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公开(公告)号：CN108774632A
公开(公告)日：2018-11-09
申请号：CN201810639551.0
申请日：2018-06-20
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85
Abstract: 本发明的目的在于提供一种优化的牙鲆鱼β-肌动蛋白启动子，本发明将在牙鲆中广泛表达的β-肌动蛋白的启动子进行优化进而获得启动效率更强的重组启动子表达载体eGFP-优β-肌动蛋白。并且这一新的载体可使外源基因有效转入牙鲆不同细胞系，为鲆鲽鱼类基因功能的研究提供了一种新的途径和方法，为解决鲆鲽鱼类细胞瞬时转染效率低提供一种有效的可行的载体，为在细胞水平研究分析基因功能提供高效的手段，为鲆鲽鱼类分子水平遗传育种工作提供了新的技术方法。
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公开(公告)号：CN102168145B
公开(公告)日：2013-10-09
申请号：CN201110100676.4
申请日：2011-04-21
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种荧光原位杂交技术检测半滑舌鳎的性染色体组成的方法。其特征在于，用于原位杂交的探针为含有半滑舌鳎雌性特异DNA片段的fosmid或BAC克隆，在雌性半滑舌鳎的一个细胞或一个染色体分裂相中有一个荧光信号，而在超雌半滑舌鳎的一个细胞或一个染色体分裂相中有两个荧光信号。本发明对半滑舌鳎的细胞或染色体分裂相进行荧光原位杂交分析，通过观察杂交信号分辨半滑舌鳎的性染色体组成，是一种有效的鉴定半滑舌鳎雌性个体和尤其是超雌个体的技术，为利用染色体操作技术进行半滑舌鳎全雌育种的研究提供技术手段。
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公开(公告)号：CN106399370B
公开(公告)日：2019-10-11
申请号：CN201610819451.7
申请日：2016-09-12
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明提供一种建立稳定转基因的牙鲆胚胎细胞株方法，是把牙鲆广泛表达的β‑actin启动子启动的增强型绿色荧光蛋白且能表达G418抗性蛋白的质粒转染牙鲆胚胎细胞。24h后,荧光显微镜下观察EGFP表达，并通过G418筛选得到稳定遗传表达的胚胎细胞。本发明方法可将在牙鲆中广泛表达的β‐actin启动的外源基因有效转入牙鲆胚胎细胞，并且可以在牙鲆胚胎细胞中稳定遗传表达，为鲆鲽鱼类基因研究提供了一种新的方法，解决了因鲆鲽鱼类细胞瞬时转染效率低而难以进行细胞水平基因功能分析研究的问题，为鲆鲽鱼类分子水平遗传育种工作提供了新的技术手段，提供了用于使海水鱼类细胞系稳定遗传转基因方法。
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公开(公告)号：CN106399314B
公开(公告)日：2019-04-02
申请号：CN201610879180.4
申请日：2016-10-08
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85
Abstract: 本发明提供一种在牙鲆原始生殖细胞中调节基因表达的3′UTR区序列，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1；该3′UTR区序列用于调控基因在牙鲆原始生殖细胞中进行表达。本发明的3′UTR区序列为牙鲆鱼特有的序列，可以用于鲆鲽鱼、斑马鱼等鱼类生殖系细胞的示踪以及在鱼类生殖系细胞中外源基因特异表达的定位；本发明为牙鲆等鱼类原始生殖细胞的识别、标记、跟踪、分离奠定了基础，同时为开展鱼类的性别分化机制以及生殖系细胞发生发育研究提供了技术方法。
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公开(公告)号：CN105385681A
公开(公告)日：2016-03-09
申请号：CN201511008017.2
申请日：2015-12-29
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12N15/10
CPC classification number: C12N15/1003
Abstract: 本发明公开了一种适应于鲆鲽鱼类血液RNA提取的裂解液,由盐酸胍、异硫氰酸胍、甲基溴化铵、十二烷基硫酸钠、水饱和酚、三(2-羧乙基)膦、8－羟基喹啉、枸橼酸钠、乙二胺四乙酸、甘油、乙酸钠、氯化钠和DEPC水按照比例配制而成。使用本发明裂解液提取的鲆鲽鱼类血液RNA浓度高、完整性好、OD260/OD280比值均在2.0以上，OD260/OD230比值均在2.2以上，裂解液在室温下具有良好的稳定性。应用本发明所提供的裂解液提取的鲆鲽鱼类血液RNA，可以完全满足下游鱼类分子生物学及鱼类免疫学各项实验的质量要求。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105255827A
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201510869478.2
申请日：2015-12-02
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12N5/078
Abstract: 本发明提供一种鲆鲽鱼类淋巴细胞增殖培养基，是在基础培养基中添加刀豆蛋白A、细菌脂多糖、植物血球凝集素、美洲商陆凝集素、鲆鲽鱼血清、胎牛血清、混合脱氧单核苷酸、L-谷氨酰胺和碳酸氢钠制成的。本发明提供的培养基含有鲆鲽鱼血清及各种促进淋巴细胞增殖的有丝分裂原，通过各成分的有效配比，能够使淋巴细胞高效快速增殖，淋巴细胞活力指数高，平均增殖活力高达85.33％，同时该培养基具有良好的稳定性，可以完全满足鱼类分子免疫学和细胞遗传学培养淋巴细胞的需求。
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公开(公告)号：CN102242138B
公开(公告)日：2013-04-10
申请号：CN201110100678.3
申请日：2011-04-21
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明涉及一种半滑舌鳎抗菌肽hepcidin的重组表达及其应用，所述的表达载体中插入了用于重组表达序列为SEQ ID NO：1的半滑舌鳎抗菌肽hepcidin的核苷酸片段，并在宿主菌中表达半滑舌鳎抗菌肽hepcidin的重组蛋白，并摸索出一种纯化重组蛋白的简单有效的方法，蛋白表达出的蛋白应用在抗病菌类产品上。本发明筛建立和筛选出能有效地进行抗菌肽重组表达的载体及宿主菌，实现了半滑舌鳎抗菌肽在原核生物体内的融合表达及简单有效的纯化，与传统的多肽合成方法及从天然资源提取多肽的方法相比，本发明的制备方法使得大批量、低成本的规模化生产成为可能，可应用于海洋养殖鱼类、养殖禽畜类的饲料添加剂和细菌性疾病的防治。
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公开(公告)号：CN102251024A
公开(公告)日：2011-11-23
申请号：CN201110100728.8
申请日：2011-04-21
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种激光显微切割染色体标本制作液及其应用，所述的标本制作液包含有甲醇、冰醋酸和氯仿，其体积比为5～10∶1～3∶1～3，优选比例为8∶1∶1。本发明的染色体标本制作液用于制备激光显微切割染色体标本。本发明的染色体标本制作液制备的激光显微切割染色体标本，各条染色体均分散得很好，方便后续的显微切割操作。同时本发明的制备方法简单实用，易于操作，方便普通技术人员的使用。
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公开(公告)号：CN102168145A
公开(公告)日：2011-08-31
申请号：CN201110100676.4
申请日：2011-04-21
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明涉及一种荧光原位杂交技术检测半滑舌鳎的性染色体组成的方法。其特征在于，用于原位杂交的探针为含有半滑舌鳎雌性特异DNA片段的fosmid或BAC克隆，在雌性半滑舌鳎的一个细胞或一个染色体分裂相中有一个荧光信号，而在超雌半滑舌鳎的一个细胞或一个染色体分裂相中有两个荧光信号。本发明对半滑舌鳎的细胞或染色体分裂相进行荧光原位杂交分析，通过观察杂交信号分辨半滑舌鳎的性染色体组成，是一种有效的鉴定半滑舌鳎雌性个体和尤其是超雌个体的技术，为利用染色体操作技术进行半滑舌鳎全雌育种的研究提供技术手段。
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公开(公告)号：CN113046354A
公开(公告)日：2021-06-29
申请号：CN202110380953.5
申请日：2021-04-09
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85
Abstract: 本发明的目的在于提供一种优化的牙鲆鱼β‑肌动蛋白启动子，本发明将在牙鲆中广泛表达的β‑肌动蛋白的启动子进行优化进而获得启动效率更强的重组启动子表达载体eGFP‑优β‑肌动蛋白。并且这一新的载体可使外源基因有效转入牙鲆不同细胞系，为鲆鲽鱼类基因功能的研究提供了一种新的途径和方法，为解决鲆鲽鱼类细胞瞬时转染效率低提供一种有效的可行的载体，为在细胞水平研究分析基因功能提供高效的手段，为鲆鲽鱼类分子水平遗传育种工作提供了新的技术方法。
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