公开(公告)号：CN110272881B

公开(公告)日：2021-04-30

申请号：CN201910581265.8

申请日：2019-06-29

Applicant: 复旦大学

Inventor： 黄强 ,  薛冬梅 ,  汤洪海 ,  朱海霞 ,  杜文豪

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12N15/90

Abstract: 本发明属于蛋白质工程技术领域，具体为一种来源于酿脓链球菌的CRISPR核酸酶SpCas9的截短型高特异性变异体及其应用。本发明中的CRISPR‑Cas9（TSpCas9‑V1/V2）核酸酶属于CRISPR‑Cas9系统，TSpCas9‑V1核酸酶将截短型CRISPR‑Cas9（TSpCas9）核酸酶的第863位的氨基酸H突变成N，TSpCas9‑V2核酸酶将截短型CRISPR‑Cas9（TSpCas9）核酸酶的第862位的氨基酸H突变成A，将第863位的氨基酸H突变成N；该截短型高特异性变异体具有与野生型CRISPR‑Cas9核酸酶相当的基因编辑活性，能够降低基因编辑中的脱靶，因而能用于对基因组DNA片段特定位置的精准编辑。

公开(公告)号：CN111893104A

公开(公告)日：2020-11-06

申请号：CN202010666107.5

申请日：2020-07-12

Applicant: 复旦大学

Inventor： 黄强 ,  薛冬梅 ,  朱海霞 ,  杜文豪

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12N15/113 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于蛋白质工程技术领域，具体为一种基于结构的CRISPR蛋白的优化设计方法。本发明基于已解析的CRISPR/Cas9蛋白结构，首先通过分析和比较，找出对Cas9某一功能有重要影响的氨基酸位点；然后结合Rosetta优化Cas9的Protein-DNA相互作用界面，最后设计并获得新型突变体，成功地获得一个突变体yCas9。该突变体具有xCas9相当的剪切活性：宽泛的PAM识别范围，可识别NGG、NGA、NGT、NGC、GAA和GAT，且在基因编辑时脱靶率低。因此，yCas9在功能上可与xCas9并驾齐驱，是一个有潜在应用价值的基因编辑工具，证明本设计方法的有效性和实用性。