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公开(公告)号：CN106544360A
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201610905097.X
申请日：2016-10-17
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明提供了一种终止lncRNA双等位基因转录的方法，包括以下步骤：1)构建分别含有两种不同抗生素筛选基因的CMV‑抗生素筛选基因‑PolyA DNA片段；2)根据不同靶向基因设计gRNA，构建Cas9/gRNA表达载体；3)在靶向基因中插入步骤1)中所得的CMV‑抗生素筛选基因‑PolyA DNA片段，构建含有靶向基因的同源重组载体；4)导入细胞：将步骤3)中所获得的含有靶向基因的一对同源重组载体，以及步骤2)中所获得的含有靶向基因的Cas9/gRNA表达载体共转染细胞；5)使用步骤1)中所使用的相关抗生素筛选至少2周，获取lncRNA双等位基因被敲除的多克隆细胞株；该方法可以实现以达到在高效定点插入的同时，快速获得lncRNA双等位基因同时敲除的细胞株的目的。
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公开(公告)号：CN105524941A
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201610035065.9
申请日：2016-01-19
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/85
CPC classification number: C12N15/8509 , A01K2267/02 , C12N2800/106 , C12N2800/60 , C12N2800/90 , C12N2830/008
Abstract: 本发明提供了一种特异于禽类原始生殖细胞的基因转移系统和方法。该基因转移系统包括含有具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的vasa启动子的转座酶辅助质粒。该基因转移方法包括：(1)使用生物工程方法，构建含有vasa启动子或者含有vasa启动子和通用增强子元件的转座酶辅助质粒；(2)使用生物工程方法，构建含有需要转移的目的基因表达盒的转座子供体质粒；(3)提取质粒后，将上述转座子供体质粒和转座酶质粒按1:2比例混合均匀，调整其终浓度为500ng—1.5μg/μL；(4)将步骤(3)中所得的混合质粒使用包埋剂包裹后，转染禽类早期胚胎血液中PGCs细胞。通过本发明，可以实现外源基因在禽类胚胎PGCs基因组中高效特异整合，从而达到提高转基因禽的制备效率的目的。
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公开(公告)号：CN111394435B
公开(公告)日：2022-04-15
申请号：CN202010415742.6
申请日：2020-05-16
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及一种反义RNA ch‑MYC‑AS1表达检测的引物及试剂盒，属于分子生物学领域。所述引物包括链特异性RT引物和荧光定量PCR检测引物；其中链特异性RT引物的序列如SEQ ID NO.8所示；荧光定量PCR检测引物的序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。本研究发明还提供了ch‑MYC‑AS1表达检测试剂盒，为ch‑MYC‑AS1表达规律分析提供了方法和基础。
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公开(公告)号：CN113234759A
公开(公告)日：2021-08-10
申请号：CN202110552148.6
申请日：2021-05-20
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种NAMPT基因修饰的人脐带间充质干细胞外泌体的制备方法，包括以下步骤：1）、针对人AAVS1位点设计sgRNA并构建sgRNA‑CAG‑hCas9载体；2）、将sgRNA‑CAG‑hCas9载体转染至293T细胞验证sgRNA切割效率；3）、构建含NAMPT基因、抗性基因neo、转录终止序列BGH polyA、启动子EF‑1A重组载体；4）、将步骤2）中切割效率好的sgRNA‑CAG‑hCas9载体与步骤3）中构建的重组载体共转染间充质干细胞，G418筛选得到稳转细胞系；5）、收集高表达NAMPT稳转细胞系培养基，利用外泌体试剂盒提取，得到高表达NAMPT基因的人脐带间充质干细胞外泌体。通过本发明，较于慢病毒构建方法更加安全。
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公开(公告)号：CN111575288A
公开(公告)日：2020-08-25
申请号：CN202010415739.4
申请日：2020-05-16
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/11 , C12N15/10 , C12N15/63 , A61K48/00 , A61K31/7088 , A61P35/00 , A61P35/02
Abstract: 本发明涉及动物病毒学、免疫学、肿瘤学和表观遗传学研究领域，提供了一种抑制鸡c-myc基因表达和J亚群禽白血病病毒增殖的ch-MYC-AS1及其应用。该RNA来源于鸡2号染色体基因组中原癌基因c-myc衍生的反义RNA，采用RACE和PCR克隆技术鉴定后，将其命名为ch-MYC-AS1，其cDNA具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。本发明通过构建ch-MYC-AS1过表达载体质粒，体外实验显示ch-MYC-AS1可以抑制鸡原癌基因c-myc表达和J亚群禽白血病病毒增殖。本研究发明不仅提供了抵抗禽白血病病毒和抑制原癌基因c-myc表达的新手段，也为禽白血病病毒的防控提供了新思路。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111534594A
公开(公告)日：2020-08-14
申请号：CN202010415743.0
申请日：2020-05-16
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6886 , C12Q1/6841 , C12N15/11 , G01N33/68
Abstract: 本发明涉及一种反义RNA ch-MYC-AS1FISH检测试剂盒的制备及其应用，属于分子生物学领域。引物组由序列为SEQ ID NO.1-20所示的20条引物组，反义RNA ch-MYC-AS1的 FISH检测试剂盒，包括FISH探针、杂交液和染色液；FISH探针序列如SEQ ID NO.1-20示；共定位分析实验显示ch-MYC-AS1与HuR蛋白在细胞核中存在共定位现象。本研究发明不仅提供了ch-MYC-AS1 FISH检测手段，也为ch-MYC-AS1作用机制研究提供了方法基础。
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公开(公告)号：CN107447040B
公开(公告)日：2020-07-31
申请号：CN201710884183.1
申请日：2017-09-26
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6841 , C12Q1/6804 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，具体是涉及一种长链非编码RNA lnc‑ALVE1‑AS1FISH的FISH检测探针及试剂盒。所述探针由序列为SEQ ID NO.1‑48所示的48条序列组成。进一步公开了该探针在制备lnc‑ALVE1‑AS1FISH定位和共定位检测试剂盒中的应用。共定位分析实验显示lnc‑ALVE1‑AS1与Toll样受体3蛋白在细胞质中存在共定位现象。本研究发明不仅提供了lnc‑ALVE1‑AS1FISH检测手段，也为lnc‑ALVE1‑AS1作用机制研究提供了方法基础。
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公开(公告)号：CN111363828A
公开(公告)日：2020-07-03
申请号：CN202010415746.4
申请日：2020-05-16
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6886 , C12Q1/6841 , C12N15/11 , G01N33/68
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，具体是涉及一种长链非编码RNAMYC-AS1的FISH检测引物、试剂盒。共定位分析实验显示MYC-AS1与HuR蛋白在细胞质和核膜中存在共定位现象。本研究发明不仅提供了MYC-AS1 FISH检测手段，也为MYC-AS1作用机制研究提供了方法基础。
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公开(公告)号：CN107502611B
公开(公告)日：2020-01-03
申请号：CN201710881948.6
申请日：2017-09-26
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/10 , C12N15/63 , C12N15/11 , A61K31/7105 , A61K48/00 , A61P37/04 , A61P31/14
Abstract: 本发明涉及动物病毒学、免疫学、表观遗传学和新型免疫增强剂开发领域，提供了一种抗J亚群禽白血病病毒增殖的内源性反转录病毒RNA及其制备方法和应用。该RNA来源于鸡1号染色体基因组中内源性反转录病毒ALVE1衍生的反义长链非编码RNA，采用RACE和PCR克隆技术鉴定后，将其命名为lnc‑ALVE1‑AS1，其cDNA具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。本发明通过构建lnc‑ALVE1‑AS1过表达载体质粒，体外实验显示lnc‑ALVE1‑AS1可激活细胞抗病毒干扰素应答反应并抑制J亚群禽白血病病毒增殖。本研究发明不仅提供了抵抗禽白血病病毒的新手段，也为禽白血病病毒的防控提供了新思路。
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公开(公告)号：CN106520829B
公开(公告)日：2019-12-17
申请号：CN201610903540.X
申请日：2016-10-17
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明提供了一种终止双等位基因转录的方法，包括以下步骤：1)构建分别含有两种不同抗生素筛选基因的SA‑T2A‑抗生素筛选基因‑PolyA DNA片段；2)根据不同靶向基因设计gRNA，构建Cas9/gRNA表达载体；3)在靶向基因中插入步骤1)中所得的SA‑T2A‑抗生素筛选基因‑PolyA DNA片段，构建含有靶向基因的同源重组载体；4)导入细胞：将步骤3)中所获得的含有靶向基因的一对同源重组载体，以及步骤2)中所获得的含有靶向基因的Cas9/gRNA表达载体共转染细胞；5)使用步骤1)中所使用的抗生素基因的相关抗生素筛选至少2周，获取双等位基因被敲除的多克隆细胞株；该方法可以实现以达到在高效定点插入的同时，快速获得双等位基因同时敲除的细胞株的目的。
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