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公开(公告)号：CN102086475A
公开(公告)日：2011-06-08
申请号：CN201010592751.9
申请日：2010-12-13
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 一种目的基因的漂移处理检测方法，包括收集转基因细胞培养液、核移植操作液和胚胎培养液等可能含有外源基因的液体，对其进行高压处理，然后对液体进行浓缩；针对外源基因的基因序列设计引物，通过PCR技术，特异性扩增外源基因的DNA片段，根据PCR扩增结果，判断在转基因细胞筛选过程中以及胚胎生产和培养过程中所产生的液体经处理后是否还有外源基因的存在。本发明这种处理检测方法完全可以避免外源基因的漂移，保证了转基因动物生产过程中的环境安全。适用于来源于人的防御素-3基因的转基因奶牛和山羊的生产过程中的基因漂移的检测。
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公开(公告)号：CN1896274A
公开(公告)日：2007-01-17
申请号：CN200510096097.1
申请日：2005-09-29
Applicant: 西北农林科技大学生物工程研究所
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种牛胚胎性别简易鉴定方法，其血液基因组鉴定率达100％，胚胎性别鉴定率为99.0％以上，操作简便、灵敏度高、鉴定快速、实用性强、使用设备简单，并可以在1h内鉴定出胚胎性别，形成的胚胎性别鉴定试剂盒完全可以应用于生产，且成本仅为同类产品的1/10。本发明根据牛特异性序列和雄性特异性序列，设计出6条特异性引物，能够识别6个特异位点，反应目的序列形成一个哑铃型结构单元，并以此为核心，短时间内扩增出大量大小不等的DNA片断。反应过程中，仅需要60～65℃恒温水浴即可；结果鉴定采用dNTPs沉淀法(反应管中部出现白色条带为阴性)。
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公开(公告)号：CN110042123A
公开(公告)日：2019-07-23
申请号：CN201910307633.X
申请日：2019-04-17
Abstract: 本发明公开了一种提高牛体细胞克隆效率的方法，通过诱导表达zfp57基因使牛克隆胚胎发育过程中的印迹基因甲基化恢复正常水平，从而提高牛体细胞克隆效率。本发明提供的一种提高牛体细胞克隆效率的方法，利用zfp57纠正牛克隆胚胎上异常的印迹基因低甲基化，使其甲基化水平到达和体外受精胚胎接近的水平，从而提高牛克隆胚胎的胚胎质量，促进牛克隆胚胎的发育；为阐明体细胞克隆胚胎重编程过程中甲基化印迹异常的机理以及体细胞克隆效率低下的原因提供理论依据。
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公开(公告)号：CN109679998A
公开(公告)日：2019-04-26
申请号：CN201910023959.X
申请日：2019-01-10
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种通过miRNA靶向定点突变MSTN基因并同时定点整合PPARγ基因的载体及重组细胞，载体包括Cas9切割表达载体和打靶载体。本发明将Cas9切割表达载体和打靶载体共同转染宿主细胞，构建重组细胞株，可以作为生产转基因克隆胚胎的核移植供体细胞，抑制MSTN的功能发挥，同时实现PPARγ在骨骼肌细胞中特异性表达，进而为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供支撑。
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公开(公告)号：CN109679976A
公开(公告)日：2019-04-26
申请号：CN201910008701.2
申请日：2019-01-04
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种可变剪接报告载体，在报告基因表达载体pEGFP-C1的报告基因序列内插入两段内含子序列intron1和intron2，intron1与intron2分别具有5’剪切位点，分支位点和3’剪切位点。并且公开了可变剪接报告载体的制备方法。根据RNA的剪接机制设计合成intron1和intron2，将intron1和intron2分别插入插入报告基因表达载体的报告序列，用以在细胞水平和活体水平检测可变剪接事件，含有剪接位点的内含子的插入便于转录后mRNA的正确拼接。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108611371A
公开(公告)日：2018-10-02
申请号：CN201810457000.2
申请日：2018-05-14
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/65 , C12N15/90 , C12N15/873 , C12N15/62 , A01K67/027 , C07K19/00 , A61K39/12 , A61P31/14
CPC classification number: C12N15/85 , A01K67/0278 , A01K2217/072 , A01K2227/102 , A01K2267/01 , A61K39/12 , A61K2039/552 , A61P31/14 , C07K14/005 , C07K2319/00 , C07K2319/21 , C12N9/22 , C12N15/62 , C12N15/65 , C12N15/873 , C12N15/907 , C12N2770/10022 , C12N2770/10034 , C12N2800/107 , C12N2800/30 , C12N2830/50
Abstract: 本发明公开了乳汁中表达GP5-M融合蛋白的羊乳腺生物反应器的制备方法，制备GP5-M融合表达的基因打靶载体，敲入奶山羊β-乳球蛋白第一外显子上，筛选中靶细胞，利用体细胞核移植技术制备转基因奶山羊，通过乳腺生物反应器生产含有GP5-M融合蛋白的乳汁，从乳汁中分离纯化GP5-M融合蛋白，添加佐剂制备基因工程亚单位疫苗，达到防控PRRS的目的。
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公开(公告)号：CN103215295B
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201310126017.7
申请日：2013-04-11
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/63 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种β-酪蛋白位点定点整合Lys基因的打靶载体及其构建的细胞，包括目的基因Lys，在的基因Lys的上游和下游分别设有5’同源臂和3’同源臂，以牛β-酪蛋白位点第二内含子锌指核酸酶识别位点的上下游各延伸700～850bp的同源序列作为5’同源臂和3’同源臂。本发明使用电穿孔的方法将打靶载体pCSN2-Lys-Neo-EGFP和锌指核酸酶表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，经过G418药物筛选和PCR分析后获得了打靶的阳性克隆细胞，以打靶的阳性克隆细胞为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚胎，为研制抗乳房炎的转基因奶牛提供坚实的基础。
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公开(公告)号：CN102807993B
公开(公告)日：2014-04-09
申请号：CN201210319587.3
申请日：2012-08-31
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种骨骼肌特异性的靶向Myostatin基因的miRNA表达载体及重组细胞，首先构建含有靶向Myostatin基因的pre-miRNA和MYL1基因启动子的骨骼肌特异性miRNA表达载体pmiR-MNM2，然后通过电转染法将外源性表达载体pmiR-MNM2导入红安格斯新生牛成纤维细胞并经G418筛选获得阳性细胞，进行PCR鉴定，证实目的基因整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；将转染pmiR-MNM2的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫，为生产具有双肌性状的红安格斯克隆牛奠定了坚实的基础。
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公开(公告)号：CN102517294B
公开(公告)日：2013-08-07
申请号：CN201110402670.2
申请日：2011-12-07
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/12 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/877
Abstract: 本发明公开了一种基于Ipr1基因构建的巨噬细胞异性打靶载体和重组细胞，通过在Ipr1基因5′端连接MSR1启动子使Ipr1基因在牛的巨噬细胞中特异的高效表达；并进一步构建重组基因LA-MSR1-Ipr1-SA，使目的基因定点整合在牛28号染色体SP-A与MAT1A基因之间。构建了Ipr1巨噬细胞特异性打靶载体pLMIS，将其转染到新生牛耳成纤维细胞，通过G418和GCV正负筛选，构建转基因的新生牛耳成纤维细胞系，作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚；胚胎移植后，生产出定点插入Ipr1基因的转基因牛5头，其中4头存活，转基因牛对M.bovis有抗性。
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公开(公告)号：CN103215295A
公开(公告)日：2013-07-24
申请号：CN201310126017.7
申请日：2013-04-11
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/63 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种β-酪蛋白位点定点整合Lys基因的打靶载体及其构建的细胞，包括目的基因Lys，在的基因Lys的上游和下游分别设有5’同源臂和3’同源臂，以牛β-酪蛋白位点第二内含子锌指核酸酶识别位点的上下游各延伸700～850bp的同源序列作为5’同源臂和3’同源臂。本发明使用电穿孔的方法将打靶载体pCSN2-Lys-Neo-EGFP和锌指核酸酶表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，经过G418药物筛选和PCR分析后获得了打靶的阳性克隆细胞，以打靶的阳性克隆细胞为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚胎，为研制抗乳房炎的转基因奶牛提供坚实的基础。
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