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公开(公告)号：CN110484493A
公开(公告)日：2019-11-22
申请号：CN201910810444.4
申请日：2019-08-29
Applicant: 扬州大学
Abstract: 小分子化合物诱导鸡胚成纤维细胞CEFs成iPSCs的体系建立方法，其特征是，设置不同浓度的小分子化合物组合体系，细胞形态学观察、毒性试验及qRT-PCR检测相关基因的表达，验证小分子化合物在鸡CEFs诱导重编程中是否适用及其适宜诱导浓度；然后利用剔除法结合qRT-PCR、间接免疫荧光、细胞流式分析技术、AKP染色、EDU细胞增值技术手段优化诱导体系，建立适宜鸡CEFs重编程诱导体系。本发明解决了器官来源及免疫排斥问题，同时为个体发育及遗传修饰与保存的研究提供了新方法；为后续诱导多能干细胞的使用奠定理论和技术基础，也为其他物种的化学诱导重编程研究提供参考。
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公开(公告)号：CN107779428A
公开(公告)日：2018-03-09
申请号：CN201711034939.X
申请日：2017-10-30
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735
CPC classification number: C12N5/0611 , C12N2509/00
Abstract: 本发明公开了一种分离鸡胚生殖嵴来源的原始生殖干细胞方法，属于生物技术领域，包括以下步骤：（1）无菌取出21-24HH早期胚胎，使用PBS浸洗3次；（2）在解剖显微镜下去头尾，剥离出生殖嵴，获取早期生殖嵴组织，使用PBS浸洗3次；（3）加入预热的胰蛋白酶进行消化，室温消化5mins，消化时轻轻吹打使生殖嵴组织分散；（4）加入含有小牛血清的培养基终止消化，100目网筛过滤后300转离心5mins，弃上清后使用PGCs培养基进行重悬，重悬后进行差速贴壁培养，培养45mins后吸上清，连续差速贴壁培养3次后即可得到纯度较高的PGCs。本发明提取简便快速，旨在从早期生殖嵴（21-24HH）中分离大量纯净且全能性高的PGCs，为PGCs的应用奠定基础。
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公开(公告)号：CN107043764A
公开(公告)日：2017-08-15
申请号：CN201611215943.1
申请日：2016-12-26
Applicant: 扬州大学
CPC classification number: C12N15/1055 , G01N33/6848
Abstract: 本发明公开了一种基于GST‑Pull Down以及质谱分析技术寻找如皋黄鸡基因互作蛋白的方法：（1）目的基因克隆以及原核表达载体构建；（2）Pet‑49(b)‑GST‑目的基因的原核融合表达载体构建；（3）Pet‑49(b)‑GST‑目的基因进行原核表达；（4）对蛋白进行大量表达和破菌检测；（5）明确蛋白的表达位置后对表达的蛋白进行纯化和浓缩并进行GST‑Pull Down试验；（6）GST‑Pull Down后的蛋白进行蛋白质还原烷基化和胶内酶解并通过LC‑MS/MS鉴定获取目的基因的互作蛋白的序列。本发明能够较快的获得相关基因的互作蛋白；方法简单易行，可重复性强，在普通实验室即可进行。
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公开(公告)号：CN104805118A
公开(公告)日：2015-07-29
申请号：CN201510195632.2
申请日：2015-04-22
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种苏禽黄鸡胚胎干细胞特定基因进行靶向敲除的方法：首先查询出基因的外显子序列，克隆出基因，测序，获得完整的外显子序列，并在此序列上设计CRISPR/Cas9敲除靶位点作为gRNA，构建CRISPR/Cas9双启动子敲除载体；构建完成的Cas9载体进行SSA活性检测，对照组转染空载体，检测luciferase信号，luciferase活性相对于对照组增长的越多，则证明gRNA剪切活性越高；将具有高SSA活性的CRISPR/Cas9载体转染ESCs，流式细胞术筛选出GFP阳性细胞，提取基因组DNA，设计引物。
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公开(公告)号：CN117683705A
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN202311756853.3
申请日：2023-12-20
Applicant: 扬州大学 , 江苏省家禽科学研究所
IPC: C12N5/0735
Abstract: 本发明公开一种鸡多能干细胞体外培养方法，属于畜牧学和生物技术领域；通过添加FGF2、IWR‑1和XAV‑93，并以STO细胞为饲养层，建立FIX培养体系，从鸡新鲜种蛋EGK.X期分离胚盘明区细胞，在FIX培养体系中，采用5%CO2、饱和湿度的37℃培养箱进行培养，每天更换培养液，每2‑3天传代一次，进行鸡多能干细胞PSCs体外培养；本发明提供的方法可以在短期内使鸡PSCs快速增殖，且维持其多能性和分化潜能；为研究鸡PSCs生物学特性提供了材料，为家禽的良种扩繁、基因修饰、家禽分子设计育种和种质资源冷冻保存等提供了新的方法、奠定了实验基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115896175A
公开(公告)日：2023-04-04
申请号：CN202211650762.7
申请日：2022-12-21
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/85 , C12N9/00 , C12N15/52 , C12N15/12 , C07K14/465
Abstract: 本发明属于禽类生殖技术领域，特别是涉及基因C2EIP在促进PGCs形成中的应用和C2EIP蛋白介导的泛素化E3连接酶复合体。本发明提供了基因C2EIP在促进鸡原始生殖细胞形成中的应用，基因C2EIP表达得到的蛋白以及C2EIP蛋白介导的泛素化E3连接酶复合体在调控鸡原始生殖细胞形成过程中的应用。本发明提供的应用能够有效的提高体外鸡原始生殖细胞的形成效率，扩大鸡原始生殖细胞的形成数量，解决原始生殖细胞数量不足的问题，为进一步实现鸡原始生殖细胞在物种资源保护领域的应用提供细胞材料。
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公开(公告)号：CN112877332A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110283164.X
申请日：2021-03-16
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/65 , C12Q1/66
Abstract: 本发明提供一种由双荧光素酶报告基因检测鸡RIPK2启动子活性的方法，包括以下步骤：步骤1）、鸡RIPK2基因启动子全长的克隆；步骤2）、鸡RIPK2启动子区系列缺失片段报告质粒的构建和鉴定；步骤3）、鸡RIPK2启动子活性定性分析；步骤4）、双荧光素酶报告基因检测鸡质粒RIPK2启动子的活性；步骤5）、鸡RIPK2核心启动子区的确定；步骤6）、鸡RIPK2核心启动子区转录因子的筛选；利用软件TRANSFAC和AliBaba 2.1对鸡RIPK2启动子区转录因子结合位点进行预测分析。通过本发明，便于对鸡RIPK2基因启动子的调控方式及调控元件进行研究。具有灵敏度高、准确性强、检测迅速、费用较低等特点，避免了转染效率对结果的影响。
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公开(公告)号：CN112725467A
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN202110232856.1
申请日：2021-03-03
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6888 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及一种与抗禽致病性大肠杆菌相关的NLR信号通路及其应用，提供一种与抗禽致病性大肠杆菌相关的遗传标记，所述遗传标记为NLR信号通路。同时提供检测本发明第一方面所述的遗传标记的试剂在制备用于鉴定待测鸡抗禽致病性大肠杆菌的试剂盒的应用。以及提供一种用于鉴定抗禽致病性大肠杆菌的试剂盒，提供一种筛选抗禽致病性大肠杆菌的商品肉鸡的方法。通过本发明。利用与禽致病性大肠杆菌相关的标记基因进行标记辅助选择，能够有效提供家禽免疫能力。提供了NLR信号通路基因的序列及鉴定方法，通过通路基因的引物，可利用Sanger测序法建立高效准确快速的分子标记辅助育种技术，使免疫力提高，可在早期进行选育，降低育种成本，提高生产效益。
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公开(公告)号：CN111763691A
公开(公告)日：2020-10-13
申请号：CN202010684844.8
申请日：2020-07-16
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/867
Abstract: 本发明涉及一种新的慢病毒载体导入鸡胚的方法，包括以下步骤：（1）对孵化48-58h的早期胚蛋（13-17 HH）取出后在无菌条件下使用镊子轻轻敲击蛋壳钝端开口，找到胚胎位置后，使用眼科镊轻轻剥去胚胎上层覆盖的外壳膜，露出胚胎；（2）将导入的慢病毒载体使用细胞培养基或细胞缓冲液稀释到固定滴度，对准暴露出的胚胎轻轻滴加，使慢病毒溶液覆盖胚胎；（3）滴加结束后加入200ul青链霉素至注射部位，然后使用医用胶带封口，完成慢病毒载体导入鸡胚。封口严实后继续放入孵化箱，根据下一步要求在不同阶段取出检测。通过本发明，可用于鸡胚外源基因导入、外源基因敲低或敲除和转基因鸡等生产研究。
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公开(公告)号：CN107723313A
公开(公告)日：2018-02-23
申请号：CN201711031012.0
申请日：2017-10-30
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/89
CPC classification number: C12N15/89
Abstract: 本发明公开了一种外源物质导入鸡胚的方法，属于生物技术领域，具体包括如下步骤：（1）对孵育48-58h的13-17 HH早期胚蛋在无菌条件下开口，找到胚胎位置，剥去胚蛋外壳膜，露出胚胎血管；（2）将需要导入的外源物质注入到玻璃注射针中，通过显微注射仪注射到鸡胚血管中；（3）注射后加入青链霉素至注射部位，然后使用医用胶带封口。本发明旨在鸡胚早期（13-17 HH）通过血管注射导入外源物质，为鸡胚注射的广泛应用奠定基础。本方法适用于鸡胚外源基因或细胞导入，转基因鸡和嵌合体制备，操作简便快速，外源物质导入效率高。
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