甜菜孢囊线虫Hs8H07蛋白、编码基因及其应用

    公开(公告)号:CN114891083B

    公开(公告)日:2023-07-14

    申请号:CN202210448128.9

    申请日:2022-04-26

    Abstract: 本发明公开了甜菜孢囊线虫Hs8H07蛋白、编码基因及其应用,涉及生物技术领域。所述蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本发明还提供一种编码该蛋白的基因。本发明提供的编码该蛋白的基因Hs8H07,在甜菜孢囊线虫食道腺表达;亚细胞定位实验结果表明Hs8H07蛋白定位于烟草叶片细胞的细胞核和细胞膜上。利用寄主介导的RNAi沉默处理沉默Hs8H07基因后,甜菜孢囊线虫的白雌虫量与对照野生型植株相比,显著降低。而在拟南芥中过表达Hs8H07基因,甜菜孢囊线虫的白雌虫量与对照野生型植株相比,显著增加。表明该基因在甜菜孢囊线虫寄生致病过程中具有重要作用,可作为植物抗线虫工程的靶标基因。

    一种旱稻孢囊线虫LAMP快速检测方法

    公开(公告)号:CN107142329A

    公开(公告)日:2017-09-08

    申请号:CN201710554029.8

    申请日:2017-07-09

    Abstract: 本发明涉及一种旱稻孢囊线虫LAMP快速检测方法。通过比对旱稻孢囊线虫核糖体rDNA‑ITS序列,筛选获得特异性位点,设计筛选出5条LAMP引物HE‑F3、HE‑B3、HE‑FIP、HE‑BIP和HE‑LB。本发明提取旱稻孢囊线虫基因组DNA,通过环介导等温扩增,再对扩增产物显色和观察,从而快速检测和鉴定出旱稻孢囊线虫,能够从14种植物线虫22个群体中特异的检测出旱稻孢囊线虫,检测阈值为1/20000头孢囊,灵敏度较普通PCR方法的高10倍。本发明的检测方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、高效快捷,结果肉眼即可观察,在旱稻孢囊线虫快速检测和早期和田间诊断方面具有很高的应用价值。

    菲利普孢囊线虫Taqman MGB探针实时荧光定量PCR检测方法及其应用

    公开(公告)号:CN104928372B

    公开(公告)日:2017-08-08

    申请号:CN201510295749.8

    申请日:2015-06-02

    Abstract: 本发明为“菲利普孢囊线虫Taqman MGB探针实时荧光定量PCR检测方法及其应用”,属植物线虫分子检测技术领域。“菲利普孢囊线虫Taqman MGB探针实时荧光定量PCR检测方法及其应用”公开了一种基于菲利普孢囊线虫RAPD特异性序列设计了一条特异的荧光探针HF‑probe和一组特异性引物qHF‑R和qHF‑F,上述探针和引物能从菲利普孢囊线虫中扩增获得特异性的荧光曲线,从而实现对菲利普孢囊线虫的快速分子检测。本发明具有灵敏度高,特异性强且快速准确,在菲利普孢囊线虫病的早期诊断和田间监测预警等方面,具有很高的实际应用价值。

    一种快速高效的植物寄生线虫总RNA提取方法及其应用

    公开(公告)号:CN103387977B

    公开(公告)日:2015-04-08

    申请号:CN201310345091.8

    申请日:2013-08-09

    Abstract: 本发明涉及一种快速高效的植物寄生线虫总RNA提取方法及其应用。植物线虫组织破碎方法,采用如下步骤:(1)制备玻璃粉末:将普通玻璃破碎后收集过60目筛子的粉末,用浓盐酸洗后再用去离子水洗至pH7.0,再高温去除RNA酶;(2)搅拌破碎:于无RNA酶离心管中加入玻璃粉末和TRIzol试剂以及线虫体,用微量电动组织匀浆器搅拌玻璃粉末,直至线虫组织破碎。本发明以自制的玻璃粉末结合TRIzol试剂实现对线虫的快速充分研磨,具有操作简便、无需特殊仪器设备和可靠性高等优点,应用该方法能够提取高质量的总RNA。该方法可在不同实验条件的实验室进行推广应用,在植物线虫分子生物学研究中具有极高的应用价值。

    一种植物组织内植物寄生线虫的快速富集分离方法

    公开(公告)号:CN116803257A

    公开(公告)日:2023-09-26

    申请号:CN202310998375.0

    申请日:2023-08-09

    Abstract: 本发明公开了一种植物组织内植物寄生线虫的快速富集分离方法,属于生物技术领域,该方法用纤维素酶和果胶酶裂解植物组织,裂解后的植物组织研磨,并进行梯度冲洗过滤,获得不同龄期的植物寄生线虫。本发明经反复筛选和实验验证发现,采用特定的纤维素酶和果胶酶能够高效、充分裂解植物的细胞壁,利用橡皮塞轻轻磨破植物组织,从而使得寄生在植物根系内的线虫释放出来;将裂解的植物组织通过不同孔径大小的筛网,获得不同龄期的植物线虫,再通过蔗糖溶液离心,即可分离富集出不同龄期植物线虫;本发明操作简单,安全且成本低,可以迅速地从植物组织内获得大量的植物线虫,为获取不同龄期植物线虫及其研究提供了一种有效方法。

    一种快速检测菲利普孢囊线虫的RPA引物和探针、试剂盒及应用

    公开(公告)号:CN114507743B

    公开(公告)日:2022-11-25

    申请号:CN202210106161.3

    申请日:2022-01-28

    Abstract: 本发明公开了一种快速检测菲利普孢囊线虫的RPA引物和探针、试剂盒及应用,属于植物寄生线虫的检测领域。所述RPA引物如SEQIDNO:1‑2所示和探针如SEQID NO:3所示。本发明利用RPA引物和探针建立了RPA检测菲利普孢囊线虫的方法,该方法灵敏度高,特异性非常强,检测阈值为10‑3个二龄幼虫DNA,10‑4个单孢囊DNA和0.01ng基因组DNA,灵敏度是普通PCR检测的100倍;与常见的密切相关的植物寄生线虫之间没有交叉反应。RPA整个检测过程可以在1小时内完成。该检测方法特异性强、灵敏度高、结果可视化、快速、准确,在菲利普孢囊线虫病的早期诊断和田间检测预警等方面具有很高的应用价值。

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