公开(公告)号：CN101603082B

公开(公告)日：2012-06-06

申请号：CN200910038727.8

申请日：2009-04-17

Applicant: 广州甘蔗糖业研究所

Inventor： 刘睿 ,  邓海华 ,  陈仲华 ,  沈万宽 ,  陈健文

IPC: C12Q1/68 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明涉及甘蔗种苗的繁殖生产技术领域，提出一种甘蔗宿根矮化病菌的PCR快速检测方法，包括取甘蔗汁、蔗汁预处理、改良优化CTAB法提取RSD的基因组DNA、PCR扩增、电泳检测等步骤，其中电泳检测是将PCR扩增步骤的PCR产物经过5％聚丙烯酰胺凝胶电泳后于0.1％的硝酸银液中染色10分钟，用双蒸水清洗1-2次，然后再于显色液(1.5％NaOH，0.15％甲醛，)显色，后观测结果。本发明有如下突出特点和显著进步：1.检测快速、结果稳定，从大田取蔗汁起到得出检测结果只需8小时，且检测结果稳定。2.可以大批量检测，本发明仅需1～2mL甘蔗蔗汁，蔗汁采集方便不需要特殊设备，操作简单，可以进行批量化检测，一个熟练的技术人员每天可以检测800个以上样品。3.检测结果准确、灵敏度高，本发明在蔗汁前处理中能有效去除甘蔗蔗汁中蔗蜡等次生物质对RSD的DNA影响，获取DNA纯度高，PCR过程干扰较小，RSD的电泳结果准确可靠、灵敏度高。

公开(公告)号：CN101361459B

公开(公告)日：2012-03-07

申请号：CN200810198634.7

申请日：2008-09-19

Applicant: 广州甘蔗糖业研究所

Inventor： 沈万宽 ,  陈仲华 ,  邓海华 ,  刘睿 ,  何慧怡 ,  杨湛端

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明涉及甘蔗种苗的繁殖生产，提供一种去除甘蔗宿根矮化病菌、快速繁殖健康甘蔗种苗的方法，包括如下步骤：热水处理少量原种并生产、以其再生植株经斑点酶标免疫试验(DB-EIA)检测为阴性的茎尖为外植体，经诱导培养、继代增殖培养、促根培养、假植及二级或三级苗圃扩繁生产健康种苗，并在苗圃扩繁中注意砍种工具(蔗刀)的消毒，在种苗出圃用于大田生产用种前，抽样取蔗茎汁用DB-EIA检测RSD病菌，确保提供合格种苗。本发明的优点是：能彻底去除甘蔗种苗宿根矮病病原菌，年繁殖系数高达1万倍以上，且种苗无变异，具有快速、高效、安全的优点，适合工厂化、规模化、标准化生产甘蔗健康种苗。

公开(公告)号：CN102204465A

公开(公告)日：2011-10-05

申请号：CN201110099531.7

申请日：2011-04-20

Applicant: 广州甘蔗糖业研究所 ,  华南农业大学

Inventor： 沈万宽 ,  姜子德 ,  陈健文 ,  习平根 ,  邓海华 ,  刘睿

IPC: A01G1/00 ,  A01G7/06

Abstract: 本发明涉及植物抗病性鉴定技术领域，提出一种甘蔗黑穗病抗性鉴定方法，首先用微量新鲜甘蔗黑粉菌冬孢子分离培养出甘蔗黑粉菌异型交配型（+、-）单倍体担孢子，然后经过菌株扩大培养、接种、发病率调查、抗性评价等步骤，本发明具有以下突出的实质性特点和显著的进步：1、只需极少量甘蔗黑粉菌冬孢子经分离培养，即可满足接种需要，工作量小；2、异型交配型菌株能够超低温保存，经活化、扩大培养后可作接种源，无需每次鉴定都重新采取菌种并分离培养；3、本发明抗性鉴定历期短、灵敏性高；4、还可利用本发明的方法，鉴别出参试品种所抗感的黑穗病生理小种类型，有效指导甘蔗抗黑穗病育种及蔗区品种合理配置。

公开(公告)号：CN101803574A

公开(公告)日：2010-08-18

申请号：CN201010160577.0

申请日：2010-04-23

Applicant: 广州甘蔗糖业研究所

Inventor： 陈仲华 ,  刘睿 ,  陈月桂 ,  杨湛端 ,  沈万宽 ,  谭嘉娜

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明涉及甘蔗脱毒组培技术领域。提出一种果蔗脱毒组培快繁的方法，其特征在于包括如下步骤：1)植体的选取与灭菌；2)腋芽诱导培养；3)分化培养；4)增殖培养；5)生根培养；6)移栽；7)病毒(菌)检测；其特征在于步骤3)中的分化培养基配方为：MS+TDZ(0.001～0.01)mg/L+IBA(0.02～0.05)mg/L+蔗糖(30～40)g/L+精氨酸(100～150)mg/L+肌醇(100～150)mg/L。本发明以果蔗腋芽为外植体，接种操作容易，成活率高达90％以上。所采用的分化培养基配方，在分化培养过程中能快速使诱导芽分化出丛芽，采用本发明繁殖果蔗脱毒苗速度快，月繁殖系数达5～10倍，适合于大规模工厂化生产。