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公开(公告)号：CN107815502B
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN201711176758.0
申请日：2017-11-23
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及一种鉴定菊花耐涝性的dCAPS标记开发方法及应用，属于生物技术领域，该方法包括以下几个步骤：a、通过GWAS方法挖掘与菊花耐涝性显著关联的SNP位点；b、SNP突变位点特异性酶切位点分析及dCAPS引物设计；c、结合基因型与表型数据预期酶切扩增多态性；d、dCAPS标记在自然耐涝极端群体的验证；e、在F1后代耐涝极端群体中对WT‑dCAPS1标记进行进一步验证。本发明开发了一个与菊花耐涝性状共分离的dCAPS共显性标记，命名为WT‑dCAPS1，在两个群体的平均鉴定准确率为78.9％，初步认为可以应用于菊花耐涝性分子标记辅助育种，大大缩短育种周期，对于培育耐涝性菊花新品种具有重要的理论和实践意义。
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公开(公告)号：CN108118068B
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN201711382247.4
申请日：2017-12-20
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/82
Abstract: 本发明公开了一种高效快速的菊花转基因方法，属于菊花遗传育种及分子生物学领域。该方法包括：(1)取菊花茎段作为外植体置于预培养基上进行预培养；(2)将转化有重组表达载体的农杆菌菌液进行活化和培养，然后富集菌体，并用MS液体培养基重悬作为侵染液；(3)将步骤(1)中预培养后的外植体浸入侵染液中采用真空负压法对其进行侵染；(4)将侵染后的外植体置于预培养基上在黑暗条件下进行共培养；之后在脱羧培养基上进行脱羧培养，最后依次使用选择培养基1和选择培养基2进行选择培养，确定无农杆菌爆发后，继代至生根培养基进行进一步的生根筛选得到菊花转基因植株。与传统叶盘法菊花转基因相比，本发明显著缩短了转基因的时间，提高了菊花转基因的转化效率，减少了科研工作者的工作量，为菊花的高效转化和基因功能分析提供新途径，也为其他植物的转基因提供了新思路。
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公开(公告)号：CN108411026A
公开(公告)日：2018-08-17
申请号：CN201810483506.0
申请日：2018-05-18
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开一种菊花托桂花型分子标记辅助选择方法，所述的分子标记为SRAP分子标记或/和SCAR标记，本发明以托桂型切花小菊品种‘南农雪峰’为母本和非托桂型品种‘QX096’为父本杂交获得的80株F1分离群体为试材。用SRAP分子标记来筛选与控制托桂花型基因相连锁的特异位点。其中SRAP分子标记引物组合M11E1在托桂型菊花材料中扩增得到一条272bp的特异片段，通过设计特异SCAR分子标记引物在托桂材料中扩增出单一的168bp的条带，进一步在‘南农雪峰’בQX096’和‘南农雪峰’ב蒙白’两个群体中验证，准确率分别高达92.5％和84.3％。说明上述标记已成功转化成SCAR分子标记。该发明提高了托桂花型的选择效率，加快托桂花型菊花新品种的选育进程。
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公开(公告)号：CN106942036A
公开(公告)日：2017-07-14
申请号：CN201710283772.4
申请日：2017-04-26
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01G31/00
CPC classification number: A01G31/00
Abstract: 本发明公开了一种提高菊花插穗生根能力和种苗质量的方法和应用，属于农业高效生产技术。包括以下步骤：(1)从菊花母株上取插穗；将插穗放入生根剂溶液和杀菌剂溶液中浸泡；(2)将浸泡后的插穗扦插入育苗基质中；(3)将扦插后的插穗置于光培养箱中，调节光培养箱的环境条件进行插穗生根培养，所述光培箱内的环境条件为：光周期为16/8h，光照强度为6000‑8000lx，光照时光照培养箱内相对湿度为75％，黑暗是光照培养箱内相对湿度为95％；光照/黑暗条件下的温度为30～35/25～30℃。本发明方法有助于提高菊花种苗生产效益和推动菊花种苗产业的快速发展。
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公开(公告)号：CN103233075B
公开(公告)日：2016-02-10
申请号：CN201310170677.5
申请日：2013-05-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种基于转录组测序开发菊属植物SSR引物的方法。利用EST‐SSR的种间转移性，在转录组测序的基础上，结合Perl编程语言方法，对大量序列信息进行批量处理，进行SSR序列查找和SSR标记引物设计，克服了SSR开发效率低、耗时久、成本高等障碍。选择菊属不同种的材料对设计的SSR引物进行验证，若有条带检测出，即为成功的SSR引物。应用本方法成功地设计了1788对SSR引物，为菊属SSR引物开发进而实现分子标记辅助选择育种和比较基因组学研究提供了新的方法和思路。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104673938A
公开(公告)日：2015-06-03
申请号：CN201510100532.7
申请日：2015-03-06
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q2549/119
Abstract: 本发明属于分子生物学病毒检测领域，提供一种高灵敏度检测菊花B病毒的引物、利用该特异引物检测菊花B病毒的方法及引物的应用。其中，本方法步骤如下：1)设计针对菊花B病毒的两轮特异性引物；2)以CVB1-R为引物，对待检测菊花DNA进行反转录得到cDNA，并以步骤1)所述两轮特异性引物进行巢式PCR扩增；3)将步骤2)进行的第二轮PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，当获得381bp特异性片段时，表示待检测菊花感染菊花B病毒。本发明由于加入了特异的反转录引物进行巢式PCR，极大地提高了菊花B病毒检测灵敏度，经过验证灵敏度达到10-9ug/ul。本发明提供的方法，菊花CVB检测特异性强，工序简单，成本低廉。
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公开(公告)号：CN104372019A
公开(公告)日：2015-02-25
申请号：CN201410569007.5
申请日：2014-10-22
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，提供包括有CmWRKY48基因的重组载体、转化细胞、转CmWRKY48基因切花菊的培育、鉴定方法及应用。转CmWRKY48基因切花菊的培育方法包括如下步骤：(1)菊花CmWRKY48基因的克隆(2)植物表达载体pMDC43-CmWRKY48的构建(3)农杆菌EHA105介导叶盘法转化菊花。对转化植株进行PCR、定量RT-PCR检测证实CmWRKY48基因已整合到转基因植株基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行抗蚜性检测，转基因植株抗蚜能力有很大提高，为利用基因工程技术选育菊花抗逆品种提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。
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公开(公告)号：CN103232996B
公开(公告)日：2014-11-12
申请号：CN201310121313.8
申请日：2013-04-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种菊花分枝性状关联分子标记的获得方法，属于生物技术领域，该方法包括以下几个步骤：a、试验材料及其表型数据的获得；b、菊花连锁图谱构建；c、结合表型数据和分子遗传图谱，进行菊花分枝性状的QTL分析；d、菊花分枝性状关联分子标记的确定。本发明以‘QX‐145’（P1）为母本、‘南农银山’为父本（P2）杂交获得的92株F1分离群体为试材，获得了多个与菊花分枝性状显著关联的分子标记。菊花分枝性状关联分子标记的获得，可用于菊花分枝性状的优良基因的精细定位和克隆，大大提高选择效率，从而加快育种进程。
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公开(公告)号：CN103232996A
公开(公告)日：2013-08-07
申请号：CN201310121313.8
申请日：2013-04-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种菊花分枝性状关联分子标记的获得方法，属于生物技术领域，该方法包括以下几个步骤：a、试验材料及其表型数据的获得；b、菊花连锁图谱构建；c、结合表型数据和分子遗传图谱，进行菊花分枝性状的QTL分析；d、菊花分枝性状关联分子标记的确定。本发明以‘QX‐145’（P1）为母本、‘南农银山’为父本（P2）杂交获得的92株F1分离群体为试材，获得了多个与菊花分枝性状显著关联的分子标记。菊花分枝性状关联分子标记的获得，可用于菊花分枝性状的优良基因的精细定位和克隆，大大提高选择效率，从而加快育种进程。
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公开(公告)号：CN102676545B
公开(公告)日：2013-05-29
申请号：CN201210172706.7
申请日：2012-05-29
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/29
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及菊花‘钟山紫桂’生长素响应蛋白Aux/IAA编码基因CmIAA1表达载体构建。本发明所构建的表达载体pCAMBIA 1301-CmIAA1是由CmIAA1基因插入到克隆载体pMD19-T simple vector，经BamH I和Xba I双酶切后连接到载体pCAMBIA 1301的BamH I和Xba I位点而得到的重组质粒。将该植物表达载体用于植物遗传转化，CmIAA1基因在CaMV35S启动子的启动下超量表达，大量合成Aux/IAA蛋白，影响生长素信号途径，对植物生长发育产生负调控作用，抑制植物主根伸长，促使侧根增多，并抑制植物整体生长进度。
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