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公开(公告)号：CN105861417A
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201610395636.X
申请日：2016-06-06
Applicant: 中国计量大学
IPC: C12N5/07
CPC classification number: C12N5/0601
Abstract: 本发明公开了一种福寿螺卵巢细胞系的构建方法，属于淡水生物细胞培养技术领域。它的步骤如下：配制细胞培养液；选取体重30?40克的雌福寿螺在无菌水中饲养；对雌福寿螺进行表面消毒；解剖福寿螺取卵巢组织；将卵巢组织用PBS清洗液清洗并剪碎；将处理后的卵巢组织接种于细胞培养瓶中；培养瓶置于5％的CO2培养箱内,28℃恒温培养；过夜后，再加入适量细胞培养液，将组织浸没；每隔5天吸出和换入等量的细胞培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶。本发明能在较短时间内快速、可重复地建立福寿螺卵巢组织细胞系，所需要的细胞培养设备简单，可操作性强。本发明是对水生无脊椎动物细胞培养的重要补充，也为水生无脊椎动物的免疫机制研究提供基础资料。
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公开(公告)号：CN119709764A
公开(公告)日：2025-03-28
申请号：CN202411890743.0
申请日：2024-12-20
Applicant: 中国计量大学
IPC: C12N15/12 , C07K14/435 , C12N15/113 , C12Q1/6888 , C12N15/11 , A01N57/16 , A01P9/00
Abstract: 本发明公开了一种福寿螺干旱耐受性相关的USP基因、编码蛋白及其应用，属于生物技术领域。所述USP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；该USP基因可作为农药筛选和生物防治福寿螺靶标进行应用。本发明还进一步提供了所述USP基因的dsRNA，其可降低福寿螺存活率和福寿螺卵的孵化率。本发明快速、有效、重复性强，是对USP基因家族的重要补充。本发明通过阻断福寿螺体内USP基因的表达来降低福寿螺的干旱耐受性，从而达到控制福寿螺在冬季土壤越冬，减少福寿螺繁殖扩散的目的。本发明对福寿螺生物学、生态学、新型杀虫剂的研究与测定及福寿螺对干旱耐受性的抗性机制研究均具有重要意义。
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公开(公告)号：CN109666675B
公开(公告)日：2022-12-02
申请号：CN201811388131.6
申请日：2018-11-21
Applicant: 中国计量大学
IPC: C12N15/12 , C07K14/435 , C12N15/87 , A01K67/033
Abstract: 本发明公开了一种褐飞虱NlAtg3基因、编码蛋白及其应用。NlAtg3基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，该基因是褐飞虱正常生存所必需，其功能受到抑制会导致褐飞虱存活率下降。NlAtg3基因编码的蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。所述的NlAtg3基因或蛋白的应用，用于农药研发和生物防治褐飞虱。本发明对该基因成功实施了RNA干扰，结果表明害虫的存活率下降，有望在实现抑制害虫的同时，充分发挥生态防治的功能。
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公开(公告)号：CN113151600A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110453073.6
申请日：2021-04-26
Applicant: 中国计量大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/94
Abstract: 本发明公开了一种检测南方菜豆花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组、试剂盒及应用。针对检测南方菜豆花叶病毒存在的问题，本发明涉及并筛选了具有高特异性的检测南方菜豆花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组，并进一步涉及了试剂盒和检测方法。本发明提供的试剂盒和方法特异性好，对番茄环斑病毒、南芥菜花叶病毒、烟草环斑病毒和菜豆荚斑驳病毒等检疫性病毒都呈阴性反应；灵敏度高，实时荧光检测方法最低可以检测到浓度为5×10‑4ng/μL的南方菜豆花叶病毒RNA模板，核酸试纸条检测方法最低可以检测到浓度为5ng/μL的南方菜豆花叶病毒RNA模板。非常适用于医疗卫生、食品安全以及进出口检疫的现场检测，易于大范围推广应用。
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公开(公告)号：CN110904136A
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201911054697.X
申请日：2019-10-31
Applicant: 中国计量大学
IPC: C12N15/64 , C12N15/84 , C12N7/00 , C12N1/21 , C12Q1/70 , C12Q1/6806 , C12Q1/24 , C12R1/01 , C12R1/94
Abstract: 本发明提供了一种龙葵曲顶病毒侵染性克隆的构建方法，分别设计引物P1与P2，P3与P4，以pLB-NCTV作为模板，PCR扩增NCTV的第一拷贝片段和NCTV的第二拷贝片段；设计引物P5与P6，以pCB301载体为模板，进行PCR，其产物作为NCTV侵染性克隆的载体骨架；采用多片段同源重组技术将第一和第二拷贝片段构建到所述载体骨架上，获得包含NCTV两个拷贝片段的侵染性克隆；本发明建立了龙葵曲顶病毒侵染性克隆构建体系，保证了病毒序列高保真度，致病性高，病毒侵染性克隆构建的成功率高，侵染效率高，同时还提供了龙葵曲顶病毒冻干阳性样品，对龙葵曲顶病毒的进一步研究具有重要意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108588243A
公开(公告)日：2018-09-28
申请号：CN201810885078.4
申请日：2018-08-06
Applicant: 中国计量大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/686 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了快速鉴别外来生物福寿螺的特异性引物、多重PCR检测试剂盒及其检测方法。本发明所提供的特异性引物包括SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的特异性引物序列。所述方法为首先提取福寿螺的基因组DNA，以此为模板，使用特异引物对在普通PCR试剂体系和程序下进行多重PCR反应，通过凝胶电泳检测，确定福寿螺的杂交型。实验证明，该方法快速而准确，只需一个PCR反应，便可以鉴别三种不同的福寿螺，具有较强的可重复性和稳定性。与序列分析方法相比，该方法简易而经济，无需复杂的技术步骤和昂贵的试剂，一般技术人员均可操作，是鉴别福寿螺种类的理想方法。
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公开(公告)号：CN113293232A
公开(公告)日：2021-08-24
申请号：CN202110576568.8
申请日：2021-05-26
Applicant: 中国计量大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了检测番茄环斑病毒的引物组合物、试剂盒及应用。所述引物组合物由引物ToBF1、引物ToBR1、引物ToDR1、引物ToMBR1和引物ToCPF1组成；本发明设计并筛选了具有高特异性的检测番茄环斑病毒的CPA引物组合物，建立了CPA的检测方法并提供了番茄环斑病毒的检测试剂盒。本发明提供的试剂盒和方法更快速、准确，特异性好，灵敏度高，实时荧光检测方法最低可以检测到浓度为5×10‑2ng/μL的番茄环斑病毒总RNA，核酸检测试纸条方法最低可以检测到浓度为0.5ng/μL的番茄环斑病毒总RNA。非常适用于医疗卫生、食品安全以及进出口检疫的现场检测，易于大范围推广应用。
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公开(公告)号：CN110885370B
公开(公告)日：2021-02-19
申请号：CN201911141647.5
申请日：2019-11-20
Applicant: 中国计量大学
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , C12N5/20 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明提供一种分泌番茄环斑病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其抗体和抗体制备方法，其特征在于：以抗原肽CAFGKGVEEIEQTST免疫BALB/c小鼠，获得杂交瘤细胞株，并从中筛选出能够产生特异性识别该抗原肽单克隆抗体的细胞株，并通过腹水制备法获得特异性识别番茄环斑病毒外壳蛋白AFGKGVEEIEQTST肽段的单克隆抗体，该单克隆抗体重链可变区和轻链可变区长度分别为185个和103个氨基酸；单克隆抗体的产量为500‑5000mg/L腹水，纯度为85％‑99.5％。本发明单克隆抗体具有特异性识别番茄环斑病毒外壳蛋白的特性，在番茄环斑病毒进出口检验检疫方面具有广阔应用前景。
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公开(公告)号：CN111019950A
公开(公告)日：2020-04-17
申请号：CN201911130298.7
申请日：2019-11-18
Applicant: 中国计量大学
IPC: C12N15/12 , C07K14/435 , A01N57/16 , A01P7/04
Abstract: 本发明公开了一种褐飞虱NlAtg1基因、编码蛋白及其应用。NlAtg1基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1 所示，该基因功能受到抑制会影响褐飞虱线粒体结构和功能，导致褐飞虱存活率下降。NlAtg1基因编码的蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。所述的NlAtg1基因或蛋白的应用，可以用于褐飞虱防治中新型RNA杀虫剂开发或以NlAtg1蛋白为把标的农药研发。本发明对该基因成功实施了RNA干扰，结果表明害虫的存活率下降，由于RNA干扰片段可以针对物种做特异设计，有望在实现抑制害虫的同时，减少对非靶标生物的杀伤，是一种环境友好型杀虫剂。
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公开(公告)号：CN110885370A
公开(公告)日：2020-03-17
申请号：CN201911141647.5
申请日：2019-11-20
Applicant: 中国计量大学
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , C12N5/20 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明提供一种分泌番茄环斑病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其抗体和抗体制备方法，其特征在于：以抗原肽CAFGKGVEEIEQTST免疫BALB/c小鼠，获得杂交瘤细胞株，并从中筛选出能够产生特异性识别该抗原肽单克隆抗体的细胞株，并通过腹水制备法获得特异性识别番茄环斑病毒外壳蛋白AFGKGVEEIEQTST肽段的单克隆抗体，该单克隆抗体重链可变区和轻链可变区长度分别为185个和103个氨基酸；单克隆抗体的产量为500-5000mg/L腹水，纯度为85％-99.5％。本发明单克隆抗体具有特异性识别番茄环斑病毒外壳蛋白的特性，在番茄环斑病毒进出口检验检疫方面具有广阔应用前景。
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