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公开(公告)号：CN109735513A
公开(公告)日：2019-05-10
申请号：CN201811497728.4
申请日：2018-12-07
Abstract: 本发明公开了一种隐孢子虫蛋白激酶的纯化方法，先通过构建隐孢子虫蛋白激酶的体外重组表达载体，再进行质粒转导、IPTG低温诱导表达，成功表达后的菌体裂解后，经割胶回收纯化蛋白；本发明纯化方法通过低温诱导以及改善IPTG浓度的方式，提高了表达蛋白的可溶性，同时通过割胶回收的方法解决了隐孢子虫蛋白激酶在体外表达中易出现的自切降解包涵体表达等问题，能够得到高纯度条带单一且具备酶学活性的重组蛋白，并且能够提高对难以表达、分子量较大蛋白的纯化效果。所纯化得到的蛋白能够进一步用于功能性分析研究，为解决隐孢子虫蛋白功能领域的诸多问题奠定基础。
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公开(公告)号：CN109136386A
公开(公告)日：2019-01-04
申请号：CN201810828293.0
申请日：2018-07-25
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , C12N15/11
CPC classification number: C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , C12Q2531/113 , C12Q2563/107
Abstract: 本发明公开了一种对卡耶塔环孢子虫进行快速分型和溯源的定量PCR方法，采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组不同拷贝间的多态性连接区域作为遗传标记，设计了特异性的定量PCR引物，包含上游引物Cyc‑Mito‑F1和下游引物Cyc‑Mito‑R1，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1～2所示。本发明方法克服了现有的卡耶塔环孢子虫单位点分子诊断工具无法对该病原进行精细分型的缺点，而且扩增效率比现有的单位点分子诊断工具高；本发明采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组上的单个位点定量PCR和熔解曲线分析就可进行快速的基因型区分和溯源，克服了现有的卡耶塔环孢子虫多位点序列分型工具中因需要对多个位点扩增和测序所导致的分型耗时长、成本高的缺点，具有较大的应用前景。
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公开(公告)号：CN118436628B
公开(公告)日：2025-03-25
申请号：CN202410470536.3
申请日：2024-04-18
Applicant: 华南农业大学
IPC: A61K31/167 , A61K31/277 , A61P33/02
Abstract: 本发明公开了二苯基脲类化合物在制备抗弓形虫药物中的应用。本发明通过对咪唑苯脲及二苯基脲类化合物的体外抗弓形虫的研究，得到7种能有效抑制弓形虫生长的化合物，对弓形虫的体外抑虫率高，能够显著抑制虫体噬斑的形成，很好地抑制弓形虫的增殖；其中二苯基脲类化合物：1,3‑双(3‑氟苯基)脲、1‑(3‑溴苯基)‑3‑(4‑氯苯基)脲、1‑(3‑氯苯基)‑3‑(4‑氯苯基)脲，细胞毒性较小，还能用于治疗小鼠感染的弓形虫病，显著抑制弓形虫在体内繁殖，且不会影响小鼠生长，具有显著的抑虫效果，可以用于制备和开发更多的抗弓形虫药物。
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公开(公告)号：CN116068177B
公开(公告)日：2025-02-18
申请号：CN202310034659.8
申请日：2023-01-10
Applicant: 华南农业大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/533 , G01N33/577 , G01N21/64
Abstract: 本发明公开了一种检测微小隐孢子虫的直接免疫荧光试剂、试剂盒及其应用，属于生物技术领域。本发明通过利用微小隐孢子虫全虫蛋白作为抗原，采用杂交瘤细胞单克隆抗体技术制备获得抗微小隐孢子虫的单克隆抗体；用荧光染料标记步骤S1所得抗微小隐孢子虫的单克隆抗体，即获得检测微小隐孢子虫的直接免疫荧光检测试剂。应用本发明试剂建立的直接免疫荧光检测方法，可用于临床粪便样本及环境中微小隐孢子虫的检测及鉴定，且敏感性高、特异性强、稳定性好、诊断速度快，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN118360157B
公开(公告)日：2024-12-24
申请号：CN202410336425.3
申请日：2024-03-22
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N1/11 , C12N15/85 , C12N15/52 , C12N9/22 , C12N15/113 , A61K39/002 , A61P33/02 , C12R1/90
Abstract: 本发明公开了一株弓形虫琥珀酰辅酶A合成酶α亚基基因缺失疫苗虫株及其应用。本发明提供一株弓形虫基因缺失疫苗虫株(Δscsα)，该虫株通过基因编辑技术敲除弓形虫琥珀酰辅酶A合成酶α亚基(TgSCSα)基因得到；弓形虫敲除TgSCSα后在体外仍可培养、在体内具有几乎无毒的特性；动物免疫接种Δscsα后，能够产生良好的免疫保护力，有效抵抗野生型弓形虫的感染。TgSCSα具有作为弓形虫疫苗设计靶点的潜力，能用于制备弓形虫基因缺失疫苗虫株。Δscsα是一株具备良好应用前景的候选疫苗虫株，可以为弓形虫病的防控提供更多选择和策略。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118853411A
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202310482743.6
申请日：2023-04-28
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种构建兔大型艾美耳球虫ALI体外培养模型的方法，本发明提供的构建方法，通过分离兔回肠隐窝，经过类器官培养获得大量具有干性的肠道细胞，将兔回肠类器官转移至细胞培养板上实现单层肠道细胞的ALI体外培养，再感染大型艾美耳球虫子孢子，通过模拟兔肠道的体内环境，从而实现大型艾美耳球虫的体外培养。本发明提供的兔回肠ALI体外培养模型在感染大型艾美耳球虫子孢子后144HPI仍具有细胞活性，且大型艾美耳球虫可发育至裂殖体阶段，相较于球虫常用的MDBK细胞体外培养模型，该模型可以为大型艾美耳球虫提供更为长期的生长发育需求，对于大型艾美耳球虫分子层面和免疫相关的研究具有重要意义。
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公开(公告)号：CN114933970B
公开(公告)日：2023-03-24
申请号：CN202210723393.3
申请日：2022-06-24
Applicant: 华南农业大学 , 岭南现代农业科学与技术广东省实验室
IPC: C12N1/11 , C12N15/53 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N15/79 , A61K39/002 , A61P33/02 , C12R1/90
Abstract: 本发明公开了一种弓形虫基因敲除虫株，该虫株缺失核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的弓形虫6‑磷酸葡萄糖酸脱氢酶1基因(Tg6PGDH1)。本发明还公开了该虫株的构建方法以及在制备弓形虫疫苗中的应用。所述弓形虫基因敲除虫株在体外可以正常培养，虫体可以正常生长复制，但是在体内毒力减弱且对动物具有很高的免疫保护力，有成为抗弓形虫基因工程疫苗的潜力。
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公开(公告)号：CN114933970A
公开(公告)日：2022-08-23
申请号：CN202210723393.3
申请日：2022-06-24
Applicant: 华南农业大学 , 岭南现代农业科学与技术广东省实验室
IPC: C12N1/11 , C12N15/53 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N15/79 , A61K39/002 , A61P33/02 , C12R1/90
Abstract: 本发明公开了一种弓形虫基因敲除虫株，该虫株缺失核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的弓形虫6‑磷酸葡萄糖酸脱氢酶1基因(Tg6PGDH1)。本发明还公开了该虫株的构建方法以及在制备弓形虫疫苗中的应用。所述弓形虫基因敲除虫株在体外可以正常培养，虫体可以正常生长复制，但是在体内毒力减弱且对动物具有很高的免疫保护力，有成为抗弓形虫基因工程疫苗的潜力。
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公开(公告)号：CN109136386B
公开(公告)日：2021-12-24
申请号：CN201810828293.0
申请日：2018-07-25
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种对卡耶塔环孢子虫进行快速分型和溯源的定量PCR方法，采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组不同拷贝间的多态性连接区域作为遗传标记，设计了特异性的定量PCR引物，包含上游引物Cyc‑Mito‑F1和下游引物Cyc‑Mito‑R1，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1～2所示。本发明方法克服了现有的卡耶塔环孢子虫单位点分子诊断工具无法对该病原进行精细分型的缺点，而且扩增效率比现有的单位点分子诊断工具高；本发明采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组上的单个位点定量PCR和熔解曲线分析就可进行快速的基因型区分和溯源，克服了现有的卡耶塔环孢子虫多位点序列分型工具中因需要对多个位点扩增和测序所导致的分型耗时长、成本高的缺点，具有较大的应用前景。
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公开(公告)号：CN112724223A
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN202011588887.2
申请日：2020-12-28
Applicant: 华南农业大学
IPC: C07K14/44 , C12N15/30 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K16/20 , G01N33/533 , G01N33/577 , G01N33/569 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种毕氏肠微孢子虫孢壁蛋白单克隆抗体的制备及其应用。基于重组蛋白EbSWP1制得的单克隆抗体对于检测毕氏肠微孢子虫具有良好的特异性，不与虾肝肠微孢子虫、兔脑炎微孢子虫、大肠杆菌等发生反应。本发明制备的单克隆抗体可与荧光素标记物偶联制得免疫荧光抗体，利用该抗体与环境、粪便中的毕氏肠微孢子虫做直接免疫荧光反应，可以快速、灵敏、准确地检验毕氏肠微孢子虫。与实验室最常用的PCR检测方法相比，本发明的免疫荧光检测方法操作简便，耗费时间短，且检测准确度高，以PCR结果为参考，本发明检测方法的准确率高于85％，该方法简便、快速、灵敏、准确的特点使其适用于基层检测应用。
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