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公开(公告)号：CN102628061A
公开(公告)日：2012-08-08
申请号：CN201210100590.6
申请日：2012-04-09
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种HBD3乳腺特异性表达载体及构建的重组细胞，该载体包含带有信号转导肽的HBD3基因，分别在HBD3基因的上游和下游设有CSN5和CSN3作为调控元件。所述的重组细胞其宿主细胞为牛胎儿成纤维细胞，将外源性表达载体pARNG-HBD3在φC31整合酶的作用下整合到假attP位点，通过药物筛选取得阳性克隆，再经过Cre重组酶的处理，去除载体上两个同向LoxP序列之间的抗生素筛选标记。以去除抗生素筛选标记的包含HBD3的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫有望生产出无抗生素筛选标记的转HBD3基因的奶牛。
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公开(公告)号：CN102517294A
公开(公告)日：2012-06-27
申请号：CN201110402670.2
申请日：2011-12-07
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/12 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/877
Abstract: 本发明公开了一种基于Ipr1基因构建的巨噬细胞异性打靶载体和重组细胞，通过在Ipr1基因5′端连接MSR1启动子使Ipr1基因在牛的巨噬细胞中特异的高效表达；并进一步构建重组基因LA-MSR1-Ipr1-SA，使目的基因定点整合在牛28号染色体SP-A与MAT1A基因之间。构建了Ipr1巨噬细胞特异性打靶载体pLMIS，将其转染到新生牛耳成纤维细胞，通过G418和GCV正负筛选，构建转基因的新生牛耳成纤维细胞系，作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚；胚胎移植后，生产出定点插入Ipr1基因的转基因牛5头，其中4头存活，转基因牛对M.bovis有抗性。
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公开(公告)号：CN101591672A
公开(公告)日：2009-12-02
申请号：CN200910022664.7
申请日：2009-05-22
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明涉及一种包含hBD3乳腺特异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞，包括一种hBD3乳腺特异性表达载体，包含目的基因hBD3，分别在hBD3基因的5′端和3′端插入调控元件；所述的hBD3乳腺特异性表达载体为pEBB表达载体。一种包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞，其宿主细胞为牛胎儿成纤维细胞，通过转染外源性表达载体pEBB，将目的基因hBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组。以包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得转基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫有望生产出转hBD3基因的奶牛。
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公开(公告)号：CN110042123B
公开(公告)日：2023-01-17
申请号：CN201910307633.X
申请日：2019-04-17
Abstract: 本发明公开了一种提高牛体细胞克隆效率的方法，通过诱导表达zfp57基因使牛克隆胚胎发育过程中的印迹基因甲基化恢复正常水平，从而提高牛体细胞克隆效率。本发明提供的一种提高牛体细胞克隆效率的方法，利用zfp57纠正牛克隆胚胎上异常的印迹基因低甲基化，使其甲基化水平到达和体外受精胚胎接近的水平，从而提高牛克隆胚胎的胚胎质量，促进牛克隆胚胎的发育；为阐明体细胞克隆胚胎重编程过程中甲基化印迹异常的机理以及体细胞克隆效率低下的原因提供理论依据。
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公开(公告)号：CN110283847A
公开(公告)日：2019-09-27
申请号：CN201910482661.5
申请日：2019-06-04
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/90 , C12N15/113 , C12N5/10 , C12N15/877
Abstract: 本发明公开了一种同时定点整合FAD3和FABP4基因的载体及重组细胞，利用电穿孔的方法将靶向Rosa26基因的Cas9切割载体和打靶载体共转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞，实现将FAD3和FABP4基因同时定点插入到鲁西黄牛胎儿成纤维细胞基因组中；通过Junction PCR筛选和验证获得了打靶阳性克隆细胞；以本发明定点插入外源基因的阳性细胞为供核细胞移入去核的牛成熟卵母细胞中，获得转基因克隆胚胎，进一步将克隆胚胎移植到受体牛体内，可获得所期望的转基因牛。本发明为快速、高效研制优质转基因肉牛育种新材料提供了供核细胞和技术方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103820494B
公开(公告)日：2016-03-02
申请号：CN201410073055.5
申请日：2014-02-28
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种可去除随机整合的位点特异性整合载体及其构建方法和应用，包括pUC ori、attB序列和多克隆位点MCS，在attB序列上下游分别设有第一loxP序列和第一rox序列，CMV启动子连接在第一loxP序列的上游，负筛选基因与第一rox序列相连接，负筛选基因下游还连接有内核糖体结合位点IRES2，IRES2下游为荧光标记基因，荧光标记基因下游为MCS，MCS上下游分别设有第二rox序列和第二loxP序列，并且分别与第一rox序列和第一loxP序列方向相同，MCS下游为正筛选元件。本发明为在细胞筛选中提供剔除随机整合重组细胞而直接筛选出假attP位点特异整合的重组细胞的新的应用。
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公开(公告)号：CN103820494A
公开(公告)日：2014-05-28
申请号：CN201410073055.5
申请日：2014-02-28
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种可去除随机整合的位点特异性整合载体及其构建方法和应用，包括pUC？ori、attB序列和多克隆位点MCS，在attB序列上下游分别设有第一loxP序列和第一rox序列，CMV启动子连接在第一loxP序列的上游，负筛选基因与第一rox序列相连接，负筛选基因下游还连接有内核糖体结合位点IRES2，IRES2下游为荧光标记基因，荧光标记基因下游为MCS，MCS上下游分别设有第二rox序列和第二loxP序列，并且分别与第一rox序列和第一loxP序列方向相同，MCS下游为正筛选元件。本发明为在细胞筛选中提供剔除随机整合重组细胞而直接筛选出假attP位点特异整合的重组细胞的新的应用。
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公开(公告)号：CN102676559B
公开(公告)日：2013-10-23
申请号：CN201110390905.0
申请日：2011-11-30
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/57 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873 , C12R1/44
Abstract: 本发明公开了一种重组溶葡萄球菌素位点特异性整合载体及其构建的重组细胞，重组溶葡萄球菌素基因由牛生长激素信号肽加上突变的溶葡萄球菌素成熟肽组成，在他的5′端和3′端加入酪蛋白基因的调控序列，在酪蛋白5′端和EGFP的终止密码子后各添加一个鸡β乳球蛋白的绝缘子元件。用整合了目的基因的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得转基因克隆胚胎。通过胚胎移植技术将发育正常的转基因克隆胚胎，有望生产出转重组溶葡萄球菌素基因的抗乳房炎的高产奶牛。
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公开(公告)号：CN102807993A
公开(公告)日：2012-12-05
申请号：CN201210319587.3
申请日：2012-08-31
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种骨骼肌特异性的靶向Myostatin基因的miRNA表达载体及重组细胞，首先构建含有靶向Myostatin基因的pre-miRNA和MYL1基因启动子的骨骼肌特异性miRNA表达载体pmiR-MNM2，然后通过电转染法将外源性表达载体pmiR-MNM2导入红安格斯新生牛成纤维细胞并经G418筛选获得阳性细胞，进行PCR鉴定，证实目的基因整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；将转染pmiR-MNM2的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫，为生产具有双肌性状的红安格斯克隆牛奠定了坚实的基础。
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公开(公告)号：CN102676559A
公开(公告)日：2012-09-19
申请号：CN201110390905.0
申请日：2011-11-30
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/57 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873 , C12R1/44
Abstract: 本发明公开了一种重组溶葡萄球菌素位点特异性整合载体及其构建的重组细胞，重组溶葡萄球菌素基因由牛生长激素信号肽加上突变的溶葡萄球菌素成熟肽组成，在他的5′端和3′端加入酪蛋白基因的调控序列，在酪蛋白5′端和EGFP的终止密码子后各添加一个鸡β乳球蛋白的绝缘子元件。用整合了目的基因的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得转基因克隆胚胎。通过胚胎移植技术将发育正常的转基因克隆胚胎，有望生产出转重组溶葡萄球菌素基因的抗乳房炎的高产奶牛。
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