公开(公告)号：CN102687667A

公开(公告)日：2012-09-26

申请号：CN201210203083.5

申请日：2012-06-19

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 熊兴耀 ,  李炎林 ,  张家银 ,  石梦蝶 ,  秦宇

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种红豆杉成熟胚乳诱导单倍体胚乳愈伤组织的方法。包括：（1）种子外种皮剥离：利用机械破壳，手工剥离外种皮；（2）外植体消毒：依次经70%酒精消毒90s和0.1%氯化汞消毒12min，无菌水冲洗5次后备用；（3）种子预处理：用无菌水密封常温浸种1-5天；（4）胚乳组织的分离；（5）胚乳愈伤组织的离体诱导：将种子胚乳接种到愈伤组织诱导培养基上，30天后可以获得97.92%的诱导率。本发明能简便、快速获得红豆杉成熟胚乳愈伤组织，为简化遗传分析、染色体操作、作为转基因材料以及基因组学研究材料打下基础。

公开(公告)号：CN105638645A

公开(公告)日：2016-06-08

申请号：CN201511022867.8

申请日：2015-12-30

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 熊兴耀 ,  李炎林 ,  苏小军 ,  张家银

IPC: A01N3/00 ,  A01H4/00

CPC classification number: A01N3/00 ,  A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种红豆杉悬浮细胞包埋玻璃化超低温保存方法。包括：(1)红豆杉愈伤组织的悬浮培养：挑取培养15d的白色或者淡黄色的愈伤组织，使用改良的MS-I号培养基；(2)红豆杉细胞系悬浮预培养：使用改良的MS-II号培养基预培养1天；(3)包埋；(4)预处理：用预装载液LB7处理胶球30～60分钟；(5)装载：用PVS3对胶球处理30～60分钟；(6)冷冻保存；(7)解冻：用45℃恒温水浴1分钟左右化冻；(8)恢复培养，在6周左右可以恢复生长。本发明方法操作简单易行，且恢复生长时间短，适合大规模的红豆杉种质资源的保存，方法适合多种红豆杉细胞系的保存，具有广谱的适应性。