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公开(公告)号：CN113403337A
公开(公告)日：2021-09-17
申请号：CN202110521234.0
申请日：2021-05-13
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/12 , C12N15/55 , C12N5/10 , C12N15/877 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及基因编辑领域，具体涉及一种载体系统、制备猪成纤维细胞和基因编辑猪的方法。所述载体系统包括CD163基因敲除载体和MSTN基因敲除载体，所述CD163基因敲除载体包括载体骨架以及连接到该载体骨架上的核苷酸序列SEQ ID NO：1；所述MSTN基因敲除载体包括载体骨架以及连接到该载体骨架上的核苷酸序列SEQ ID NO：2。本发明载体系统和方法具有降低基因操作难度、提高敲除效率，在短时间内快速将CD163基因和MSTN基因敲除的优点。本发明方案无需药物筛选，不带有外源筛选标记，具有较为简便的细胞筛选流程。可以一次性获得双基因缺失的细胞系，大大缩短了双/多基因编辑动物的制备流程。
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公开(公告)号：CN113403259A
公开(公告)日：2021-09-17
申请号：CN202110626164.5
申请日：2021-06-04
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/073 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种提高克隆胚胎发育质量的添加剂，通过在体外克隆胚胎培养液中添加IL17D来抑制胚胎细胞的凋亡，进而提高克隆胚胎的发育质量，并应用于提高克隆胚胎发育质量、提高动物克隆技术效率领域、抑制体外培养胚胎细胞凋亡等领域，进而为更广泛地应用于畜牧生产、基因编辑研究等领域服务。
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公开(公告)号：CN113249305A
公开(公告)日：2021-08-13
申请号：CN202110624594.3
申请日：2021-06-04
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/075
Abstract: 本发明公开了一种卵母细胞体外成熟培养液添加剂及含有该添加剂的培养液，该添加剂为IL17家族中的一种或多种细胞因子。添加了IL17家族中的一种或多种细胞因子的卵母细胞体外成熟培养液可以提高卵母细胞体外成熟的质量，而卵母细胞质量的大幅度提升，对于体细胞克隆技术、孤雌胚胎技术、体外受精技术上的应用都有重要意义，对大动物克隆生产、人类辅助生殖医学、生物医学研究也意义非凡。
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公开(公告)号：CN108285906B
公开(公告)日：2021-07-09
申请号：CN201711477805.5
申请日：2017-12-29
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法，包括以下步骤：S1、安全靶点筛选及靶点绑定gRNA切割效率验证；S2、构建同源臂供体质粒，并获得定点整合转基因细胞系；S3、外源DNA定点整合转基因猪的构建。本发明在供体质粒中引入gRNA靶点序列，利用细胞内转录gRNA诱导Cas9核酸酶切割靶基因同时，线性化供体质粒，大大简化试验步骤，节约人力，且有利于提高共转染效率。本发明定点整合所用载体较少，同源臂大小适中，更有利于获得转基因细胞系，将高效定点整合技术，高活力定点转基因细胞培育技术与体细胞克隆技术结合，有利于定点整合转基因动物高效制备，加快转基因动物新品种培育速度。
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公开(公告)号：CN107227298B
公开(公告)日：2021-06-25
申请号：CN201710339889.X
申请日：2017-05-15
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种克隆胚胎处理液，由BIX‑01294和PZM培养液构成，PZM培养液中BIX‑01294的浓度为5nM～500nM；其中，PZM培养液由以下组分组成：NaCl 3.156g；NaHCO31.053g；KCl 0.373g；KH2SO40.024g；Mg SO40.049g；乳酸钙0.308g；丙酮酸0.011g；L‑谷氨酸0.073g；亚牛磺酸0.273g；BME 10mL；MEM 5mL；青霉素0.033g；链霉素0.025g；Sigma水补足定容至500mL。采用以上技术方案的克隆胚胎处理液对克隆胚胎进行培养处理可以达到以下有益效果：(1)能够显著降低细胞SUV39H1、SETdb1、DNMT1或者DNMT3a的基因表达；(2)能够明显下调胚胎早期发育阶段的2cell、4cell的H3K9me2水平。
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公开(公告)号：CN112899294A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110155858.5
申请日：2021-02-04
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/56 , C12N15/62 , C12N9/42 , C12N9/46 , C07K19/00 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N1/21 , A23L33/17 , A23L33/135 , A23K20/189 , A23K10/18 , A61K48/00 , A61K38/47 , A61P1/00
Abstract: 本发明通过把中华竹鼠肠道微生物宏转录组拼接后的核酸序列与糖苷水解酶家族比对，筛选有较高同源性的序列，去除其原有的信号肽并添加猪腮腺分泌蛋白信号肽，通过猪密码子优化后连接到pcd3.1载体上。转染到猪肾上皮细胞进行表达验证，收集其细胞培养液进行酶活分析，比较其酶活力，选择最优的HG27基因，检测其最适pH、蛋白耐受和不同底物的酶促反应。从而，获得了一种多功能酶基因HG27，其可在畜禽饲料酶制剂、转基因动物制备，食品和药品行业等领域应用，以解决纤维素难降解吸收和排泄物污染环境的问题。
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公开(公告)号：CN110117665B
公开(公告)日：2020-10-16
申请号：CN201910403266.3
申请日：2019-05-15
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于分子生物技术和分子标记技术领域，具体涉及一种位于猪16号染色体上与猪瘦肉率和眼肌面积相关的SNP分子标记及应用。所述的位于猪16号染色体上与猪瘦肉率和眼肌面积相关的SNP分子标记的SNP位点对应于国际猪参考基因组11.1版本16号染色体上第33757844bp处的A>C突变；该分子标记是通过全基因组关联分析得到，可显著影响猪100kg体重时眼肌面积和瘦肉率的性状。本发明还提供了一种用于鉴定该分子标记的引物对，利用该分子标记和引物对可建立高效准确的分子标记辅助育种技术，将其应用于猪眼肌面积和瘦肉率性状遗传改良中，从而增加猪眼肌面积和提高猪瘦肉率，提高企业利润，增加核心竞争力。
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公开(公告)号：CN110218798B
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN201910403273.3
申请日：2019-05-15
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于分子生物技术和分子标记技术领域，具体涉及一种位于猪7号染色体上与眼肌面积、眼肌厚度相关的SNP分子标记及应用。所述的位于猪7号染色体上与眼肌面积、眼肌厚度相关的SNP分子标记的SNP位点对应于国际猪基因组11.1版本参考序列7号染色体上第30342161位A>G突变。本发明还提供了一种用于鉴定上述分子标记的引物对。通过上述分子标记和引物对，可逐代筛选该SNP的优势等位基因，提高优势等位基因频率，提高猪眼肌面积和眼肌厚度，最终提高肉猪的经济效益，在猪遗传改良进展中有十分重要的意义。
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公开(公告)号：CN110986788A
公开(公告)日：2020-04-10
申请号：CN201911116935.5
申请日：2019-11-15
Applicant: 华南农业大学
IPC: G01B11/02
Abstract: 本发明公开了一种基于三维点云牲畜表型体尺数据的自动测量方法，该方法包括以下步骤：获取牲畜不同局部点云，对多个局部点云融合成全局点云；对牲畜的上方点云拟合中轴平面，进而获取牲畜的背脊轮廓线，在背脊线轮廓线上定位牲畜的体长起始点和体长终止点，并进行积分求得牲畜的体表长；根据牲畜的背脊轮廓线，获取地平面点云数据，并进行最小二乘拟合平面，得到地平面方程，再求牲畜的体高；利用牲畜的上方点云投影到XOY平面，得到点云数目分布的离散曲线图，找出胸宽在离散曲线图的位置，进而求牲畜的胸宽长度；选取待测量围度的切片，采用该切片建立极坐标系，将极坐标系绘制在直角坐标系上，再对其拟合曲线，利用极坐标弧长积分公式求取待测量围度。
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公开(公告)号：CN110846336A
公开(公告)日：2020-02-28
申请号：CN201911170220.8
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶XAET和多功能融合酶定点整合真核特异表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶，植酸酶，双葡聚糖酶和双纤维素酶活性，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、葡聚糖，纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低，基因位置确定困难问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到增强多基因高效共表达效率的目的。此外，还可以解决单个来源的纤维素酶基因表达和水解纤维素效果差的问题。
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