公开(公告)号：CN102140501A

公开(公告)日：2011-08-03

申请号：CN201010550861.9

申请日：2010-11-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 邬敏辰 ,  史红玲 ,  高金湖 ,  谭中标 ,  李剑芳 ,  吴静 ,  汪俊卿

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明是一种利用限制性内切酶酶切、pUCm-T载体和巢式PCR扩增等技术，基于已知DNA序列确定其3′端侧翼未知DNA序列的方法。该方法通过选用限制性内切酶酶切基因组DNA，纯化的酶切产物用Taq酶或Ex Taq酶进行补齐和3′端加A反应，与pUCm-T载体连接；利用引物设计软件选定T载体上T/A克隆位点下游的一段序列作为3′端引物；选定两条靠近未知序列端的已知DNA上的序列作为5′端引物。以pUCm-T载体连接物为模板，用设计的引物进行巢式PCR扩增，并对其扩增片段进行克隆和测序。本发明具有操作简便、应用范围广、操作限制少、结果验证简捷、未知序列长度不限和成本低廉等特点。

公开(公告)号：CN102127558A

公开(公告)日：2011-07-20

申请号：CN201010581376.8

申请日：2010-12-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 邬敏辰 ,  汪俊卿 ,  张慧敏 ,  李剑芳

IPC: C12N15/56 ,  C12N9/42 ,  C12N15/10 ,  C12N15/09

Abstract: 本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001菌株的新型β-1，4-内切木聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆方法，其核苷酸序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ IDNO：2。生物信息学分析表明该木聚糖酶属于糖苷水解酶第11家族，命名为Aus Xyn11B，其氨基酸序列为SEQ ID NO：3，相应的基因命名为Aus xyn11B。本发明还公开了木聚糖酶工程菌的构建以及重组木聚糖酶的高效表达和纯化的方法。制备的重组β-1，4-内切木聚糖酶的最适作用温度和pH分别为50℃和4.6，在pH 3.0-9.0、50℃以下稳定，具有较大的工业化生产潜力和经济价值。

公开(公告)号：CN103627808A

公开(公告)日：2014-03-12

申请号：CN201310666359.8

申请日：2013-12-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 邬敏辰 ,  汪俊卿 ,  胡蝶 ,  朱利娟 ,  李剑芳

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/686 ,  C12Q1/6848 ,  C12Q2521/301 ,  C12Q2525/301 ,  C12Q2549/119

Abstract: 本发明是一种利用限制性内切酶、T-发卡结构(HSO-T)和巢式PCR扩增等技术，基于已知DNA序列扩增其5′或3′端侧翼未知序列的方法。该方法设计一条HSO-T的寡聚核苷酸序列；用单一限制性内切酶酶切基因组DNA并经rTaq或Ex Taq修饰；HSO-T接头与修饰后基因组连接；根据HSO-T序列合成引物THSO-F，根据已知DNA序列合成2条下游引物或2条上游引物；以连接物为模板，引物THSO-F和2条下游引物进行巢式PCR扩增获得5′端未知序列；同理，引物HSO-F和2条上游引物进行巢式PCR获得3′端未知序列。该技术操作简便、应用范围广、成本低廉、高效准确等优点，具有广阔应的用前景。

公开(公告)号：CN102719457A

公开(公告)日：2012-10-10

申请号：CN201110410553.0

申请日：2011-12-12

Applicant: 江南大学

Inventor： 邬敏辰 ,  高树娟 ,  张慧敏 ,  李剑芳 ,  汪俊卿

IPC: C12N15/56 ,  C12N9/42 ,  C12N15/62 ,  C12N15/10 ,  C12N15/63 ,  C12N1/19 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明提出了一种新型地利用计算机技术与生物信息学方法对常温的木聚糖酶进行理性设计，运用基因工程的方法构建杂合木聚糖酶工程菌以及重组杂合木聚糖酶的高效表达的方法。将来源于米曲霉(Aspergillus oryzae)CICC 40186菌株的常温木聚糖酶基因进行热稳定性定向改造，获得了两种杂合木聚糖酶，其热稳定性有了很大的提高，作为一种耐热型的酶制剂，该木聚糖酶具有较大的工业化生产潜力和经济价值。

公开(公告)号：CN102127557A

公开(公告)日：2011-07-20

申请号：CN201010581355.6

申请日：2010-12-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 邬敏辰 ,  张慧敏 ,  汪俊卿 ,  李剑芳

IPC: C12N15/56 ,  C12N9/42 ,  C12N15/10 ,  C12N15/09

Abstract: 本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001菌株的新型β-1，4-内切木聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆方法，其核苷酸序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ IDNO：2。生物信息学分析表明该木聚糖酶属于糖苷水解酶第11家族，命名为Aus Xyn11A，其氨基酸序列为SEQ ID NO：3，相应的基因命名为Aus xyn11A。本发明还公开了Aus Xyn11A工程菌的构建以及重组Aus Xyn11A的高效表达和纯化的方法，制备的重组Aus Xyn11A的最适作用温度和pH分别为50℃和5.0，在pH 3.0-7.0、50℃以下稳定，具有较大的工业化生产潜力和经济价值。