基于Spacer基因定向插入HiBit标签的细胞系、重组病毒及其制备方法与应用

    公开(公告)号:CN116064659A

    公开(公告)日:2023-05-05

    申请号:CN202210890946.4

    申请日:2022-07-27

    Applicant: 武汉大学

    Abstract: 本发明提供了一种基于Spacer基因定向插入HiBit标签的细胞系、重组病毒及其制备方法与应用,将载体pCDN3.1‑CMV‑G418通过SacI/PmeI双酶切获得线性化片段,将SEQ IDNO.4‑SEQ ID NO.5所示引物和SEQ ID NO.6‑SEQ ID NO.7所示引物对D型HBV1.3倍体质粒扩增获得片段1和片段2,与所述线性化片段通过无缝克隆获得重组质粒,经ScaI单酶切后转染肝癌细胞,经抗性筛选获得基于Spacer基因定向插入HiBit标签的具有复制能力的细胞系。源于该细胞模型可获得具有复制感染能力的新型重组病毒,可完成病毒的整个生活周期,实现简单快速的检测和抗病毒药物高通量的筛选。

    新型冠状病毒NSP13基因的用途

    公开(公告)号:CN113388626B

    公开(公告)日:2022-10-25

    申请号:CN202110662421.0

    申请日:2021-06-15

    Applicant: 武汉大学

    Abstract: 本发明提供了新型冠状病毒NSP13基因的新用途,将新型冠状病毒NSP13基因制备成允许表达SARS‑CoV‑2NSP13蛋白的产品,其在真核细胞中表达的SARS‑CoV‑2NSP13蛋白,可以显著性地抑制真核表达质粒的表达,且SARS‑CoV‑2NSP13蛋白只抑制真核表达质粒的表达,但不抑制真核细胞基因组中基因的表达,进一步地,SARS‑CoV‑2NSP13蛋白是在mRNA水平抑制真核表达质粒的表达。本发明利用该发现首次将外源性蛋白引入真核细胞内用于抑制真核表达质粒表达,填补了之前对于外源质粒表达调控的技术上的空缺,为抑制细胞中游离基因的表达提出了新的思路。

    一种基于S基因断裂的AAV-HBV重组病毒、乙肝病毒小鼠模型的建立方法及应用

    公开(公告)号:CN112725292B

    公开(公告)日:2022-05-31

    申请号:CN202110034255.X

    申请日:2021-01-11

    Applicant: 武汉大学

    Abstract: 本发明属于生物技术领域,尤其涉及一种基于S基因断裂的AAV‑HBV重组病毒、乙肝病毒小鼠模型的建立方法及应用。本发明采用同源重组的方法构建pAAV‑HBV1.04质粒,通过三质粒共转染293T细胞方法体外包装生产重组病毒。用重组病毒通过尾静脉注射免疫系统正常的C57BL/6小鼠形成HBV cccDNA持续存在的HBV慢性感染小鼠模型。本发明中的小鼠模型能产生真实HBV cccDNA并且能作为唯一得转录模板发挥功能。本发明构建的新型HBV慢性感染小鼠模型可用于研究长期慢性感染条件下HBV cccDNA形成和维持的机制,用于研究与免疫系统相关的问题,用于寻找和评估新的抗HBV药物。

    一种基于S基因断裂的AAV-HBV重组病毒、乙肝病毒小鼠模型的建立方法及应用

    公开(公告)号:CN112725292A

    公开(公告)日:2021-04-30

    申请号:CN202110034255.X

    申请日:2021-01-11

    Applicant: 武汉大学

    Abstract: 本发明属于生物技术领域,尤其涉及一种基于S基因断裂的AAV‑HBV重组病毒、乙肝病毒小鼠模型的建立方法及应用。本发明采用同源重组的方法构建pAAV‑HBV1.04质粒,通过三质粒共转染293T细胞方法体外包装生产重组病毒。用重组病毒通过尾静脉注射免疫系统正常的C57BL/6小鼠形成HBV cccDNA持续存在的HBV慢性感染小鼠模型。本发明中的小鼠模型能产生真实HBV cccDNA并且能作为唯一得转录模板发挥功能。本发明构建的新型HBV慢性感染小鼠模型可用于研究长期慢性感染条件下HBV cccDNA形成和维持的机制,用于研究与免疫系统相关的问题,用于寻找和评估新的抗HBV药物。

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