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公开(公告)号：CN110846337B
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN201911170226.5
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/62 , C12N15/873 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶XABT基因及构建方法和应用，该多功能融合酶XABT基因，可以同时表达表达木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶和纤维素酶，并具有高效的酶活，该多功能融合酶强化了葡聚糖酶活性，对含葡聚糖较高的大麦、燕麦、黑麦、小麦及其麸皮类日粮具有更强的消化能力。亦可以用于制备节粮环保转基因经济动物，消除饲料中主要抗营养因子，达到提高饲料消化率，减少污染排放的目的。
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公开(公告)号：CN112852845A
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN202110156059.X
申请日：2021-02-04
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/56 , C12N9/42 , C12N15/85 , A23K20/189 , A23K50/75 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种新型多功能酶基因HG32及应用，该酶来源于中华竹鼠肠道微生物，能够兼容真核生物细胞表达系统，表达高生物活性的纤维素酶，其可在畜禽饲料酶制剂、转基因动物制备、食品和药品行业等领域应用，以解决植物纤维素难降解、饲料营养利用率低等问题，减轻动物排泄物中氮和、有机物等污染问题。本发明通过对竹鼠肠道微生物宏转录组测序，序列拼接，与NCBI上已有的糖苷水解酶家族进行同源性对比，筛选高表达的、同源性高于50％的疑似纤维素酶的基因，预测其信号肽，并用猪腮腺分泌蛋白信号肽替换原有的信号肽，按猪密码子偏好优化后克隆到真核表达载体上，通过脂质体转染到猪肾上皮细胞中表达，收集细胞培养上清液进行酶活分析比较后获得。
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公开(公告)号：CN110846337A
公开(公告)日：2020-02-28
申请号：CN201911170226.5
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/62 , C12N15/873 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶XABT基因及构建方法和应用，该多功能融合酶XABT基因，可以同时表达表达木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶和纤维素酶，并具有高效的酶活，该多功能融合酶强化了葡聚糖酶活性，对含葡聚糖较高的大麦、燕麦、黑麦、小麦及其麸皮类日粮具有更强的消化能力。亦可以用于制备节粮环保转基因经济动物，消除饲料中主要抗营养因子，达到提高饲料消化率，减少污染排放的目的。
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公开(公告)号：CN104946581B
公开(公告)日：2017-10-13
申请号：CN201510210334.6
申请日：2015-04-28
Applicant: 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N5/0735
Abstract: 本发明公开了一种培养猪滋养层干细胞的专用培养基及方法，该专用培养基成分包括bFGF、activin A、Y27632、Knockout SR和β‑巯基乙醇。培养方法是将干细胞培养器皿预先用细胞外基质包被；然后将猪囊胚用蛋白酶消化去除透明带，转入干细胞培养器皿中，添加本发明的专用培养基；培养至形成总细胞数为1000~2000个的滋养层干细胞克隆团时，消化成单细胞，转入新的经细胞外基质包被的培养器皿进行细胞的传代培养。本发明的专用培养基成分确定，使用安全性高，避免异源细胞的污染。培养方法简单高效，对猪滋养层干细胞培养具有克隆形成率高、细胞凋亡率低、增殖传代能力强和安全稳定的优点。
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公开(公告)号：CN110846297A
公开(公告)日：2020-02-28
申请号：CN201911170441.5
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶和多功能融合酶真核表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶、植酸酶、果胶酶，葡聚糖酶和纤维素酶，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、果胶、葡聚糖酶和纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低的问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到多基因高效共表达的目的。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112899294B
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202110155858.5
申请日：2021-02-04
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/56 , C12N15/62 , C12N9/42 , C12N9/46 , C07K19/00 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N1/21 , A23L33/17 , A23L33/135 , A23K20/189 , A23K10/18 , A61K48/00 , A61K38/47 , A61P1/00
Abstract: 本发明通过把中华竹鼠肠道微生物宏转录组拼接后的核酸序列与糖苷水解酶家族比对，筛选有较高同源性的序列，去除其原有的信号肽并添加猪腮腺分泌蛋白信号肽，通过猪密码子优化后连接到pcd3.1载体上。转染到猪肾上皮细胞进行表达验证，收集其细胞培养液进行酶活分析，比较其酶活力，选择最优的HG27基因，检测其最适pH、蛋白耐受和不同底物的酶促反应。从而，获得了一种多功能酶基因HG27，其可在畜禽饲料酶制剂、转基因动物制备，食品和药品行业等领域应用，以解决纤维素难降解吸收和排泄物污染环境的问题。
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公开(公告)号：CN108285906B
公开(公告)日：2021-07-09
申请号：CN201711477805.5
申请日：2017-12-29
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法，包括以下步骤：S1、安全靶点筛选及靶点绑定gRNA切割效率验证；S2、构建同源臂供体质粒，并获得定点整合转基因细胞系；S3、外源DNA定点整合转基因猪的构建。本发明在供体质粒中引入gRNA靶点序列，利用细胞内转录gRNA诱导Cas9核酸酶切割靶基因同时，线性化供体质粒，大大简化试验步骤，节约人力，且有利于提高共转染效率。本发明定点整合所用载体较少，同源臂大小适中，更有利于获得转基因细胞系，将高效定点整合技术，高活力定点转基因细胞培育技术与体细胞克隆技术结合，有利于定点整合转基因动物高效制备，加快转基因动物新品种培育速度。
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公开(公告)号：CN112899294A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110155858.5
申请日：2021-02-04
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/56 , C12N15/62 , C12N9/42 , C12N9/46 , C07K19/00 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N1/21 , A23L33/17 , A23L33/135 , A23K20/189 , A23K10/18 , A61K48/00 , A61K38/47 , A61P1/00
Abstract: 本发明通过把中华竹鼠肠道微生物宏转录组拼接后的核酸序列与糖苷水解酶家族比对，筛选有较高同源性的序列，去除其原有的信号肽并添加猪腮腺分泌蛋白信号肽，通过猪密码子优化后连接到pcd3.1载体上。转染到猪肾上皮细胞进行表达验证，收集其细胞培养液进行酶活分析，比较其酶活力，选择最优的HG27基因，检测其最适pH、蛋白耐受和不同底物的酶促反应。从而，获得了一种多功能酶基因HG27，其可在畜禽饲料酶制剂、转基因动物制备，食品和药品行业等领域应用，以解决纤维素难降解吸收和排泄物污染环境的问题。
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公开(公告)号：CN110846336A
公开(公告)日：2020-02-28
申请号：CN201911170220.8
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶XAET和多功能融合酶定点整合真核特异表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶，植酸酶，双葡聚糖酶和双纤维素酶活性，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、葡聚糖，纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低，基因位置确定困难问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到增强多基因高效共表达效率的目的。此外，还可以解决单个来源的纤维素酶基因表达和水解纤维素效果差的问题。
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公开(公告)号：CN110846336B
公开(公告)日：2022-12-20
申请号：CN201911170220.8
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶XAET和多功能融合酶定点整合真核特异表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶，植酸酶，双葡聚糖酶和双纤维素酶活性，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、葡聚糖，纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低，基因位置确定困难问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到增强多基因高效共表达效率的目的。此外，还可以解决单个来源的纤维素酶基因表达和水解纤维素效果差的问题。
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