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公开(公告)号：CN111378684B
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202010179130.1
申请日：2020-03-15
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种热诱导的基因编辑系统CRISPR‑Cas12b首次在陆地棉中的应用。对含有棉花内源启动子pGhU6‑7的pRGEB32‑GhU6.7‑NPT Ⅱ载体进行改造，以密码子优化合成的AaCas12b蛋白取代原Cas9蛋白，构建棉花中具有编辑能力的载体。选取GhCLA为目标基因验证载体在棉花中的应用。设计2个靶标，利用农杆菌介导的转化将Cas12b编辑系统导入棉花基因组，使用三种温度不同时间处理下胚轴，转基因植株进行相关测序，检测异源四倍体棉花基因组中的编辑效率和全基因组检测脱靶效应。本发明使用特定的温度和处理时间得到良好的编辑效率和特异性。
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公开(公告)号：CN113174401A
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN202110608540.8
申请日：2021-06-01
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，且公开了基因编辑介导的外源基因敲入到棉花基因组的方法，包括以下步骤：1)菜豆黄矮病毒的复制子元件BeSRL和ULIR目的序列的获得：查阅文献DNA Replicons for Plant Genome Engineering从中获取菜豆黄矮病毒的复制子元件BeSRL和ULIR目的序列，然后经过(GenScript)合成；2)转化载体BeYDV‑Cas9‑KI的构建：利用限制性内切酶Sbf I酶切pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ载体，连接黄矮病毒的复制子元件BeSRL，将pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ进行Sbf I酶切。该基因编辑介导的外源基因敲入到棉花基因组的方法及载体，在棉花中首次成功建立了适应于棉花基因组特性的基因敲入编辑系统，该系统能够将外源基因定点插入到棉花基因组中，它将成为棉花功能基因组研究新的重要的技术手段，且在棉花中的敲入效率达1.0％。
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公开(公告)号：CN113122571A
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN202110583863.6
申请日：2021-05-27
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域，且公开了一种新型CRISPR/Cas9基因编辑载体的载体制备方法，所述CRISPR/Cas9载体p7N‑EC通过下列步骤制备获得：获得目的序列EC1.2en‑1.1p，具体地，该目的序列通过以下步骤制备获得：先获得含有目的序列EC1.2en‑1.1p的载体pHEE401E‑ccdB，以pHEE401E‑ccdB载体为模板，利用Primer5软件设计引物，通过PCR扩增获得EC1.2en‑1.1p目的序列，利用SbfⅠ、BstBⅠ两种酶对pRGEB32‑GhU6.7‑NPT Ⅱ载体进行双酶切去除Ubiquitin启动子得到线性载体，然后与获得的EC1.2en‑1.1p目的序列进行In‑fusion连接。该新型CRISPR/Cas9基因编辑载体的载体制备方法，能对棉花基因组进行有效的基因编辑，且具有一定的基因编辑效率。
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公开(公告)号：CN113122570A
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN202110583854.7
申请日：2021-05-27
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，且公开了一种新型CRISPR/Cas9基因编辑载体在棉花中的使用方法，包括以下步骤：获得含有目的序列35S启动子的载体pK2GW7.0，以pK2GW7.0载体为模板，利用Primer5软件设计引物。该新型CRISPR/Cas9基因编辑载体在棉花中的使用方法，对含有棉花内源启动子pGhU6‑7的pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ载体进行改造，以35S启动子取代原有系统中驱动Cas9蛋白表达的Ubiquitin启动子，分别选取棉花内源Gh_A06G0606和GhCLA为目标基因验证改造后的新系统在棉花中的应用，利用农杆菌介导的遗传转化将CRISPR/Cas9基因编辑系统导入棉花基因组，然后对新载体的愈伤组织进行Sanger测序和Hi‑TOM测序，检测新系统在异源四倍体棉花基因组中的突变位点及编辑效率，具有良好的探究性、创新性和研究价值。
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公开(公告)号：CN112980766A
公开(公告)日：2021-06-18
申请号：CN202110469528.3
申请日：2021-04-28
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N5/04
Abstract: 本发明涉及分子生物技术领域，且公开了一种棉花下胚轴单细胞的分离方法。该棉花下胚轴单细胞的分离方法，基于棉花叶片、愈伤组织、根的原生质体分离技术，对酶促体系进行优化改进，构建了适用于棉花下胚轴单细胞分离的实验体系，利用该方法可得到高质量，数量多的下胚轴单细胞，愈伤组织原生质体酶解方法中，酶解后的原生质体用W5solution重悬，本发明中用PBS+0.04％BSA进行重悬，效果较好，酶解时间只需4‑6小时，两次离心之后过40μm过滤筛，可以得到分散完整的下胚轴单细胞。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112626109A
公开(公告)日：2021-04-09
申请号：CN202110086584.9
申请日：2021-01-22
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明提供了一种海岛棉杂交后代雄性不育材料的创制方法，属于棉花育种技术领域。海岛棉杂交后代雄性不育材料的创制方法，设计合成GhNSP基因的sgRNA1和sgRNA2；将sgRNA1和sgRNA2串联构建到CRISPR/Cas9基因编辑载体中；将构建的载体在农杆菌介导下转入陆地棉，筛选获得转基因材料和海岛棉进行杂交，对杂交后代进行Hi‑Tom检测，筛选含CRISPR/Cas9与sgRNA的T‑DNA片段的杂交后代，得到海岛棉杂交后代雄性不育材料。本发明提供的方法简单、高效创制出海岛棉杂交后代雄性不育材料，为海岛棉材料的遗传改良提供新思路，同时对海岛棉材料的基因功能验证具有重要意义。
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公开(公告)号：CN108203714B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201611188402.4
申请日：2016-12-20
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/82 , C12N15/66 , C12N15/113
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种棉花基因的编辑方法。公开了用于棉花基因组编辑的CRISPR‑Cas9系统及其构建方法。本发明克隆得到两个陆地棉U6启动子pGhU6‑7和pGhU6‑9，并突变了Bsa Ⅰ酶切位点。利用优化后的启动子构建了在棉花中具有编辑能力的CRISPR‑Cas9载体的两个载体pRGEB32‑GhU6.7‑NPT Ⅱ、pRGEB32‑GhU6.9‑NPT Ⅱ。选取1个棉花内源基因GhCLA为目标基因，设计四个靶向该基因的sgRNA，引导Cas9蛋白在GhCLA的特异位点进行切割。通过棉花的白化表型、酶切图、测序验证，表明pGhU6‑7I和pGhU6‑9I驱动的CRISPR‑Cas9基因编辑系统在棉花内具有编辑能力。
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公开(公告)号：CN118166142A
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202410179509.0
申请日：2024-02-18
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11 , A01H1/04
Abstract: 本发明属于生物农业的技术领域，具体涉及一种与陆地棉叶枝数性状相关的SV分子标记及其应用。本发明提供了一种与陆地棉叶枝数性状相关的SV分子标记并根据SV分子标记设计了如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3所示的引物及检测试剂盒，从而能够实现陆地棉叶枝数性状的预测、筛选，为培育不同叶枝类型的陆地棉提供科学的依据。此外，本发明提供的技术方案检测过程中无需考虑棉花的生育时期及组织类型，也无需进行田间表型考察，可准确、快速获取样本的基因型信息，有益于加快棉花理想株型的种质创新，提高育种效率。
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公开(公告)号：CN117701601A
公开(公告)日：2024-03-15
申请号：CN202311846586.9
申请日：2023-12-29
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于农业生物的技术领域，具体涉及GhFKBP17‑2基因在防治棉铃虫和/或培育抗棉铃虫植物新品种中的应用。本发明所述GhFKBP17‑2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。实验证明，通过促进植物中GhFKBP17‑2基因转录和脯氨酸顺反异构酶的功能酶活性，提升棉花JA(茉莉酸)防御反应，进而防治棉铃虫，而抑制植物中GhFKBP17‑2基因的表达后，增加了棉铃虫对棉花的侵蚀。
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公开(公告)号：CN116875612A
公开(公告)日：2023-10-13
申请号：CN202311087404.4
申请日：2023-08-28
IPC: C12N15/12 , C07K14/435 , C12N15/113 , C12N15/11 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/00 , A01N57/16 , A01P7/04
Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域。本发明提供了一种绿盲蝽CtsL基因及其对应的dsRNA序列和应用，所述绿盲蝽CtsL基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还包括靶向绿盲蝽CtsL基因的dsRNA序列，该序列对绿盲蝽CtsL基因具有良好的沉默效果。注射该dsRNA序列可显著降低绿盲蝽的存活率。因此，本发明所提供的CtsL基因及其致死dsRNA序列可用于转基因抗虫植物或新型杀虫剂的开发。
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