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公开(公告)号：CN112391402B
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202011283106.9
申请日：2020-11-17
Applicant: 华中科技大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种提高解脂耶氏酵母中目的蛋白表达水平的方法，该方法是通过共同过表达蛋白合成与分泌途径相关的辅助蛋白以提高解脂耶氏酵母中目的蛋白表达水平。共同过表达优选包括以下任意一种情形：(i)目的蛋白基因与一种辅助蛋白的单拷贝基因的共同过表达；(ii)目的蛋白基因与一种辅助蛋白的多拷贝基因的共同过表达；(iii)目的蛋白基因与多种辅助蛋白的不同拷贝数基因的共同过表达。本发明通过对提升方法的整体作用机制进行改进，通过共同过表达蛋白合成与分泌途径相关的辅助蛋白以提高解脂耶氏酵母中目的蛋白表达水平，可显著提高解脂耶氏酵母中目的蛋白的产量。
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公开(公告)号：CN115449524A
公开(公告)日：2022-12-09
申请号：CN202211122390.0
申请日：2022-09-15
Applicant: 华中科技大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母中重复序列介导的基因无抗性整合系统及应用，属于基因工程领域。本发明首先选择或构建某参与细胞重要生理功能基因其表达盒一端存在突变或缺失而导致功能不足的缺陷型菌株，随后在特定位点整合携带该基因表达盒另一端中部分序列突变或缺失的截短型表达盒的表达载体，在菌株需要该基因功能才能正常生长或代谢的培养条件下，载体引入的截短型表达盒和缺陷型菌株中缺陷基因片段所含重复序列之间将通过分子内同源重组生成完整基因表达盒并剔除表达载体引入的抗生素基因，最终实现无抗性整合。本发明不需借助CRISPR‑Cas和位点特异性重组系统等基因编辑工具，可高效地实现外源基因在酵母中的无抗性整合，且操作简单。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112322519B
公开(公告)日：2022-01-07
申请号：CN202011131690.6
申请日：2020-10-21
Applicant: 华中科技大学
Abstract: 本发明属于生物矿化应用领域，公开了一种用于生物矿化的微生物复合菌群及其制备与应用，该用于生物矿化的微生物复合菌群包括具有高脲酶活性的第一微生物和具有高碳酸酐酶活性的第二微生物，第一微生物和第二微生物均保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号分别为CCTCC M 2020469和CCTCC M 2020468。本发明通过选取特定的第一微生物和第二微生物得到微生物复合菌群，该微生物复合菌群具有高脲酶活性和高碳酸酐酶活性，复配得到的复合菌群液尤其可用于生物矿化，有效解决现有技术中生物水泥自然菌种固结松散颗粒的固结速率低、所得固结体强度不高的缺陷与不足。
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公开(公告)号：CN112391402A
公开(公告)日：2021-02-23
申请号：CN202011283106.9
申请日：2020-11-17
Applicant: 华中科技大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种提高解脂耶氏酵母中目的蛋白表达水平的方法，该方法是通过共同过表达蛋白合成与分泌途径相关的辅助蛋白以提高解脂耶氏酵母中目的蛋白表达水平。共同过表达优选包括以下任意一种情形：(i)目的蛋白基因与一种辅助蛋白的单拷贝基因的共同过表达；(ii)目的蛋白基因与一种辅助蛋白的多拷贝基因的共同过表达；(iii)目的蛋白基因与多种辅助蛋白的不同拷贝数基因的共同过表达。本发明通过对提升方法的整体作用机制进行改进，通过共同过表达蛋白合成与分泌途径相关的辅助蛋白以提高解脂耶氏酵母中目的蛋白表达水平，可显著提高解脂耶氏酵母中目的蛋白的产量。
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公开(公告)号：CN104109662B
公开(公告)日：2017-03-01
申请号：CN201410282597.3
申请日：2014-06-23
Applicant: 华中科技大学
Abstract: 本发明公开了一种固定化的洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶及其制备方法。所述固定化的洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶，包括碳纳米管基质和洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶，所述洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶通过亲和吸附和/或共价结合的方式结合在碳纳米管基质的开放端口、表面和内壁。所述制备方法包括以下步骤：(1)硫酸超声处理碳纳米管；合液；(3)将碳纳米管与洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶混合液在4℃至60℃下，振荡反应，获得所述固定化的洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶。本发明提供的固定化的洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶增加了酶蛋白在反应体系中的分散性，获得了较高的转酯催化酶活，大大缩短了达到反应平衡所需的时间。(2)制备碳纳米管与洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶混
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公开(公告)号：CN104109662A
公开(公告)日：2014-10-22
申请号：CN201410282597.3
申请日：2014-06-23
Applicant: 华中科技大学
Abstract: 本发明公开了一种固定化的洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶及其制备方法。所述固定化的洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶，包括碳纳米管基质和洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶，所述洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶通过亲和吸附和/或共价结合的方式结合在碳纳米管基质的开放端口、表面和内壁。所述制备方法包括以下步骤：(1)硫酸超声处理碳纳米管；(2)制备碳纳米管与洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶混合液；(3)将碳纳米管与洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶混合液在4℃至60℃下，振荡反应，获得所述固定化的洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶。本发明提供的固定化的洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶增加了酶蛋白在反应体系中的分散性，获得了较高的转酯催化酶活，大大缩短了达到反应平衡所需的时间。
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公开(公告)号：CN103710333A
公开(公告)日：2014-04-09
申请号：CN201310712037.2
申请日：2013-12-21
Applicant: 华中科技大学
Abstract: 本发明公开了一种固定化载体及其制备方法和固定化β-葡萄糖苷酶。所述固定化载体，包括磁性纳米颗粒、富羧基复合材料以及过渡金属离子；富羧基复合材料包裹在磁性纳米颗粒表面形成富羧基壳，其表面羧基与过渡金属离子络合，过渡金属离子与待固定化的酶通过金属离子配位键结合。所述制备方法，包括步骤：（1）制备磁性纳米颗粒；（2）对所述颗粒进行羟基功能化修饰；（3）对所述颗粒进行环氧基功能化修饰；（4）对所述颗粒进行羧基功能化修饰；（5）对所述颗粒进行过渡金属离子络合。所述固定化的β-葡萄糖苷酶，将所述功能化载体和β-葡萄糖苷酶通过金属配位键结合。本发明生物酶结合牢固，酶活高，操作稳定性强，适合大规模生产。
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