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公开(公告)号：CN106399370A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201610819451.7
申请日：2016-09-12
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明提供一种建立稳定转基因的牙鲆胚胎细胞株方法，是把牙鲆广泛表达的β-actin启动子启动的增强型绿色荧光蛋白且能表达G418抗性蛋白的质粒转染牙鲆胚胎细胞。24h后,荧光显微镜下观察EGFP表达，并通过G418筛选得到稳定遗传表达的胚胎细胞。本发明方法可将在牙鲆中广泛表达的β‐actin启动的外源基因有效转入牙鲆胚胎细胞，并且可以在牙鲆胚胎细胞中稳定遗传表达，为鲆鲽鱼类基因研究提供了一种新的方法，解决了因鲆鲽鱼类细胞瞬时转染效率低而难以进行细胞水平基因功能分析研究的问题，为鲆鲽鱼类分子水平遗传育种工作提供了新的技术手段，提供了用于使海水鱼类细胞系稳定遗传转基因方法。
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公开(公告)号：CN102181554B
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201110100873.6
申请日：2011-04-21
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种半滑舌鳎雌性特异的基因组DNA片段及其应用。半滑舌鳎雌性特异的基因组DNA片段，其特征在于所述的DNA片段为：(a)、具有序列为SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2的DNA片段；(b)、分别与(a)中所述DNA片段经过一个或多个核苷酸的取代、缺失或添加而形成的DNA片段，且为半滑舌鳎雌性特异的基因组DNA序列。本发明获得的半滑舌鳎雌性特异性的DNA片段作为分子标记能够有效的辨别半滑舌鳎的雌性个体，并且本发明的方法可以一次性鉴定大量个体，鉴定时间不超过90分钟，适合大规模地进行半滑舌鳎的遗传性别鉴定，能够在半滑舌鳎工厂化养殖中进行大规模的推广。
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公开(公告)号：CN104710529B
公开(公告)日：2015-10-07
申请号：CN201510178476.9
申请日：2015-04-15
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明公开了一种抗鱼类病毒性出血性败血症病毒的单链抗体及其制备方法和应用，以及编码该单链抗体的基因、含有该基因的载体和宿主细胞等。该抗鱼类病毒性出血性败血症病毒的单链抗体，是由抗体重链可变区和轻链可变区通过接头肽连接而成，并可通过原核表达系统进行高效表达。单链抗体ScFv-VS1的分子量约为28kD，能够特异识别鱼类病毒性出血性败血症病毒，阻断病毒与天然血清的结合，可进一步用于该病毒的诊断、治疗制剂的开发和抗原表位研究。
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公开(公告)号：CN104710529A
公开(公告)日：2015-06-17
申请号：CN201510178476.9
申请日：2015-04-15
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明公开了一种抗鱼类病毒性出血性败血症病毒的单链抗体及其制备方法和应用，以及编码该单链抗体的基因、含有该基因的载体和宿主细胞等。该抗鱼类病毒性出血性败血症病毒的单链抗体，是由抗体重链可变区和轻链可变区通过接头肽连接而成，并可通过原核表达系统进行高效表达。单链抗体ScFv-VS1的分子量约为28kD，能够特异识别鱼类病毒性出血性败血症病毒，阻断病毒与天然血清的结合，可进一步用于该病毒的诊断、治疗制剂的开发和抗原表位研究。
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公开(公告)号：CN103267665A
公开(公告)日：2013-08-28
申请号：CN201310191707.0
申请日：2013-05-22
Applicant: 中国海洋大学
IPC: G01N1/28
Abstract: 本发明一种制备鲆鲽鱼类单个胚胎染色体的方法，属于生物技术中的海洋动物细胞遗传学领域。使用鲆鲽鱼类的胚胎为材料，先以注射器为工具，采用物理加压的方法对胚胎材料卵膜的破除，将处于尾牙期至出膜期之间的胚胎连同海水一起置于针筒中，然后推动注射器活塞将胚胎自针头处挤压出，胚胎即可破膜，且组织保存较完整。破膜后的胚胎使用常规染色体制备方法进行染色体的制备，用秋水仙素处理2小时，然后置于低渗液中处理30分钟，最后用卡诺固定液固定三次，每次20分钟。本发明获得的鲆鲽鱼类染色体分裂相非常多，效果也很好，尤其是可以制备单个胚胎的染色体，不浪费材料，且可以针对单个个体进行后续的遗传学分析。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102242138A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201110100678.3
申请日：2011-04-21
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明涉及一种半滑舌鳎抗菌肽hepcidin的重组表达及其应用，所述的表达载体中插入了用于重组表达序列为SEQ ID NO：1的半滑舌鳎抗菌肽hepcidin的核苷酸片段，并在宿主菌中表达半滑舌鳎抗菌肽hepcidin的重组蛋白，并摸索出一种纯化重组蛋白的简单有效的方法，蛋白表达出的蛋白应用在抗病菌类产品上。本发明筛建立和筛选出能有效地进行抗菌肽重组表达的载体及宿主菌，实现了半滑舌鳎抗菌肽在原核生物体内的融合表达及简单有效的纯化，与传统的多肽合成方法及从天然资源提取多肽的方法相比，本发明的制备方法使得大批量、低成本的规模化生产成为可能，可应用于海洋养殖鱼类、养殖禽畜类的饲料添加剂和细菌性疾病的防治。
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公开(公告)号：CN113537308B
公开(公告)日：2023-11-03
申请号：CN202110730733.0
申请日：2021-06-29
Applicant: 中国海洋大学
IPC: G06F18/23213 , G06F21/62
Abstract: 本发明公开了基于本地化差分隐私的两阶段k‑means聚类处理系统及方法，将隐私预算ε分成多份，用于多次迭代，在每次迭代时，包括两个阶段，每次迭代使用的隐私预算分配到两个阶段；第一阶段基于随机响应机制，建立满足本地化差分隐私模型约束的用户与中心点归属关系判定机制，第二阶段基于拉普拉斯机制更新中心点，两个阶段都有效地避免了直接使用单个用户的带噪值完成聚类的构建，通过本发明解决k‑means算法的每步迭代中用户与中心点的归属关系判定以及中心点的更新过程中泄露用户的敏感信息问题。
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公开(公告)号：CN105385681B
公开(公告)日：2018-07-17
申请号：CN201511008017.2
申请日：2015-12-29
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种适应于鲆鲽鱼类血液RNA提取的裂解液,由盐酸胍、异硫氰酸胍、甲基溴化铵、十二烷基硫酸钠、水饱和酚、三(2‑羧乙基)膦、8－羟基喹啉、枸橼酸钠、乙二胺四乙酸、甘油、乙酸钠、氯化钠和DEPC水按照比例配制而成。使用本发明裂解液提取的鲆鲽鱼类血液RNA浓度高、完整性好、OD260/OD280比值均在2.0以上，OD260/OD230比值均在2.2以上，裂解液在室温下具有良好的稳定性。应用本发明所提供的裂解液提取的鲆鲽鱼类血液RNA，可以完全满足下游鱼类分子生物学及鱼类免疫学各项实验的质量要求。
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公开(公告)号：CN106399314A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201610879180.4
申请日：2016-10-08
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85
CPC classification number: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N2800/106 , C12N2840/80
Abstract: 本发明提供一种在牙鲆原始生殖细胞中调节基因表达的3′UTR区序列，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1；该3′UTR区序列用于调控基因在牙鲆原始生殖细胞中进行表达。本发明的3′UTR区序列为牙鲆鱼特有的序列，可以用于鲆鲽鱼、斑马鱼等鱼类生殖系细胞的示踪以及在鱼类生殖系细胞中外源基因特异表达的定位；本发明为牙鲆等鱼类原始生殖细胞的识别、标记、跟踪、分离奠定了基础，同时为开展鱼类的性别分化机制以及生殖系细胞发生发育研究提供了技术方法。
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公开(公告)号：CN104372022A
公开(公告)日：2015-02-25
申请号：CN201410624598.1
申请日：2014-11-06
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明提供一种牙鲆精子介导转基因过程中保持精子活力的方法，是利用脂质体将外源DNA包裹起来形成两者的复合物，然后将精子12000rpm高速离心15min，去除精清，再将复合物与精子共同孵育，从而用于精子介导的转基因实验和生产中。脂质体与外源质粒形成复合物的N/P参数为5，形成脂质体-DNA复合物的时间为15min，外源质粒的浓度为100ng/μl，每10μl精子与10μg外源质粒混合，混合的时间在10min至50min。通过与质粒直接与精子混合作为比较，本发明的优点为，利用脂质体将外源质粒包裹起来，有效避免外源质粒对精子的损伤，利用细胞转化的原理，即脂质体和精子质膜间的静电作用，提高外源基因的导入率，操作简便，处理时间的跨度广，便于实际操作。
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