一种大籽蒿花粉致敏的动物模型的构建方法

    公开(公告)号:CN113679833A

    公开(公告)日:2021-11-23

    申请号:CN202010424664.6

    申请日:2020-05-19

    Inventor: 尹佳 张倩

    Abstract: 本发明提供一种大籽蒿花粉致敏的动物模型的构建方法,包括步骤:致敏:分别于第0天、第7天和第14天对BALB/c小鼠颈后两前臂间皮下注射大籽蒿花粉致敏液;激发:雾化吸入1μg/μl的大籽蒿花粉蛋白浸液,连续7天,每天30min。本模型在建立过程中,通过对小鼠皮下注射大籽蒿花粉变应原致敏,雾化吸入大籽蒿花粉变应原激发,成功构建了大籽蒿花粉致敏的小鼠哮喘模型,模型小鼠可以很好的模拟人类大籽蒿花粉致敏引起的哮喘的典型特征。这个模型为研究人类大籽蒿花粉过敏性哮喘的发生机制及探索新的治疗方法提供良好的平台。

    一种大籽蒿花粉变应原浸提物、其浸液及其制备方法

    公开(公告)号:CN109939226A

    公开(公告)日:2019-06-28

    申请号:CN201910201919.X

    申请日:2019-03-18

    Abstract: 本发明提供了本发明涉及一种大籽蒿花粉变应原浸提物、其浸液及其制备方法。该大籽蒿花粉变应原浸提物,其中含有大籽蒿花粉变应原蛋白如SEQ ID NO.4-SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列。一种大籽蒿花粉变应原浸液经大籽蒿花粉收集、干燥、脱脂、提取、超滤浓缩、冷冻干燥、复溶等工艺方法制得。该大籽蒿花粉变应原浸液具有特异性高的特点,大籽蒿致敏蛋白组分提取充分,总生物效价稳定,有效期长,无菌效果好;其原液可有效用于变态反应疾病的皮肤点刺试验诊断、经适当稀释后可用于体外嗜碱性粒细胞活化试验诊断及特异性免疫治疗,可有效诊断由大籽蒿花粉诱发的变态反应疾病并对其进行特异性免疫治疗。

    一种花粉种属及花粉挥发性有机物的定性检测方法

    公开(公告)号:CN108333274A

    公开(公告)日:2018-07-27

    申请号:CN201810314876.1

    申请日:2018-04-10

    Abstract: 本发明提供了一种以气相迁移色谱分析技术对花粉挥发性有机物进行定性分析,从而鉴定花粉种属及纯度的方法。通过将花粉样品的挥发性气体进行气相迁移色谱的电离检测,根据保留指数、迁移速率和离子峰的强度进行三维定性,绘制谱图。通过定性分析不同花粉种属特异性挥发性有机物的特征,绘制特征性气相迁移色谱图谱,组建大数据库,从而实现对花粉种属的定性鉴定方法及其纯度的定量计算方法。本方法鉴定的时间短,自动化程度高,稳定可靠,准确性较高,检测通量大,也不对送检花粉的蛋白成分产生破坏,同时基于大数据分析技术,可用于对大气生物学监测,用于花粉浓度播报。

    诱导分泌表达生产重组葎草主要致敏蛋白Humj3的方法

    公开(公告)号:CN101993888B

    公开(公告)日:2012-06-13

    申请号:CN200910091766.4

    申请日:2009-08-25

    Inventor: 尹佳 周俊雄 程璇

    Abstract: 本发明提供一种在酵母系统中诱导表达重组葎草花粉主要致敏蛋白Hum j 3的方法,包括:构建表达SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的重组表达载体;线性化重组表达载体,转化感受态酵母细胞;筛选阳性克隆,得重组菌株,并扩大培养;重组菌株的诱导表达以及筛选:Hum j 3蛋白在酵母中以α-factor信号肽蛋白引导的分泌表达;以高活性的重组菌株为种子菌进行高密度的诱导表达重组Hum j 3蛋白;收集培养上清并分离纯化Humj 3。本发明首次在国际上确证了葎草主要致敏蛋白的全基因序列,并首次成功进行了酵母分泌表达,且证实了该重组蛋白具有免疫活性,为葎草花粉过敏患者的分子诊断和临床免疫治疗提供了全新的蛋白。

    一种花粉变应原制剂中致敏蛋白的定量检测方法

    公开(公告)号:CN117783539A

    公开(公告)日:2024-03-29

    申请号:CN202311807570.7

    申请日:2023-12-26

    Abstract: 本发明涉及分析检测技术领域。本发明提供了一种花粉变应原制剂中致敏蛋白的定量检测方法,包括:(1)将花粉变应原参考品预处理后,酶解,得到花粉变应原肽段;(2)将花粉变应原肽段进行LC‑MS分析,筛选目标特异性肽段,合成筛选获得的目标特异性肽段的重标肽;(3)将待测花粉变应原制剂预处理后,酶解,得到待测花粉肽段,然后利用步骤(2)合成的重标肽为标准品,进行MRM测定,获得待测花粉变应原制剂中致敏蛋白的绝对含量。本发明所述定量检测方法具有高通量、高灵敏度、高特异性、高准确度、重复性好、稳定可靠、成本低等优点;也进一步实现对花粉变应原制剂的精确质控,推动变应原特异性免疫治疗的精准化。

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