马流感病毒核蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN102242082A

    公开(公告)日:2011-11-16

    申请号:CN201110105382.0

    申请日:2011-04-26

    Abstract: 本发明公开了马流感病毒核蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明利用原核表达的马流感病毒(EIV)核蛋白(NP)为免疫原,细胞融合后通过有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选,获得两株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株2G11和3E10。两株单抗均能产生较高的腹水效价,Western-blot分析表明,所获得的2株单抗均能特异性识别EIV NP重组蛋白;间接免疫荧光试验证明,2株单抗能够与天然EIV结合;ELISA测定,2株单抗与马动脉炎病毒、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒4型、马乙型脑炎病毒均不发生交叉反应。本发明为抗EIV NP单抗的制备及后期EIV检测方法的建立提供了物质基础。

    一种改进型马传染性贫血琼扩抗原生产工艺

    公开(公告)号:CN101451994A

    公开(公告)日:2009-06-10

    申请号:CN200710144764.8

    申请日:2007-12-07

    Abstract: 一种改进型马传染性贫血琼扩抗原生产工艺,清除毒细胞培养物中的细胞、牛血清及色素;将收获的接毒细胞培养物分为细胞相病毒和液相病毒并分别进行处理;毒细胞培养物的细胞相病毒直接加入原体积份数的20%的0.01MpH7.4PBS,3次冻融裂解细胞;倒入有玻璃珠的三角瓶中,加入乙醚摇晃,然后进行机械正压鼓风除乙醚,放入冰箱冷藏室中在4℃条件下沉降2小时吸出上清,制备出无色透明的马传染性贫血病琼脂扩散反应诊断抗原,再标定其效价;最后冻干保存。本发明工艺简单、成本低廉,比现有技术提高成品率4倍,与我国现行《规程》生产马传贫琼扩抗原液在外观性状和抗原性没有差别;比国外同类产品所产生的琼扩沉淀线更清晰、更致密而且更长,更有利于判断,即抗原性更好,可广泛用做各种马的马传贫检测抗原。

    诊断马流感病毒和鉴定其亚型的多重RT-PCR方法

    公开(公告)号:CN101328508A

    公开(公告)日:2008-12-24

    申请号:CN200810132409.3

    申请日:2008-07-15

    Abstract: 本发明公开了一种诊断马流感病毒(EIV)和鉴定其亚型的多重RT-PCR方法,包括:以待检样品RNA为模板,以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4两组核苷酸序列为多重引物进行RT-PCR反应;如果从样品中只扩增出了227bp的产物,则该样品为EIV的H7N7亚型;如果同时扩增出了227bp和595bp的产物,则该样品为EIV的H3N8亚型;如果未扩增出227bp的产物,则该样品不含有EIV。本发明根据RT-PCR技术原理,根据EIV只有两种HA亚型的特点,建立了多重RT-PCR检测方法,其敏感性强、特异性高,可以用于EIV的快速诊断和亚型鉴定。

    马流感病毒核蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN102242082B

    公开(公告)日:2012-10-24

    申请号:CN201110105382.0

    申请日:2011-04-26

    Abstract: 本发明公开了马流感病毒核蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明利用原核表达的马流感病毒(EIV)核蛋白(NP)为免疫原,细胞融合后通过有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选,获得两株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株2G11和3E10。两株单抗均能产生较高的腹水效价,Western-blot分析表明,所获得的2株单抗均能特异性识别EIV NP重组蛋白;间接免疫荧光试验证明,2株单抗能够与天然EIV结合;ELISA测定,2株单抗与马动脉炎病毒、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒4型、马乙型脑炎病毒均不发生交叉反应。本发明为抗EIV NP单抗的制备及后期EIV检测方法的建立提供了物质基础。

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