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公开(公告)号：CN109136386B
公开(公告)日：2021-12-24
申请号：CN201810828293.0
申请日：2018-07-25
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种对卡耶塔环孢子虫进行快速分型和溯源的定量PCR方法，采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组不同拷贝间的多态性连接区域作为遗传标记，设计了特异性的定量PCR引物，包含上游引物Cyc‑Mito‑F1和下游引物Cyc‑Mito‑R1，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1～2所示。本发明方法克服了现有的卡耶塔环孢子虫单位点分子诊断工具无法对该病原进行精细分型的缺点，而且扩增效率比现有的单位点分子诊断工具高；本发明采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组上的单个位点定量PCR和熔解曲线分析就可进行快速的基因型区分和溯源，克服了现有的卡耶塔环孢子虫多位点序列分型工具中因需要对多个位点扩增和测序所导致的分型耗时长、成本高的缺点，具有较大的应用前景。
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公开(公告)号：CN112724223A
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN202011588887.2
申请日：2020-12-28
Applicant: 华南农业大学
IPC: C07K14/44 , C12N15/30 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K16/20 , G01N33/533 , G01N33/577 , G01N33/569 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种毕氏肠微孢子虫孢壁蛋白单克隆抗体的制备及其应用。基于重组蛋白EbSWP1制得的单克隆抗体对于检测毕氏肠微孢子虫具有良好的特异性，不与虾肝肠微孢子虫、兔脑炎微孢子虫、大肠杆菌等发生反应。本发明制备的单克隆抗体可与荧光素标记物偶联制得免疫荧光抗体，利用该抗体与环境、粪便中的毕氏肠微孢子虫做直接免疫荧光反应，可以快速、灵敏、准确地检验毕氏肠微孢子虫。与实验室最常用的PCR检测方法相比，本发明的免疫荧光检测方法操作简便，耗费时间短，且检测准确度高，以PCR结果为参考，本发明检测方法的准确率高于85％，该方法简便、快速、灵敏、准确的特点使其适用于基层检测应用。
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公开(公告)号：CN111154792A
公开(公告)日：2020-05-15
申请号：CN202010027841.7
申请日：2020-01-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种隐孢子虫蛋白激酶660C端蛋白的制备及其应用，包括如下步骤：S1.以SEQ ID NO：1～2所示扩增引物PCR扩增反应得到Cp660C基因片段；S2.将Cp660C基因片段与原核表达质粒双酶切，连接，得到Cp660C重组质粒；S3.将Cp660C重组质粒转入表达宿主菌，挑取阳性克隆菌；S4.将阳性克隆菌扩大培养至生长对数期，诱导表达；S5.诱导表达后的菌液，冷冻离心收集菌体，弃上清，清洗菌体后重悬，添加蛋白酶抑制剂，冰浴超声裂解菌体，得裂解液，再低温离心取上清，滤膜过滤；S6.取步骤过滤后上清液经Ni柱纯化，洗脱，收集目的蛋白。本发明方法能够得到高纯度、高抗原特异性的重组蛋白，所纯化得到的蛋白能够进一步用于隐孢子虫蛋白功能性分析研究。
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公开(公告)号：CN119351466B
公开(公告)日：2025-04-04
申请号：CN202411503015.X
申请日：2024-10-25
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/90 , C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/30 , A61K39/002 , A61P33/02
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种弓形虫基因敲除疫苗虫株的构建方法及其应用，通过基因编辑技术直接敲除弓形虫的TGGT1_202920基因得到ΔTGGT1_202920虫株，该虫株具有在体外能够正常培养、在体内几乎无毒的特性；对动物免疫接种ΔTGGT1_202920虫株后，可以产生良好的免疫保护力，能抵抗野生型弓形虫的感染，能用于制备抗弓形虫病疫苗，以预防弓形虫感染。
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公开(公告)号：CN118750592A
公开(公告)日：2024-10-11
申请号：CN202411247790.3
申请日：2024-09-06
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种缺失TgAROM基因的弓形虫减毒疫苗，含有缺失了TgAROM基因的弓形虫疫苗虫株Δarom，所述TgAROM基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明发现直接敲除弓形虫TgAROM基因对弓形虫的胞内生长无明显影响；Δarom虫株可以在体外正常传代培养，但Δarom虫体在动物体内不繁殖，几乎没有毒力；免疫接种Δarom虫株可以产生良好的免疫保护力；综上表明Δarom虫株具有成为弓形虫疫苗的潜力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118546788A
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202410651467.6
申请日：2024-05-24
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一株弓形虫琥珀酸脱氢酶α亚基基因缺失疫苗虫株及其应用，该虫株(Δsdhα)通过基因编辑技术直接敲除弓形虫的TgSDHα得到；敲除TgSDHα后，显著影响弓形虫的生长，减缓虫体体外的增殖速度，并能降低弓形虫体内繁殖数量；Δsdhα虫株具有体外可以传代培养，体内几乎无毒力的特性，感染Δsdhα虫株的小鼠全部存活；对动物免疫接种Δsdhα虫株后可以产生良好的免疫保护力，能抵抗野生型弓形虫的感染。Δsdhα虫株能用于制备抗弓形虫病的疫苗，为防治弓形虫病提供安全、有效的疫苗候选。同时，TgSDHα可以作为弓形虫药物设计靶点，为防治弓形虫病提供更多有效药物靶标与基因资源。
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公开(公告)号：CN118146955A
公开(公告)日：2024-06-07
申请号：CN202410301081.2
申请日：2024-03-15
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种微小隐孢子虫23kDa黏蛋白CP23基因缺失虫株及其应用。本发明基于CRISPR/Cas9基因编辑技术对微小隐孢子虫IIdA20G1亚型分离株的CP23基因进行敲除，获得了CP23基因缺失虫株；研究显示CP23缺失后影响微小隐孢子虫的体外入侵和生长发育，其基因缺失虫株可以在体外培养，在体外生的长荷虫量明显降低；通过体内免疫后，在小鼠体内其荷虫量也显著降低，排卵高峰期推迟并且排卵维持时间缩短，不会导致C57BL/6J小鼠在感染后死亡；采用CP23基因缺失虫株免疫后能减轻微小隐孢子虫对宿主的感染强度，具有毒力减弱的优点，能用于预防微小隐孢子虫感染，制备隐孢子虫减毒疫苗。
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公开(公告)号：CN116840473A
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202310581514.X
申请日：2023-05-23
Applicant: 华南农业大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/535 , C07K16/20 , C07K16/06
Abstract: 本发明公开了一种检测微小隐孢子虫的双抗体夹心ELISA检测方法及试剂盒，属于生物技术领域。本发明利用微小隐孢子虫全虫蛋白作为抗原，采用单克隆抗体制备技术，经过融合、克隆、筛选制备获得识别微小隐孢子虫胞内期所有阶段的单克隆抗体，作为检测抗体；利用微小隐孢子虫全虫蛋白作为抗原免疫新西兰兔，获得针对微小隐孢子虫的多克隆抗体，作为捕获抗体，并通过最佳稀释度的确定、封闭剂的选择、最佳孵育时间的确定等系列优化，建立了可用于临床样本中微小隐孢子虫的检测及鉴定的双抗体夹心ELISA检测方法及其试剂盒。该方法及试剂盒特异性较强，具有较好的灵敏度。
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公开(公告)号：CN109735513B
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN201811497728.4
申请日：2018-12-07
Abstract: 本发明公开了一种隐孢子虫蛋白激酶的纯化方法，先通过构建隐孢子虫蛋白激酶的体外重组表达载体，再进行质粒转导、IPTG低温诱导表达，成功表达后的菌体裂解后，经割胶回收纯化蛋白；本发明纯化方法通过低温诱导以及改善IPTG浓度的方式，提高了表达蛋白的可溶性，同时通过割胶回收的方法解决了隐孢子虫蛋白激酶在体外表达中易出现的自切降解包涵体表达等问题，能够得到高纯度条带单一且具备酶学活性的重组蛋白，并且能够提高对难以表达、分子量较大蛋白的纯化效果。所纯化得到的蛋白能够进一步用于功能性分析研究，为解决隐孢子虫蛋白功能领域的诸多问题奠定基础。
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公开(公告)号：CN112724223B
公开(公告)日：2022-10-21
申请号：CN202011588887.2
申请日：2020-12-28
Applicant: 华南农业大学
IPC: C07K14/44 , C12N15/30 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K16/20 , G01N33/533 , G01N33/577 , G01N33/569 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种毕氏肠微孢子虫孢壁蛋白单克隆抗体的制备及其应用。基于重组蛋白EbSWP1制得的单克隆抗体对于检测毕氏肠微孢子虫具有良好的特异性，不与虾肝肠微孢子虫、兔脑炎微孢子虫、大肠杆菌等发生反应。本发明制备的单克隆抗体可与荧光素标记物偶联制得免疫荧光抗体，利用该抗体与环境、粪便中的毕氏肠微孢子虫做直接免疫荧光反应，可以快速、灵敏、准确地检验毕氏肠微孢子虫。与实验室最常用的PCR检测方法相比，本发明的免疫荧光检测方法操作简便，耗费时间短，且检测准确度高，以PCR结果为参考，本发明检测方法的准确率高于85％，该方法简便、快速、灵敏、准确的特点使其适用于基层检测应用。
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