率为0.22g/d，其菌丝体(干重)中多糖、黄酮、总三萜和总酚的含量分别为74.452mg/g、1.250mg/g、4.395mg/g和3.343mg/g，将尾孢属WDL2(Cercospora sp.nov.WDL2)CCTCC NO：M 2014518在最适摇瓶发酵条件下发酵培养10天其发酵液中黄酮、总三萜和总酚的含量分别为0.668mg/L、0.633mg/L和2.124mg/L。表明该菌株能产生多糖、黄酮、总三萜和总酚，在生产活性药用成分方面具有重要应用。
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公开(公告)号：CN104031970B
公开(公告)日：2017-01-25
申请号：CN201410260611.X
申请日：2014-06-12
IPC: C12P33/00
Abstract: 本发明属于生物工程领域，具利用体涉及一种SNP提高白桦细胞中白桦三萜和齐墩果酸含量的方法。以白桦花药悬浮细胞为实验材料，按50g/L接种量接种于100mL B5液体培养基中，培养条件为：120rpm，25℃，光照强度2000lx，光周期16h，湿度40％～50％，培养周期为10d。培养基成分为B5基本培养基，附加激素及浓度为0.2mg/L6-BA和0.6mg/L TDZ，蔗糖20g/L，酸水解酪蛋白1g/L，pH5.5～6.0，121℃高温高压灭菌20min。在细胞悬浮培养第8天加入SNP使其终浓度为1mmol/L，培养12h后收获，齐墩果酸含量最高为1.3089mg/gDW，是对照组的569％。培养48h收获，细胞内总三萜含量达到23.86mg/gDW，为对照组的143.20％。该申请发明为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产白桦三萜和齐墩果酸药物提供了一种新途径。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102907318B
公开(公告)日：2015-09-09
申请号：CN201110217125.6
申请日：2011-08-01
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明主要提供一种高效无性快繁三七再生植物的方法利--用生物反应器大量培养三七体细胞胚。从不定根诱导获得的三七胚性愈伤组织增殖后，在含有0.5mg/L 2，4-D的MS条件下，100％的愈伤组织都产生了球形体细胞胚，且产生的体细胞胚数量最多。10.0g(约1.65×104个)球形胚培养在3L生物反应器内，反应器内装有1.5L不加任何植物生长调节剂的1/2MS液体培养基，空气通入量为0.15vvm。4周后球形胚都发育为子叶体细胞胚，且生物生长量增加约为原来的8倍。液体或固体培养获得的子叶体细胞胚在含加有2.0mg/LGA3的1/2MS培养基中萌发成正常体细胞胚苗，继而在不含任何植物生长调节剂的1/2MS培养基中继代。生长良好的幼苗移栽入装有人工土壤(泥煤苔和泥质岩(3∶1，v∶v))的营养杯中，温室训化成活率较高。
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公开(公告)号：CN104031970A
公开(公告)日：2014-09-10
申请号：CN201410260611.X
申请日：2014-06-12
IPC: C12P33/00
Abstract: 本发明属于生物工程领域，具利用体涉及一种利用SNP提高白桦细胞中白桦三萜和齐墩果酸含量的方法。以白桦花药悬浮细胞为实验材料，按50g/L接种量接种于100mL B5液体培养基中，培养条件为：120rpm，25℃，光照强度2000lx，光周期16h，湿度40％～50％，培养周期为10d。培养基成分为B5基本培养基，附加激素及浓度为0.2mg/L6-BA和0.6mg/L TDZ，蔗糖20g/L，酸水解酪蛋白1g/L，pH5.5～6.0，121℃高温高压灭菌20min。在细胞悬浮培养第8天加入SNP使其终浓度为1mmol/L，培养12h后收获，齐墩果酸含量最高为1.3089mg/gDW，是对照组的569％。培养48h收获，细胞内总三萜含量达到23.86mg/gDW，为对照组的143.20％。该申请发明为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产白桦三萜和齐墩果酸药物提供了一种新途径。
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公开(公告)号：CN102851347B
公开(公告)日：2013-12-18
申请号：CN201210242981.1
申请日：2012-07-13
Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，是硫化氢（H2S）促进次生代谢物合成的一种新用途。其特征在于：（1）H2S有效促进了桑黄菌丝的生长和菌丝中白桦酯醇的合成；（2）H2S有效促进了筋骨草悬浮细胞生长和细胞中蜕皮激素的合成。本发明为促进次生代谢物合成提供了一种新的诱导子。
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公开(公告)号：CN103436485A
公开(公告)日：2013-12-11
申请号：CN201310372816.2
申请日：2013-08-23
Abstract: 本发明提供一氧化碳（CO）的一种用途，所述用途为CO提高了桑黄菌丝中白桦酯醇和筋骨草悬浮细胞中蜕皮激素的含量。将5～25μmol/L和8～20μmol/L的CO供体氯高铁血红素分别添加到桑黄菌丝和筋骨草悬浮培养体系中，处理4d后收获处理材料，采用高效液相色谱分析白桦酯醇和蜕皮激素含量发现，10μmol/L氯高铁血红素处理桑黄菌丝4d时，白桦酯醇含量和产量分别比对照增加了6.10倍和6.48倍；12μmol/L氯高铁血红素处理筋骨草悬浮细胞4d时，蜕皮激素含量是对照组的1.50倍。同时发现氯高铁血红素促进了桑黄菌丝的生长，15μmol/L处理下的菌丝干重值比对照增加了10.62%。可见，该发明为促进次生代谢物的合成提供了一种新的诱导子。
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公开(公告)号：CN102907318A
公开(公告)日：2013-02-06
申请号：CN201110217125.6
申请日：2011-08-01
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明主要提供一种高效无性快繁三七再生植物的方法利--用生物反应器大量培养三七体细胞胚。从不定根诱导获得的三七胚性愈伤组织增殖后，在含有0.5mg/L 2，4-D的MS条件下，100％的愈伤组织都产生了球形体细胞胚，且产生的体细胞胚数量最多。10.0g(约1.65×104个)球形胚培养在3L生物反应器内，反应器内装有1.5L不加任何植物生长调节剂的1/2MS液体培养基，空气通入量为0.15vvm。4周后球形胚都发育为子叶体细胞胚，且生物生长量增加约为原来的8倍。液体或固体培养获得的子叶体细胞胚在含加有2.0mg/LGA3的1/2MS培养基中萌发成正常体细胞胚苗，继而在不含任何植物生长调节剂的1/2MS培养基中继代。生长良好的幼苗移栽入装有人工土壤(泥煤苔和泥质岩(3∶1，v∶v))的营养杯中，温室训化成活率较高。
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