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公开(公告)号：CN106047829A
公开(公告)日：2016-10-26
申请号：CN201610453958.5
申请日：2016-06-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明是一种新型来源的过氧化氢酶及其重组工程菌的构建。本发明在于：首次根据短小芽孢杆菌的过氧化氢酶基因设计引物并构建了重组表达载体。将载体转化至基因工程菌大肠杆菌及枯草芽孢杆菌进行异源表达。利用发酵培养基对重组工程菌进行5L发酵罐发酵培养，其中重组大肠杆菌的过氧化氢酶主要在胞内表达，酶活为6645U/mL，重组B.subtilis 168的过氧化氢酶总酶活达到23263U/mL，胞外酶活为15368U/mL，而在B.subtilis WB600的过氧化氢酶总酶活高达26635U/mL，胞外酶活为20128U/mL，利用B.subtilis WB600为宿主更有利于胞外合成过氧化氢酶，具有重要的工业应用价值。这是目前报道的利用微生物生产过氧化氢酶的最高产量，为其工业化生产提供了一种实际有效策略。
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公开(公告)号：CN106479988B
公开(公告)日：2019-08-06
申请号：CN201610978442.2
申请日：2016-11-08
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0008 , C12Y102/01002
Abstract: 本发明公开了一种酶活和稳定性提高的甲酸脱氢酶突变体及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的氨基酸的基础上，将第10位丙氨酸突变成半胱氨酸。本发明得到的突变体酶比酶活较突变前提高1.3倍，60度的半衰期(t1/2)较突变期提高了6.8倍，铜离子耐受性较突变前提高30倍，pH＝4的条件下稳定性提高了2.0倍同时催化效率提高1.4倍。本发明表明10位氨基酸残基突变成半胱氨酸与天然甲酸脱氢酶的30位半胱氨酸残基形成正确的二硫键从而提高了酶的稳定性和催化效率，加强了该酶的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN105296455A
公开(公告)日：2016-02-03
申请号：CN201510818842.2
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明是一种苏氨酸脱氨酶活性包涵体的制备及其应用。本发明在于：成功得到了一株可以产苏氨酸脱氨酶活性包涵体的重组工程菌，苏氨酸脱氨酶活性包涵体易于分离及重复利用，性质稳定，在不同的使用环境及使用一段时间后依然可以保持较高的酶活，且可以积累101.6g/Lα-酮丁酸，有效的解除了产物α-酮丁酸的反馈抑制作用。为α-酮丁酸及α-氨基丁酸的制备过程中的问题提供了有效的技术解决方案。
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公开(公告)号：CN105255934A
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201510814936.2
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明是一种串联葡萄糖脱氢酶及L-氨基酸脱氢酶重组大肠杆菌用于联产α-氨基丁酸和葡萄糖酸的方法。将葡萄糖脱氢酶基因与L-氨基酸脱氢酶基因构建重组共表达载体并将其转化至基因工程菌大肠杆菌内。同时构建好表达L-苏氨酸脱氨酶的重组大肠杆菌。高效共表达葡萄糖脱氢酶及L-氨基酸脱氢酶于大肠杆菌中可以促进辅因子在菌体胞内的循环，不需要添加任何外源辅因子，利用该辅因子循环再生系统可以利用廉价底物L-苏氨酸及葡萄糖联产高附加值的α-氨基丁酸和葡萄糖酸，该转化过程简单快捷，成本低廉。在5L发酵罐中该方法所得的α-氨基丁酸和葡萄糖酸产量分别可达102.8g/L及196.8g/L，为其工业化生产提供了一种实际有效策略。
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公开(公告)号：CN108103038B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201711352466.8
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效合成L‑苯甘氨酸的单细胞工厂及其构建与应用，属于微生物技术领域。本发明首先实现了来源于Bacillus cereus的亮氨酸脱氢酶在大肠杆菌中的高效表达，并通过定点突变得到还原特性显著提高的突变体N71S，并将该突变酶与甲酸脱氢酶突变体在大肠杆菌中共表达，形成胞内原位辅因子NADH循环体系，通过启动子和RBS序列优化控制甲酸脱氢酶突变体的表达量，成功构建了重组大肠杆菌单细胞工厂，并利用单细胞工厂进行全细胞转化制备L‑苯苷氨酸，该方法转化过程简单快捷，成本低廉，没有副产物，利于分离纯化，在5L发酵罐中转化4h，L‑苯甘氨酸产量可达105.7g/l，转化率为93.3％，L‑苯苷氨酸的时空产率为26.3g/L·h，为L‑苯苷氨酸的工业化生产提供了一种实际有效的策略。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108559735B
公开(公告)日：2020-07-07
申请号：CN201810443305.8
申请日：2018-05-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供一种亮氨酸脱氢酶突变体的构建及其应用，属于基因工程领域。本发明提供了SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6及SEQ ID NO.8三个亮氨酸脱氢酶突变体，以及上述突变体或产生突变体的基因工程菌在氨化还原α‑酮酸制备光学纯手性L‑α‑氨基酸中的应用。本发明在于：所述亮氨酸脱氢酶突变体或含有突变体基因工程菌氨化还原制备L‑α‑氨基酸具有高催化活性及稳定性，能够合成高光学纯度L‑α‑氨基酸(ee>99％)，如突变体酶催化L‑苯甘氨酸的转化速率提高了2.62倍，为其工业化生产提供了一种实际有效策略。
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公开(公告)号：CN105331650A
公开(公告)日：2016-02-17
申请号：CN201510817621.3
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明是一种串联甘油脱氢酶及L-氨基酸脱氢酶重组大肠杆菌用于联产α-氨基丁酸和二羟基丙酮的方法。本发明在于：将甘油脱氢酶基因与L-氨基酸脱氢酶基因构建重组共表达载体并将其转化至基因工程菌大肠杆菌内。同时构建好表达L-苏氨酸脱氨酶的重组大肠杆菌。高效共表达甘油脱氢酶及L-氨基酸脱氢酶于大肠杆菌中可以促进辅因子在菌体胞内的循环，不需要添加任何外源辅因子，利用该辅因子循环再生系统可以利用廉价底物L-苏氨酸及甘油联产高附加值的α-氨基丁酸和二羟基丙酮，该转化过程简单快捷，成本低廉。在5L发酵罐中该方法所得的α-氨基丁酸和二羟基丙酮产量分别可达41.2g/L及38.2g/L，为其工业化生产提供了一种实际有效策略。
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公开(公告)号：CN110607290B
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN201911046656.6
申请日：2019-10-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种底物特异性提高的苯丙氨酸脱氢酶突变体及其应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明的苯丙氨酸脱氢酶突变体对苯丙酮酸的底物特异性较野生型有了明显的改善，同时，对L‑正缬氨酸、L‑亮氨酸、L‑缬氨酸、L‑苯甘氨酸的特异性较野生型有了明显的降低，因此，将本发明的苯丙氨酸脱氢酶突变体用于血液等样品中苯丙氨酸含量的检测时，可排除其他氨基酸的干扰，提高检测灵敏度，在制备苯丙氨酸检测试剂盒以及苯丙酮尿症检测试剂盒方面具有极高的应用前景。
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公开(公告)号：CN110607290A
公开(公告)日：2019-12-24
申请号：CN201911046656.6
申请日：2019-10-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种底物特异性提高的苯丙氨酸脱氢酶突变体及其应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明的苯丙氨酸脱氢酶突变体对苯丙酮酸的底物特异性较野生型有了明显的改善，同时，对L-正缬氨酸、L-亮氨酸、L-缬氨酸、L-苯甘氨酸的特异性较野生型有了明显的降低，因此，将本发明的苯丙氨酸脱氢酶突变体用于血液等样品中苯丙氨酸含量的检测时，可排除其他氨基酸的干扰，提高检测灵敏度，在制备苯丙氨酸检测试剂盒以及苯丙酮尿症检测试剂盒方面具有极高的应用前景。
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公开(公告)号：CN106399216B
公开(公告)日：2019-12-10
申请号：CN201611006643.2
申请日：2016-11-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效合成α‑氨基丁酸的单细胞工厂及其构建与应用，属于微生物技术领域。本发明将L‑苏氨酸脱氨酶、L‑氨基酸脱氢酶及提供辅因子NADH循环的脱氢酶基因串联表达构建重组的大肠杆菌单细胞工厂用于α‑氨基丁酸高效合成，通过rbs序列优化控制L‑苏氨酸脱氨酶的表达量，解决中间产物酮丁酸的快速积累而抑制转化的问题，同时通过启动子及rbs序列优化控制提供辅因子NADH循环的脱氢酶表达量，增强NADH再生速率最终增加产量。利用单细胞工厂进行全细胞转化可减少物质进出障碍加快转化速率，促进辅因子胞内循环而无需外源添加，成本低廉。在20h内，5L发酵罐中重组大肠杆菌单细胞工厂产量为204g/L，时空产率10.2g/L·h，为其工业化生产提供实际有效策略。
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