公开(公告)号：CN102787121A

公开(公告)日：2012-11-21

申请号：CN201210195421.5

申请日：2012-06-14

Applicant: 浙江大学

Inventor： 陈昆松 ,  殷学仁 ,  刘小芬 ,  徐昌杰

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/10 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/66 ,  C12N15/84

Abstract: 本发明提供一种转录因子基因功能验证的方法，利用拟南芥中调控花青苷合成的bHLH于构建转录本信息库，并进行电子克隆，得到可调控杨梅花青苷合成的MrbHLH1和MrbHLH2全长序列，再对电子克隆到的序列作验证，利用实时荧光定量PCR技术分析该基因在杨梅果实发育过程中的表达模式，应用烟草叶片双萤光素酶瞬时表达技术分析该基因与已确认的可调控杨梅花青苷合成的MrMYB1和MrMYB1d转录因子的互作，及这四个转录因子与花青苷合成关键结构基因DFR启动子的互作，根据互作结果即可判断转录因子是否具有调控杨梅花青苷合成的功能。本方法同样适用于杨梅以外的植物，以及其他转录基因。

公开(公告)号：CN102732536A

公开(公告)日：2012-10-17

申请号：CN201210195422.X

申请日：2012-06-14

Applicant: 浙江大学

Inventor： 殷学仁 ,  闵婷 ,  陈昆松 ,  孙崇德

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/10 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/82

Abstract: 本发明提供一种柿子脱涩相关基因的克隆与瞬时表达方法，通过先获得基因3’端序列，再通过3'RACE技术获得柿果实中ADH和PDC基因家族成员3’端序列；采用Q-PCR技术分析ADH和PDC基因家族成员在柿果实脱涩处理中的基因表达；分离得到柿果实中ADH和PDC基因家族成员全长序列，然后建立柿叶片瞬时表达体系。本发明方法是克隆出柿子脱涩相关的基因家族成员，分析这些家族成员在柿子脱涩处理中的表达模式，最后通过柿子叶片的瞬时表达验证目的基因的功能，从分子机制上阐明了柿子采后脱涩的调控机制，有利用进一步开展柿子采后脱涩机制的转基因，基因互作等功能验证研究。