检测食品沙门氏菌的Taqman探针荧光定量PCR方法

    公开(公告)号:CN101363061A

    公开(公告)日:2009-02-11

    申请号:CN200810197170.8

    申请日:2008-10-07

    CPC classification number: Y02A50/451

    Abstract: 本发明涉及一种检测食品沙门氏菌的Taqman探针荧光定量PCR方法。针对fimY基因设计引物和Taqman探针,荧光定量PCR。在优化的反应程序和反应体系下,以水煮裂解法提取的肠炎沙门氏菌标准菌株10倍系列稀释液的基因组DNA为模板,进行荧光定量PCR,绘制标准曲线,根据线性关系R2和扩增效率E来衡量重复样品数据是否一致和不同拷贝数的初始模板是否具有相同的扩增效率。应用本发明建立的方法,对人工污染的猪肌肉和鸡蛋样本进行检测,该方法能在最高浓度为14.8×108cfu/ml干扰菌的存在下,在1~3cfu/10g的接种浓度上检出阳性。本发明使用fimY基因特异引物和Taqman探针,在优化的反应条件下检测食品中污染的沙门氏菌时,具有更高的稳定性、特异性和灵敏性,是一种快速、准确的沙门氏菌检测方法。

    一种T-2毒素的生物合成方法

    公开(公告)号:CN103421856B

    公开(公告)日:2016-06-08

    申请号:CN201210246546.6

    申请日:2012-07-17

    CPC classification number: Y02P20/582

    Abstract: 本发明属于兽医药理学技术领域,具体涉及一种T-2毒素的制备方法。以玉米颗粒为原料,经产毒镰刀菌复苏,产分生孢子,接种玉米产毒培养基培养,在产毒高峰期对培养基采用乙醇液提取、二氯甲烷萃取、一步柱层析和结晶等工艺过程,获得T-2毒素结晶的提取方法。整个提取效率可达89%,所得毒素经核磁和质谱结构鉴定正确无误,测定含量不低于95.66%,稳定性至少4个月以上。与传统提取工艺比较,本发明采用一步法柱层析即可分离纯化出大量T-2毒素,步骤简单快捷产量高,所制备的毒素性质稳定纯度高,整个提取方法极大的降低了毒素合成成本,简化了毒素合成工艺,合成的毒素可以广泛应用于毒理学、代谢实验等各种毒素相关科研领域。

    吉他霉素残留检测用基因工程抗体及制备方法和应用

    公开(公告)号:CN103288960B

    公开(公告)日:2015-01-07

    申请号:CN201210049798.X

    申请日:2012-02-29

    Abstract: 本发明公开了一种吉他霉素残留检测用基因工程抗体及制备方法和应用,其步骤:A、取液氮保存的杂交瘤细胞株KA/2A9,提取脾细胞总RNA,得到mRNA,在逆转录得到cDNA。B、扩增得到重链可变区、轻链可变区基因;以重链和轻链抗体片段互为引物,利用多肽链将抗体重链和轻链连接;C、将酶切scFv连接入E.coliTG1中,加入M13K07培养,得到吉他霉素特异性抗体的噬菌体抗体文库。D、将噬菌体加入到处于对数生长期的E.coliHB2151中,IPTG诱导,得到特异性噬菌体抗体。E、验证的大肠杆菌表达菌株测序,得到单链抗体氨基酸和核苷酸序列。方法易行,操作简便,便于基因工程抗体的大批量生产。广泛应用于动物可食性组织中吉他霉素的残留检测,提供动物可食性组织中吉他霉素的残留量信息。

    一种T-2毒素的生物合成方法

    公开(公告)号:CN103421856A

    公开(公告)日:2013-12-04

    申请号:CN201210246546.6

    申请日:2012-07-17

    CPC classification number: Y02P20/582

    Abstract: 本发明属于兽医药理学技术领域,具体涉及一种T-2毒素的制备方法。以玉米颗粒为原料,经产毒镰刀菌复苏,产分生孢子,接种玉米产毒培养基培养,在产毒高峰期对培养基采用乙醇液提取、二氯甲烷萃取、一步柱层析和结晶等工艺过程,获得T-2毒素结晶的提取方法。整个提取效率可达89%,所得毒素经核磁和质谱结构鉴定正确无误,测定含量不低于95.66%,稳定性至少4个月以上。与传统提取工艺比较,本发明采用一步法柱层析即可分离纯化出大量T-2毒素,步骤简单快捷产量高,所制备的毒素性质稳定纯度高,整个提取方法极大的降低了毒素合成成本,简化了毒素合成工艺,合成的毒素可以广泛应用于毒理学、代谢实验等各种毒素相关科研领域。

    阿苯达唑–2–氨基砜残留检测单克隆抗体及制备方法和应用

    公开(公告)号:CN103288964A

    公开(公告)日:2013-09-11

    申请号:CN201210049837.6

    申请日:2012-02-29

    Abstract: 本发明公开了一种阿苯达唑-2-氨基砜残留检测用单克隆抗体及制备方法和应用,杂交瘤细胞GA/2A11,CCTCCNO:C201142。其步骤是:a、将半抗原阿苯达唑-2-氨基砜与牛血清白蛋白偶联得到免疫原;b、将半抗原阿苯达唑-2-氨基砜与卵清蛋白偶联得到包被原;c、利用免疫原制备得到杂交瘤细胞株;d、用包被原包被固相载体;e、将待测样品用乙酸乙酯在氢氧化钾条件下提取得到待测物;f、对待测物进行酶联免疫检测;试剂盒包括:⑴包被有包被原ABZSO2NH2-GA-OVA的酶标板;⑵ABZSO2NH2标准品溶液;⑷辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG抗体工作液;⑸浓缩磷酸盐缓冲液;⑹浓缩洗涤液;⑺底物混合液;⑼终止液。试剂盒在阿苯达唑-2-氨基砜残留检测中的应用。具有简便、快速、灵敏、准确的特点。

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