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公开(公告)号：CN103305551A
公开(公告)日：2013-09-18
申请号：CN201310232306.5
申请日：2013-06-09
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/873 , C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了一种基于囊胚上基因表达水平筛选供体细胞系的方法，将来源不同个体的供体细胞系进行核移植后，在囊胚期检测TCF7、DGCR8、SENP7、DNMT3B、Vimentin、IFI6、EFNA2、F5、IRAK1、PRICKLE1、TNFRSF1A、ARG2、NEK6、OCT4、NANOG、SOX2、CDX2、XIST和IGF2R的表达水平，选择在克隆囊胚上这些基因的表达水平全部与正常发育的体外受精囊胚上的表达水平差异不显著的供体细胞系为核供体细胞，可显著提高牛体细胞克隆效率。
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公开(公告)号：CN102517294B
公开(公告)日：2013-08-07
申请号：CN201110402670.2
申请日：2011-12-07
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/12 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/877
Abstract: 本发明公开了一种基于Ipr1基因构建的巨噬细胞异性打靶载体和重组细胞，通过在Ipr1基因5′端连接MSR1启动子使Ipr1基因在牛的巨噬细胞中特异的高效表达；并进一步构建重组基因LA-MSR1-Ipr1-SA，使目的基因定点整合在牛28号染色体SP-A与MAT1A基因之间。构建了Ipr1巨噬细胞特异性打靶载体pLMIS，将其转染到新生牛耳成纤维细胞，通过G418和GCV正负筛选，构建转基因的新生牛耳成纤维细胞系，作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚；胚胎移植后，生产出定点插入Ipr1基因的转基因牛5头，其中4头存活，转基因牛对M.bovis有抗性。
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公开(公告)号：CN103215295A
公开(公告)日：2013-07-24
申请号：CN201310126017.7
申请日：2013-04-11
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/63 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种β-酪蛋白位点定点整合Lys基因的打靶载体及其构建的细胞，包括目的基因Lys，在的基因Lys的上游和下游分别设有5’同源臂和3’同源臂，以牛β-酪蛋白位点第二内含子锌指核酸酶识别位点的上下游各延伸700～850bp的同源序列作为5’同源臂和3’同源臂。本发明使用电穿孔的方法将打靶载体pCSN2-Lys-Neo-EGFP和锌指核酸酶表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，经过G418药物筛选和PCR分析后获得了打靶的阳性克隆细胞，以打靶的阳性克隆细胞为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚胎，为研制抗乳房炎的转基因奶牛提供坚实的基础。
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公开(公告)号：CN102533857A
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN201210039495.X
申请日：2012-02-21
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞，构建了一种包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体Muc1-loxp-EGFP-HBD3，以及基于该载体的包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞系，利用该细胞系作为核供体细胞，为解决奶牛结核病的转基因奶牛提供坚实的基础。本发明通过电转染法将外源性表达载体Muc1-loxp-EGFP-HBD3导入牛胎儿成纤维细胞，荧光显微镜观察标记基因EGFP的表达情况，并经G418筛选获得阳性细胞，经PCR鉴定，证实目的基因HBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；最后，将转染HBD3基因的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚。
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公开(公告)号：CN112941203A
公开(公告)日：2021-06-11
申请号：CN202110304073.X
申请日：2021-03-22
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6858 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种牛ITGβ5基因插入/缺失突变的检测方法及其应用。以牛全基因组DNA为模板，通过PCR技术扩增牛ITGβ5基因部分片段，应用琼脂糖凝胶电泳鉴定个体ITGβ5基因13‑bp InDel多态性位点的基因型。根据性状关联分析结果，ITGβ5基因13‑bpInDel多态性位点的基因型与母牛的繁殖性状显著相关。因此，ITGβ5基因13‑bp InDel多态性位点可用于母牛繁殖性状的早期标记辅助选择，以加快建立遗传资源优良的牛群体。
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公开(公告)号：CN112795667A
公开(公告)日：2021-05-14
申请号：CN202110302857.9
申请日：2021-03-22
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6858
Abstract: 本发明公开了一种牛FRAS1基因插入/缺失突变的检测方法及其应用。以牛全基因组DNA为模板，通过PCR扩增牛FRAS1基因部分片段，应用琼脂糖凝胶电泳鉴定个体FRAS1基因15‑bp缺失突变位点的基因型。根据性状关联分析结果，FRAS1基因15‑bp缺失突变位点的基因型与母牛繁殖性状显著相关。因此，FRAS1基因15‑bp缺失突变位点可用于母牛繁殖性状的早期标记辅助选择，以加快建立遗传资源优良的牛群体。
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公开(公告)号：CN108103011B
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201810134698.4
申请日：2018-02-09
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/075
Abstract: 本发明提供一种牛卵母细胞体外成熟培养液及培养方法，成熟培养液包括10％的胎牛血清和1％的ITS‑G，并含有0.075IU/mL的HMG、1μg/mL的17β‑雌二醇、10ng/mL的EGF、2.2mg/mL的bFGF和50ng/mL的CXCL12。利用上述培养液进行牛卵母细胞体外成熟培养，可以提高牛卵母细胞体外培养的成熟质量、体外受精胚胎发育率和体细胞核移植胚胎发育率和囊胚质量。
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公开(公告)号：CN106086080A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610537461.1
申请日：2016-07-08
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/877 , C12N5/073
CPC classification number: C12N15/8771 , C12N5/0604
Abstract: 本发明公开了一种利用微小核糖核酸提高牛克隆效率的方法，在体细胞核移植的电融合液中加入bta‑miR‑125b mimic，可以有效地导入到胚胎中，在避免产生转染的二次损伤的同时，还能有效地减弱体细胞克隆胚在合子激活时期的组蛋白H3K9me3表观遗传修饰水平，显著提高牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量。
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公开(公告)号：CN104293833A
公开(公告)日：2015-01-21
申请号：CN201410528091.6
申请日：2014-10-09
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种基于TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体及重组细胞，对牛胎儿成纤维细胞进行基因打靶获得的M-S位点定点敲入Sp110基因的牛胎儿成纤维细胞。利用打靶载体中的MSR1启动子，使得定点敲入的Sp110在且仅在牛的外周血巨噬细胞中正常转录和表达。本发明利用电穿孔的方法将打靶载体和TALEN位点特异性核酸切割酶表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，通过PCR和Southern Blotting筛选和验证获得了打靶的阳性克隆细胞。以该阳性克隆细胞为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚胎。将转基因克隆胚胎移植到发情的受体牛子宫中，最终生产成活的转基因克隆牛。
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