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公开(公告)号：CN103387977A
公开(公告)日：2013-11-13
申请号：CN201310345091.8
申请日：2013-08-09
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明涉及一种快速高效的植物寄生线虫总RNA提取方法及其应用。植物线虫组织破碎方法，采用如下步骤：（1）制备玻璃粉末：将普通玻璃破碎后收集过60目筛子的粉末，用浓盐酸洗后再用去离子水洗至pH7.0，再高温去除RNA酶；（2）搅拌破碎：于无RNA酶离心管中加入玻璃粉末和TRIzol试剂以及线虫体，用微量电动组织匀浆器搅拌玻璃粉末，直至线虫组织破碎。本发明以自制的玻璃粉末结合TRIzol试剂实现对线虫的快速充分研磨，具有操作简便、无需特殊仪器设备和可靠性高等优点，应用该方法能够提取高质量的总RNA。该方法可在不同实验条件的实验室进行推广应用，在植物线虫分子生物学研究中具有极高的应用价值。
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公开(公告)号：CN107022017A
公开(公告)日：2017-08-08
申请号：CN201710356377.4
申请日：2017-05-16
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: C07K14/435 , C12N15/12 , C12N15/113 , A01N57/16 , A01P5/00
CPC classification number: C07K14/4354 , A01N57/16 , C12N15/113
Abstract: 本发明涉及禾谷孢囊线虫Ha‑16674蛋白、编码基因及其应用。一种禾谷孢囊线虫Ha‑16674蛋白，其氨基酸列SEQ ID NO：1所示。编码禾谷孢囊线虫Ha‑16674蛋白的基因，其cDNA全长核苷酸序列如SEQ ID NO：2。实验表明，Ha‑16674与Bax共注射烟草叶片，可以抑制Bax引起叶片的细胞死亡。拟南芥中Ha‑16674基因全长超表达，获得稳定遗传的T3代转基因阳性植株。禾谷孢囊线虫的钙网蛋白Ha‑16674可降低拟南芥的免疫防御反应，促进丁香假单胞杆菌侵染。本发明为抗线虫植物的培养提供了新靶标Ha‑16674，对培育广谱抗孢囊线虫作物具有良好的理论指导意义。
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公开(公告)号：CN105340842A
公开(公告)日：2016-02-24
申请号：CN201510900527.4
申请日：2015-12-09
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: A01K67/033
CPC classification number: A01K67/033
Abstract: 本发明为“一种小麦孢囊线虫龄期同步发育的简易培养方法”，属于生物技术领域。本发明将温度的梯度变化和湿度相结合创建了一种新的简单高效的小麦孢囊线虫龄期同步发育的简易培养方法。该技术方法实现小麦孢囊线虫侵染后二龄(J2)，三龄(J3)，四龄(J4)和白雌虫的同步发育，应用该方法能够大量分离获得同龄期幼虫。为小麦孢囊线虫侵染后不同龄期幼虫的差异基因的研究及不同龄期的基因功能差异分析研究，提供有效的获取不同龄期幼虫的方法。本发明以操作简便、操作条件适宜、所需设备简易、短期内即可获取大量同步发育的线虫的特点，在小麦孢囊线虫的分子生物学研究和教学中均具有极高的应用价值。
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公开(公告)号：CN103387977B
公开(公告)日：2015-04-08
申请号：CN201310345091.8
申请日：2013-08-09
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明涉及一种快速高效的植物寄生线虫总RNA提取方法及其应用。植物线虫组织破碎方法，采用如下步骤：（1）制备玻璃粉末：将普通玻璃破碎后收集过60目筛子的粉末，用浓盐酸洗后再用去离子水洗至pH7.0，再高温去除RNA酶；（2）搅拌破碎：于无RNA酶离心管中加入玻璃粉末和TRIzol试剂以及线虫体，用微量电动组织匀浆器搅拌玻璃粉末，直至线虫组织破碎。本发明以自制的玻璃粉末结合TRIzol试剂实现对线虫的快速充分研磨，具有操作简便、无需特殊仪器设备和可靠性高等优点，应用该方法能够提取高质量的总RNA。该方法可在不同实验条件的实验室进行推广应用，在植物线虫分子生物学研究中具有极高的应用价值。
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公开(公告)号：CN106967164B
公开(公告)日：2019-12-06
申请号：CN201710356386.3
申请日：2017-05-16
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: C07K14/435 , C12N15/12 , C12N15/113 , A01N57/16 , A01P5/00
Abstract: 本发明涉及禾谷孢囊线虫Ha‑63744蛋白、编码基因及其应用。禾谷孢囊线虫的Ha‑63744蛋白，其序列如SEQ ID NO：1所示，编码该蛋白的基因序列如SEQ ID NO：2所示。本发明提供的Ha‑63744基因，在线虫食道腺表达，在禾谷孢囊线虫的寄生后三龄时期、四龄幼虫时期表达量较高。利用dsRNA处理沉默Ha‑63744基因后，小麦根部的禾谷孢囊线虫数量明显低于对照，表明该基因在禾谷孢囊线虫寄生致病过程中发挥重要作用，可作为植物抗线虫工程的靶标基因。本发明对于孢囊线虫致病机理研究以及抗线虫植物制备具有重大价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106939311B
公开(公告)日：2019-09-06
申请号：CN201710356278.6
申请日：2017-05-16
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: C12N15/12 , C12N15/113 , A01N57/16 , A01P5/00
Abstract: 本发明涉及禾谷孢囊线虫Ha‑56573基因及其应用。禾谷孢囊线虫的Ha‑56573基因，其序列如SEQ ID NO：1所示。本发明提供的Ha‑56573基因为致死表型基因。通过体外干扰的方法测定dsRNA处理对线虫活性，侵染能力和完成生活史有影响，验证了基因Ha‑56573的功能。本发明表明具有致死效果的靶基因Ha‑56573，在Ha‑56573‑dsRNA1，Ha‑56573‑dsRNA2及Ha‑56573‑dsRNA3处理后，雌虫量与对照相比分别下降38.5％，65.81％，53.8％，表明Ha‑56573可作为靶标基因用于线虫防控。
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公开(公告)号：CN105340842B
公开(公告)日：2017-12-15
申请号：CN201510900527.4
申请日：2015-12-09
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: A01K67/033
Abstract: 本发明为“一种小麦孢囊线虫龄期同步发育的简易培养方法”，属于生物技术领域。本发明将温度的梯度变化和湿度相结合创建了一种新的简单高效的小麦孢囊线虫龄期同步发育的简易培养方法。该技术方法实现小麦孢囊线虫侵染后二龄(J2)，三龄(J3)，四龄(J4)和白雌虫的同步发育，应用该方法能够大量分离获得同龄期幼虫。为小麦孢囊线虫侵染后不同龄期幼虫的差异基因的研究及不同龄期的基因功能差异分析研究，提供有效的获取不同龄期幼虫的方法。本发明以操作简便、操作条件适宜、所需设备简易、短期内即可获取大量同步发育的线虫的特点，在小麦孢囊线虫的分子生物学研究和教学中均具有极高的应用价值。
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公开(公告)号：CN107188941A
公开(公告)日：2017-09-22
申请号：CN201710356195.7
申请日：2017-05-16
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: C07K14/435 , C12N15/12 , C12N15/113 , A01N57/16 , A01P5/00
CPC classification number: C07K14/4354 , A01N57/16 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种禾谷孢囊线虫的Ha‑62292蛋白、编码基因及其应用。本发明提供了一种蛋白质，获取自禾谷孢囊线虫，命名为Ha‑62292蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，编码该蛋白的基因序列如SEQ ID NO：2所示。实验表明Ha‑62292基因在线虫侵染寄生过程中发挥重要作用，可作为植物抗线虫工程的靶标基因。本发明对禾谷孢囊线虫致病机理研究以及抗线虫植物开发有重大价值。
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公开(公告)号：CN106967164A
公开(公告)日：2017-07-21
申请号：CN201710356386.3
申请日：2017-05-16
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: C07K14/435 , C12N15/12 , C12N15/113 , A01N57/16 , A01P5/00
Abstract: 本发明涉及禾谷孢囊线虫Ha‑63744蛋白、编码基因及其应用。禾谷孢囊线虫的Ha‑63744蛋白，其序列如SEQ ID NO：1所示，编码该蛋白的基因序列如SEQ ID NO：2所示。本发明提供的Ha‑63744基因，在线虫食道腺表达，在禾谷孢囊线虫的寄生后三龄时期、四龄幼虫时期表达量较高。利用dsRNA处理沉默Ha‑63744基因后，小麦根部的禾谷孢囊线虫数量明显低于对照，表明该基因在禾谷孢囊线虫寄生致病过程中发挥重要作用，可作为植物抗线虫工程的靶标基因。本发明对于孢囊线虫致病机理研究以及抗线虫植物制备具有重大价值。
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公开(公告)号：CN106085911A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610486282.X
申请日：2016-06-28
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
Abstract: 本发明涉及一株具有杀线虫活性的草酸青霉菌NBC008、其制备方法及应用。本发明从挪威东福尔郡小麦孢囊线虫群体上分离筛选出一株活性较高的真菌菌株P.oxalicum NBC008，保藏编号CGMCC No.12473。通过液体发酵培养制备，其发酵产物对植物寄生线虫有明显的毒杀作用。室内测定本菌株发酵液对大豆孢囊线虫2龄幼虫和卵孵化的影响。不同稀释浓度发酵液的处理对大豆孢囊线虫2龄幼虫具有毒杀作用，对卵孵化具有明显的抑制作用。发酵原液能使大豆孢囊数量下降59.88％，具有良好的开发应用前景。
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