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公开(公告)号：CN113789307B
公开(公告)日：2023-08-18
申请号：CN202111060492.X
申请日：2021-09-10
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种泛酸合成酶突变体、编码基因、载体及应用，属于酶工程技术领域。本发明的泛酸合成酶突变体泛酸合成酶突变体，由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的泛酸合成酶的第5位和/或第176位氨基酸经定点突变获得。本发明通过多序列氨基酸比对，进行定点突变，提高泛酸合成酶的催化效率，进一步提高泛酸合成酶产量。本发明构建的泛酸合成酶的重组大肠杆菌可将泛酸合成酶酶活较出发菌株提高1.25倍。改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，摇瓶发酵生产泛酸合成酶酶活达到144.266U/mL，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
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公开(公告)号：CN116355942A
公开(公告)日：2023-06-30
申请号：CN202310156721.0
申请日：2023-02-23
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，公开了一种恶臭假单胞菌自杀载体的构建方法及其应用。本发明提供的恶臭假单胞菌自杀载体的构建方法以pK18mobsacB载体为模板，扩增得到载体骨架，然后将以恶臭假单胞菌KT2440菌液为模板扩增得到强启动子Prib、待敲除基因x的上、下游同源臂连接于载体骨架上得到恶臭假单胞菌自杀载体。强启动子Prib可以使sacB蔗糖酶在恶臭假单胞菌中的表达量增多，增强蔗糖致死效应。将得到的恶臭假单胞菌自杀载体导入恶臭假单胞菌中后，即可以通过卡那霉素正向筛选和蔗糖负向筛选，高效准确地获得待敲除靶基因缺失的菌株。
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公开(公告)号：CN116179382A
公开(公告)日：2023-05-30
申请号：CN202211301011.4
申请日：2022-10-24
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种赤藓糖醇的基因工程菌株及其构建方法，以及其在微生物发酵制备赤藓糖醇中的应用。本发明在解脂耶氏酵母中引入木糖还原酶、木糖醇脱氢酶以及木糖醇激酶重塑了木糖代谢途径，强化赤藓糖醇生物生成途径中转酮酶TKL1、转醛酶TAL、赤藓糖还原酶ER的表达，通过敲除甘露糖醇脱氢酶MDH和阿拉伯糖醇脱氢酶ArDH来减少副产物甘露糖醇和阿拉伯糖醇的生成，通过敲除赤藓糖醇脱氢酶EYD减少赤藓糖醇转化为其他物质削弱赤藓糖醇的积累，通过强化糖摄取途径基因己糖激酶HK、转运蛋白Stp1和Stp2的表达，最后可利用葡萄糖和木糖混合碳源的赤藓糖醇高产菌，产量从50.17g/L提高到195.56g/L，为以木糖为底物合成赤藓糖醇工业化生产提供了优良菌株来源，具有很好的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN113832205A
公开(公告)日：2021-12-24
申请号：CN202111085830.5
申请日：2021-09-16
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江天台药业股份有限公司
Abstract: 本发明涉及一种发酵罐生产两性霉素B的分批补料发酵方法。本发明分阶段发酵调控策略能够提供结节链霉菌一个最佳的菌体生长和产物合成的外部环境，有利于两性霉素B的积累；采用本发明发酵方法，两性霉素B在温度在31℃，发酵溶氧维持在20％，发酵液残糖控制在0.5～1％时，最终两性霉素B在50吨发酵罐中产量为14g/l左右。
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公开(公告)号：CN113789307A
公开(公告)日：2021-12-14
申请号：CN202111060492.X
申请日：2021-09-10
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种泛酸合成酶突变体、编码基因、载体及应用，属于酶工程技术领域。本发明的泛酸合成酶突变体泛酸合成酶突变体，由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的泛酸合成酶的第5位和/或第176位氨基酸经定点突变获得。本发明通过多序列氨基酸比对，进行定点突变，提高泛酸合成酶的催化效率，进一步提高泛酸合成酶产量。本发明构建的泛酸合成酶的重组大肠杆菌可将泛酸合成酶酶活较出发菌株提高1.25倍。改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，摇瓶发酵生产泛酸合成酶酶活达到144.266U/mL，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN119570827A
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202411797399.0
申请日：2024-12-09
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明提供了一种基于细胞分裂辅助工程构建高产D‑泛酸的基因工程菌、构建方法及应用。本发明通过：(1)敲除大肠杆菌分裂负调节系统minC、minD；(2)敲除控制细胞壁上的酰胺酶调控因子nlpD；(3)敲除DNA复制影响因子rstA；(4)过表达来自铜绿假单胞菌的GTP水解促进因子sulA；(5)利用动态启动子控制ftsQAZ，在不影响菌株生长的情况下改变菌株细胞分裂的模式，减少菌株繁殖消耗的能量，从而更多的能量流向D‑泛酸的生产，使菌株D‑泛酸的产量达到了8.88g/L。
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公开(公告)号：CN119530121A
公开(公告)日：2025-02-28
申请号：CN202411880677.9
申请日：2024-12-19
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，公开了一种基因工程菌及全细胞催化生产淫羊藿素的方法。本发明通过构建双质粒，使得在大肠杆菌中同时过表达胆碱激酶、异戊烯基磷酸激酶、黄酮3‑羟化酶、黄酮醇合酶、异戊烯基转移酶和氧甲基转移酶，从而构建基因工程菌，将该工程菌作为全细胞催化剂，将柚皮素和3‑甲基‑2‑丁烯‑1‑醇作为底物通过全细胞催化的方式转化为淫羊藿素，只需一步反应，简单快捷，效率高，转化的过程中不用额外添加其它化学物质，降低了成本，减轻了对环境的污染，实现了从低价的柚皮素到高附加值淫羊藿素的生物法生产。
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公开(公告)号：CN119307430A
公开(公告)日：2025-01-14
申请号：CN202411459170.6
申请日：2024-10-18
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及一种高效生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸的基因工程菌的构建方法及其应用。所述构建方法具体如下步骤：（1）以菌株Escherichia coli W3110为底盘，敲除高丝氨酸O‑琥珀酰转移酶编码基因metA；（2）敲除γ‑胱硫醚合成酶编码基因metB；（3）敲除半胱硫氨酸裂解酶编码基因metC；（4）弱化表达来自海洋环杆菌的O‑乙酰‑L‑高丝氨酸硫解酶编码基因metYcm；（5）过表达来自细长聚球藻的核酮糖二磷酸羧化酶编码基因rbcLSse；（6）过表达来自细长聚球藻的磷酸核酮糖激酶编码基因prkse；（7）弱化柠檬酸合酶编码基因gltA的表达，即得所述高效生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸的基因工程菌。本发明提供的菌株进行O‑乙酰‑L‑高丝氨酸生产，具有高产量、产率、糖酸转化率。
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公开(公告)号：CN119286621A
公开(公告)日：2025-01-10
申请号：CN202411414854.4
申请日：2024-10-11
Applicant: 浙江工业大学
IPC: C12M1/21 , C12N15/52 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/56 , C12N15/60 , C12N9/10 , C12N9/04 , C12N9/88 , C12N9/00 , C12N9/24 , C12P13/04 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及微生物发酵技术领域，公开了一种高产D‑泛酸的基因工程菌及其制备方法与应用。本发明通过以下作用使工程菌的D‑PA产量大大提高：将丙酮酸分流的乙酰乳酸合酶IlvB、IlvN进行过表达，同时删除了转录衰减区，突变了缬氨酸反馈抑制位点；过表达酮醇酸还原异构酶IlvC与二羟基酸脱水酶IlvD，并将IlvC辅酶偏好性从NADPH转为NADH，打通D‑PA合成的上游；过表达PanB，过表达丝氨酸‑甘氨酸转运系统，促进5,10‑亚甲基四氢叶酸的合成；同时，强化酮泛解酸还原酶PanE的表达；最后过表达泛酸合成酶PanC，并提升PanC所需辅因子ATP的含量。本发明提供的工程菌通过上述多模块的整体强化，细胞生长因辅因子的平衡和D‑PA的增加而得到提升，D‑PA产量更是达到了前所未有的高度。
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公开(公告)号：CN118240672A
公开(公告)日：2024-06-25
申请号：CN202410565671.6
申请日：2024-05-09
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种产棘白菌素B的基因工程菌及其构建方法和应用。该基因工程菌的基因组中整合了透明颤菌菌血红蛋白的表达框，从而避免了发酵过程高粘度、低溶氧造成的菌株性能差的问题。整合至基因组的表达框由构巢曲霉启动子、透明颤菌血红蛋白基因和构巢曲霉终止子连接构成。本发明构建的构巢曲霉高效表达透明颤菌血红蛋白可以使棘白菌素B的产量提升，并且经过多次传代，发酵性能仍维持稳定；本申请获得的构巢曲霉基因工程菌，可增强构巢曲霉发酵生产棘白菌素B的氧供应，使得棘白菌素B的产量可提升22.8％，为棘白菌素B的强化合成提供了新思路。
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