公开(公告)号：CN111254160B

公开(公告)日：2021-10-19

申请号：CN202010234221.0

申请日：2020-03-30

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张韬 ,  李鑫琪 ,  刘鹏

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/113 ,  C12N15/65 ,  A01H5/00 ,  A01H6/46

Abstract: 本发明公开了一种高效鉴定水稻增强子的原生质体验证方法，包括如下步骤：(1)构建载体：正对照载体采用p1300LV载体，同时构建相应的负对照载体；(2)增强子的分离克隆及表达载体构建：选取增强子序列，以水稻基因组DNA为模板，PCR扩增得到目的片段，再与BsaI酶线性化的负对照载体连接，得到增强子表达载体；(3)制备水稻原生质体；(4)水稻原生质体的转化：将增强子表达载体与水稻原生质体在PEG介导下共培养，进行转化；(5)显微镜观察荧光信号。本发明方法首次提出了通过水稻瞬时转化验证增强子活性的方法，高效，快捷。

公开(公告)号：CN112553197A

公开(公告)日：2021-03-26

申请号：CN202011332993.4

申请日：2020-11-24

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张韬 ,  刘鹏 ,  刘冠卿

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  C12N15/82 ,  C12N15/65 ,  C12Q1/6897

Abstract: 本发明公开了一种有活性的落叶松启动子、获取及鉴定方法。启动子DNA序列如SEQ ID NO.1。用特异引物以日本落叶松的基因组DNA为模板，扩增得到430bp的扩增产物，即得。将这一段DNA分子驱动GFP荧光蛋白基因表达，可观察到荧光信号，证实该序列为启动子。本发明提供的落叶松启动子序列，本质是DNA分子，430bp，能够启动转录。

公开(公告)号：CN112522265A

公开(公告)日：2021-03-19

申请号：CN202011333330.4

申请日：2020-11-24

Applicant: 扬州大学

Inventor： 刘鹏 ,  张韬 ,  刘冠卿

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  C12N15/82 ,  C12N15/65 ,  C12Q1/6897

Abstract: 本发明公开了一种具有增强子功能的落叶松DNA分子、获取及鉴定方法。增强子DNA序列如SEQ ID NO.1。用特异引物以日本落叶松的基因组DNA为模板，扩增得到574bp的扩增产物，即得。mini35s启动子单独不能启动的报告基因GFP表达，由于增强子可远距离促进转录的特征，当有功能的增强子插入该载体中后，其可以促进荧光蛋白转录，从而观察到荧光。本发明提供的落叶松增强子序列，本质是DNA分子，574bp，能够促进转录。

公开(公告)号：CN111269974B

公开(公告)日：2020-12-04

申请号：CN202010159715.7

申请日：2020-03-09

Applicant: 南京林业大学 ,  扬州大学

Inventor： 席梦利 ,  张韬 ,  尚大鑫

IPC: C12Q1/6879 ,  C12Q1/6895 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一段小叶杨雄株特异的基因组DNA序列及其应用，属于生物技术领域。通过对小叶杨雌株和雄株基因组进行DNA高通量测序和生物信息学分析，筛选出一段小叶杨雄株特异的基因组DNA序列。依据该小叶杨雄株特异的基因组DNA序列设计引物，以小叶杨和美洲黑杨的基因组DNA为模板，通过PCR扩增结果判断所检测杨树的性别，琼脂糖凝胶电泳检测出目标条带的为雄株，缺失该目标条带的为雌株。本发明提供的小叶杨雄株特异的基因组DNA序列及鉴定杨树植株性别的方法可以高效、准确地鉴定小叶杨和美洲黑杨的性别，在杨树性别鉴定及性别决定的分子机制研究中具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN111549026A

公开(公告)日：2020-08-18

申请号：CN202010309791.1

申请日：2020-04-17

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张韬 ,  马佳琦 ,  刘鹏

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/65 ,  C12N15/82

Abstract: 本发明公开了一种水稻增强子及鉴定方法。该水稻增强子为622bp的DNA分子，序列如SEQ ID NO.1。构建OsENHANCER1 reporter载体、正对照载体CaMV35S-GFP reporter(SEQ ID NO.2)和负对照载体Enhancerless reporter(SEQ ID NO.3)，通过水稻原生质体转化进行鉴定。本发明增强子在基因转录过程中发挥重要作用，鉴定方法快速，便捷。

公开(公告)号：CN110331229A

公开(公告)日：2019-10-15

申请号：CN201910725242.X

申请日：2019-08-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 于恒秀 ,  朱岑文 ,  张超 ,  王为云 ,  刘岩 ,  张建祥 ,  张韬 ,  龚志云 ,  程祝宽 ,  沈懿 ,  刘向东 ,  顾铭洪

IPC: C12Q1/6895 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鉴定CC染色体组野生稻的鉴定引物和CC染色体组野生稻的鉴定方法。本发明所述鉴定引物的序列如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示。所述鉴定方法是：采集待鉴定水稻根尖和叶片，提取叶片总DNA；以根尖鉴定染色体数；以鉴定染色体数目为24条的待鉴定水稻的样品叶片总DNA为模板，利用序列如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6的引物组合对待测样品进行PCR扩增；PCR反应结束后对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果在317bp处出现特异性扩增条带的样品即为CC染色体组野生稻的阳性判定结果。本发明的方法结果稳定、操作简单、高效而且成本低。

公开(公告)号：CN107099849B

公开(公告)日：2019-07-26

申请号：CN201710442531.X

申请日：2017-06-13

Applicant: 扬州大学

Inventor： 于恒秀 ,  张韬 ,  程祝宽 ,  候莉莉 ,  沈懿 ,  龚志云 ,  顾铭洪

IPC: C40B40/06 ,  C12N15/11 ,  C12Q1/6841

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种特异识别栽培稻第9号染色体整条短臂的寡核苷酸文库及识别的方法。所述寡核苷酸文库，由SEQ ID NO.1‑2258所示的共2258条寡核苷酸组成。本发明还开了特异识别栽培稻第9号染色体整条短臂的方法，是先用所述的特异寡核苷酸文库制备获得带有荧光标记的特异寡核苷酸探针共2258个，再利用这些探针进行荧光原位杂交，根据荧光信号识别栽培稻第9号染色体整条短臂。利用本发明的整条染色体臂的涂染探针，可以识别水稻第9号染色体整条短臂，可以用其分析和研究染色体的重组、畸变和同源基因，也可以研究不同物种来源的染色体之间的进化关系。