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公开(公告)号:CN101363061A
公开(公告)日:2009-02-11
申请号:CN200810197170.8
申请日:2008-10-07
Applicant: 华中农业大学
CPC classification number: Y02A50/451
Abstract: 本发明涉及一种检测食品沙门氏菌的Taqman探针荧光定量PCR方法。针对fimY基因设计引物和Taqman探针,荧光定量PCR。在优化的反应程序和反应体系下,以水煮裂解法提取的肠炎沙门氏菌标准菌株10倍系列稀释液的基因组DNA为模板,进行荧光定量PCR,绘制标准曲线,根据线性关系R2和扩增效率E来衡量重复样品数据是否一致和不同拷贝数的初始模板是否具有相同的扩增效率。应用本发明建立的方法,对人工污染的猪肌肉和鸡蛋样本进行检测,该方法能在最高浓度为14.8×108cfu/ml干扰菌的存在下,在1~3cfu/10g的接种浓度上检出阳性。本发明使用fimY基因特异引物和Taqman探针,在优化的反应条件下检测食品中污染的沙门氏菌时,具有更高的稳定性、特异性和灵敏性,是一种快速、准确的沙门氏菌检测方法。
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公开(公告)号:CN109180760B
公开(公告)日:2021-09-17
申请号:CN201811003347.6
申请日:2018-08-30
Applicant: 华中农业大学
Inventor: 彭大鹏 , 陶燕飞 , 袁宗辉 , 倪腾腾 , 王延新 , 王玉莲 , 潘源虎 , 谢书宇 , 陈冬梅 , 王旭 , 黄玲利 , 郝海红 , 戴梦红 , 程古月 , 瞿伟 , 谢长清
IPC: C07H17/08 , C07K16/44 , G01N33/535 , G01N33/577
Abstract: 本发明公开了一种新型伊维菌素半抗原,它是在伊维菌素C4‑OH位置,与羧甲基羟胺半盐酸盐反应,将C4上的羟基取代为羧甲基羟胺基,该衍生物与载体蛋白偶联后作为免疫原,可用于制备抗阿维菌素类药物的单克隆抗体。本发明还公开了一种广谱的抗阿维菌素类药物的单克隆抗体,该单克隆抗体能同时特异性识别阿维菌素、伊维菌素、埃普利诺菌素和埃玛菌素,用该单克隆抗体建立的酶联免疫方法和试剂盒适用于检测动物组织中阿维菌素类药物残留,具有检测灵敏,准确度高,精密度好等优点。
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公开(公告)号:CN106565846B
公开(公告)日:2019-11-01
申请号:CN201610899714.X
申请日:2016-10-13
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K16/44 , C12N5/20 , G01N33/94 , G01N33/577 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种能识别金刚烷胺和金刚乙胺的特异性单克隆抗体,它是由杂交瘤细胞株2G3所分泌的,所述的杂交瘤细胞株2G3,保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC NO:C201625。本发明还公开了检测可食性动物组织中金刚烷胺和金刚乙胺残留的酶联免疫方法及其试剂盒。本发明制备的单克隆抗体灵敏度较高,检测的准确度高,精密度好,具有渐变、快速、易操作等优点,填补了市场上ELISA检测方法的空缺。
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公开(公告)号:CN103421856B
公开(公告)日:2016-06-08
申请号:CN201210246546.6
申请日:2012-07-17
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12P17/18 , C07D493/10 , C12R1/77
CPC classification number: Y02P20/582
Abstract: 本发明属于兽医药理学技术领域,具体涉及一种T-2毒素的制备方法。以玉米颗粒为原料,经产毒镰刀菌复苏,产分生孢子,接种玉米产毒培养基培养,在产毒高峰期对培养基采用乙醇液提取、二氯甲烷萃取、一步柱层析和结晶等工艺过程,获得T-2毒素结晶的提取方法。整个提取效率可达89%,所得毒素经核磁和质谱结构鉴定正确无误,测定含量不低于95.66%,稳定性至少4个月以上。与传统提取工艺比较,本发明采用一步法柱层析即可分离纯化出大量T-2毒素,步骤简单快捷产量高,所制备的毒素性质稳定纯度高,整个提取方法极大的降低了毒素合成成本,简化了毒素合成工艺,合成的毒素可以广泛应用于毒理学、代谢实验等各种毒素相关科研领域。
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公开(公告)号:CN103592167B
公开(公告)日:2015-08-26
申请号:CN201310578673.0
申请日:2013-11-18
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于兽药残留分析领域,具体涉及一种基于荧光素酶标记基因工程菌的氟喹诺酮类药物残留的检测方法和应用。本发明包含一种能同时检测11种氟喹诺酮类药物残留的荧光素酶标记基因工程菌的构建及应用。该工程菌为大肠杆菌(Escherichia coli)pK12,保藏号为CCTCC NO:M2013385,由含有recA启动子和荧光素酶报告基因luxCDABE的质粒pRecAlux3转化大肠杆菌K12所得。与现有技术相比,本发明构建的基因工程菌可以同时识别多种氟喹诺酮类药物,拓宽了现有技术的检测对象,具有简单、快速、灵敏、准确和半定量功能等突出优点。
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公开(公告)号:CN103421019B
公开(公告)日:2015-08-26
申请号:CN201210434826.X
申请日:2012-11-02
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07D493/10
Abstract: 本发明涉及生物毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇的微量氚标记的制备法。其包括以脱氧雪腐镰刀菌烯醇为原料,以苯硼酸保护7α,15位的两个羟基,通过斯文氧化(Swern Oxidation)将3位羟基氧化。然后以异丙醇为溶剂,采用氚标记硼氢化钠选择性还原3位羰基,得到氚标记脱氧雪腐镰刀菌烯醇。本发明的合成方法原料易得、反应条件温和、易操作,获得的氚标记化合物标记位点明确、稳定。产物的化学纯度和放化纯度均不低于98%,比活度为2.52Ci/mmol。本发明为深入开展脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒作用机制及食品安全性评价提供了重要的物质基础。
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公开(公告)号:CN103288960B
公开(公告)日:2015-01-07
申请号:CN201210049798.X
申请日:2012-02-29
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K16/44 , C12N15/13 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种吉他霉素残留检测用基因工程抗体及制备方法和应用,其步骤:A、取液氮保存的杂交瘤细胞株KA/2A9,提取脾细胞总RNA,得到mRNA,在逆转录得到cDNA。B、扩增得到重链可变区、轻链可变区基因;以重链和轻链抗体片段互为引物,利用多肽链将抗体重链和轻链连接;C、将酶切scFv连接入E.coliTG1中,加入M13K07培养,得到吉他霉素特异性抗体的噬菌体抗体文库。D、将噬菌体加入到处于对数生长期的E.coliHB2151中,IPTG诱导,得到特异性噬菌体抗体。E、验证的大肠杆菌表达菌株测序,得到单链抗体氨基酸和核苷酸序列。方法易行,操作简便,便于基因工程抗体的大批量生产。广泛应用于动物可食性组织中吉他霉素的残留检测,提供动物可食性组织中吉他霉素的残留量信息。
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公开(公告)号:CN103421856A
公开(公告)日:2013-12-04
申请号:CN201210246546.6
申请日:2012-07-17
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12P17/18 , C07D493/10 , C12R1/77
CPC classification number: Y02P20/582
Abstract: 本发明属于兽医药理学技术领域,具体涉及一种T-2毒素的制备方法。以玉米颗粒为原料,经产毒镰刀菌复苏,产分生孢子,接种玉米产毒培养基培养,在产毒高峰期对培养基采用乙醇液提取、二氯甲烷萃取、一步柱层析和结晶等工艺过程,获得T-2毒素结晶的提取方法。整个提取效率可达89%,所得毒素经核磁和质谱结构鉴定正确无误,测定含量不低于95.66%,稳定性至少4个月以上。与传统提取工艺比较,本发明采用一步法柱层析即可分离纯化出大量T-2毒素,步骤简单快捷产量高,所制备的毒素性质稳定纯度高,整个提取方法极大的降低了毒素合成成本,简化了毒素合成工艺,合成的毒素可以广泛应用于毒理学、代谢实验等各种毒素相关科研领域。
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公开(公告)号:CN103421019A
公开(公告)日:2013-12-04
申请号:CN201210434826.X
申请日:2012-11-02
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07D493/10
Abstract: 本发明涉及生物毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇的微量氚标记的制备法。其包括以脱氧雪腐镰刀菌烯醇为原料,以苯硼酸保护7α,15位的两个羟基,通过斯文氧化(Swern Oxidation)将3位羟基氧化。然后以异丙醇为溶剂,采用氚标记硼氢化钠选择性还原3位羰基,得到氚标记脱氧雪腐镰刀菌烯醇。本发明的合成方法原料易得、反应条件温和、易操作,获得的氚标记化合物标记位点明确、稳定。产物的化学纯度和放化纯度均不低于98%,比活度为2.52Ci/mmol。本发明为深入开展脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒作用机制及食品安全性评价提供了重要的物质基础。
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公开(公告)号:CN103288964A
公开(公告)日:2013-09-11
申请号:CN201210049837.6
申请日:2012-02-29
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K16/44 , C12N5/20 , G01N33/577 , G01N33/543 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种阿苯达唑-2-氨基砜残留检测用单克隆抗体及制备方法和应用,杂交瘤细胞GA/2A11,CCTCCNO:C201142。其步骤是:a、将半抗原阿苯达唑-2-氨基砜与牛血清白蛋白偶联得到免疫原;b、将半抗原阿苯达唑-2-氨基砜与卵清蛋白偶联得到包被原;c、利用免疫原制备得到杂交瘤细胞株;d、用包被原包被固相载体;e、将待测样品用乙酸乙酯在氢氧化钾条件下提取得到待测物;f、对待测物进行酶联免疫检测;试剂盒包括:⑴包被有包被原ABZSO2NH2-GA-OVA的酶标板;⑵ABZSO2NH2标准品溶液;⑷辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG抗体工作液;⑸浓缩磷酸盐缓冲液;⑹浓缩洗涤液;⑺底物混合液;⑼终止液。试剂盒在阿苯达唑-2-氨基砜残留检测中的应用。具有简便、快速、灵敏、准确的特点。
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