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公开(公告)号：CN113462712A
公开(公告)日：2021-10-01
申请号：CN202110796924.7
申请日：2021-07-14
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种温控自剪切单质粒同源重组系统及其在基因编辑中的应用。所述的系统包括用于进行基因编辑的单质粒pKID220，所述的pKID220质粒中含有温控元件、Red重组酶基因、I‑SceI核酸内切酶基因和含有筛选标记的打靶片段区，其中，所述的筛选标记的两侧均带有I‑SceI识别位点和FRT位点。实验证明，本发明的同源重组系统的重组效率优于传统λ‑Red系统的双质粒和阿拉伯糖诱导方法，无需任何化学诱导剂，仅通过改变培养温度，即可实现染色体的高效编辑。而且避免了多次电穿孔过程，极大降低了操作复杂度并节省了时间和成本。本发明的提出为基因编辑提供了一种更加快速、简便、经济的技术手段。
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公开(公告)号：CN113528682B
公开(公告)日：2023-03-24
申请号：CN202110731289.4
申请日：2021-06-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12Q1/06 , C12N15/11 , C12R1/32
Abstract: 本发明公开了一种同时检测三种分枝杆菌的多重TaqMan荧光定量PCR试剂盒及其应用。所述的三种分枝杆菌包括结核分枝杆菌复合群(MTBC)、禽分枝杆菌副结核亚种(MAP)和禽分枝杆菌禽亚种(MAA)。所述的试剂盒中含有分别用于检测MTBC、MAP和MAA的引物以及探针。进一步的，本发明还建立了使用上述试剂盒检测三种分枝杆菌的多重TaqMan荧光定量PCR方法，实验证明，本发明建立的多重TaqMan荧光定量方法与常规PCR的阳性符合率为100.0％(175/175)、阴性符合率为87.0％(220/253)，与分枝杆菌培养的阳性符合率为100.0％(116/116)、阴性符合率为69.6％(220/316)。因此，本发明所建立的多重TaqMan荧光定量方法可用于MTBC、MAP和MAA的定性和定量检测，为有效防控牛结核病和副结核病提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN111087460A
公开(公告)日：2020-05-01
申请号：CN202010037156.2
申请日：2020-01-14
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种广谱型抗菌肽及其应用，属于医药技术领域。所述的抗菌肽，命名为26M，其含有18个氨基酸残基，分子量2475.16道尔顿，等电点12.03，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。实验证明，该抗菌肽具有显著抑制多种病原菌生长和繁殖的作用，所述的病原菌包括大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐万古霉素屎肠球菌。本发明提供的一种新型的具有广谱抗菌作用的抗菌肽，能够替代传统抗生素，且不易产生耐药性，在对抗病原菌引起的感染性疾病中将具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN115161333B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202210724417.7
申请日：2022-06-23
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种猪链球菌的反向筛选标记、含有该反向筛选标记的猪链球菌及其应用。所述的反向筛选标记为突变后的编码猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基的pheS基因，突变后的pheS基因导致了编码的猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基发生了T261S和A315G双取代突变，PheS突变体通过与菌株自身的野生PheS蛋白竞争，翻译过程中将p‑Cl‑Phe错误地掺入到合成的蛋白质中，从而在p‑Cl‑Phe存在条件下，表达PheS突变体的菌株死亡，不表达PheS突变体的菌株生存。利用这一高效反向筛选标记，本发明还建立了高效的猪链球菌无痕基因操作方法，用于实现猪链球菌的无痕基因缺失、基因融合和基因突变等无痕基因操作，在研究猪链球菌生理和病理机制、制备疫苗株方面具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN115779067A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202211359485.4
申请日：2022-11-02
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: A61K38/12 , A61P31/04 , A61K31/192
Abstract: 本发明公开了木豆芪酸（CSA）与多粘菌素B联合在抑制mcr‑1阳性大肠杆菌生长中的应用。抗生素的过度使用造成了典型“超级细菌”的传播和流行，导致几乎所有的抗生素都对其无效，因此细菌耐药性已经成为人类公共卫生安全的重要问题之一。本发明从天然产物中筛选并鉴定出多粘菌素耐药关键蛋白MCR‑1的小分子抑制剂木豆芪酸，研究发现，CSA与多粘菌素B联合治疗mcr‑1阳性大肠杆菌产生了显著的协同效果，CSA可能降低了mcr‑1阳性菌对多粘菌素B的耐药性，进而增强了多粘菌素B的抗菌活性。本发明的提出为深入研究和开发更高活性的MCR‑1抑制剂提供思路，为与大肠杆菌感染导致的相关疾病的治疗提供了一种新的技术手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114686608A
公开(公告)日：2022-07-01
申请号：CN202011643292.2
申请日：2020-12-30
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12N15/11 , C12R1/01
Abstract: 本发明涉及基于CRISPR‑Cas12a的胸膜肺炎放线杆菌快速可视化检测方法。具体涉及试剂盒，其包含一对针对apxIV的特异性引物对SEQ ID NO：14和15、16和17、18和19、20和21，或26和27(优选SEQ ID NO：26和27)，以及针对上述引物扩增的产物的序列为SEQ ID NO：3、5、6或8(优选SEQ ID NO：8)的gRNA，其用于快速可视化检测胸膜肺炎放线杆菌。本发明基于RPA及CRISPR/Cas12a系统的检测方法，利用Cas12a蛋白，根据App的特异性基因apxIV设计特异性重组酶聚合酶扩增(RPA)引物及CRISPR/Cas12a系统探针，以实现RPA特异性靶基因扩增，以及CRISPR/Cas12a系统对报告基因的切割，建立可用于检测猪胸膜肺炎放线杆菌的方法，并对RPA体系和CRISPR/Cas12a反应体系进行优化。该方法快速，可视，且特异性好，敏感度高，可用于临床检测。
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公开(公告)号：CN113995740A
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202111412497.4
申请日：2021-11-25
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: A61K31/122 , A61K31/407 , A61P31/04
Abstract: 本发明公开了紫草素作为碳青霉烯类抗生素的增效剂在抗碳青霉烯类耐药菌中的应用。本发明采用药敏实验和联合药敏实验从20种中药单体中筛选出了美罗培南的增效剂‑紫草素，实验证明，紫草素与美罗培南联合应用时能对碳青霉烯类耐药菌起到良好的杀菌效果。特别是对携带碳青霉烯类耐药基因blaIMP‑4、blaNDM‑1、blaVIM‑1及/或blaOXA‑23基因的肠杆菌科细菌能够产生协同抑制作用。本发明的提出为碳青霉烯耐药菌的防控提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN111087460B
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN202010037156.2
申请日：2020-01-14
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种广谱型抗菌肽及其应用，属于医药技术领域。所述的抗菌肽，命名为26M，其含有18个氨基酸残基，分子量2475.16道尔顿，等电点12.03，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。实验证明，该抗菌肽具有显著抑制多种病原菌生长和繁殖的作用，所述的病原菌包括大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐万古霉素屎肠球菌。本发明提供的一种新型的具有广谱抗菌作用的抗菌肽，能够替代传统抗生素，且不易产生耐药性，在对抗病原菌引起的感染性疾病中将具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN108410785A
公开(公告)日：2018-08-17
申请号：CN201810139232.3
申请日：2018-02-09
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
CPC classification number: C12N15/70 , A61K39/12 , A61P31/20 , C12N2750/10022 , C12N2750/10034
Abstract: 本发明涉及一种制备细菌菌影以及基因工程亚单位疫苗的方法，包括将INP信号序列和外源基因以及裂解盒基因E-lysis克隆到同一个表达载体，转化细菌，其中INP的信号序列为SEQ ID NO：1表示的序列，裂解盒基因E-lysis的序列为SEQ ID NO：2表示的序列，以及表达外源基因的重组细菌菌影在制备疫苗中的应用。
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公开(公告)号：CN115902217B
公开(公告)日：2023-06-16
申请号：CN202310215284.5
申请日：2023-03-08
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: G01N33/569 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了一种牛副结核病间接ELISA检测试剂盒及其应用。本发明属于微生物检测技术领域。本发明成功筛选出具有良好抗原性的包被原，同时应用该抗原建立了牛副结核病间接ELISA检测试剂盒及其检测方法。本发明通过对100份MAP阳性血清的检测，得出本发明方法的敏感性为93.0%。通过对200份MAP阴性血清的检测得出本发明方法的特异性为95.5%，明显高于其他检测方法。总之，本发明建立的牛副结核病间接ELISA检测的方法具有快速准确，敏感性和特异性高的特点。本发明的提出为预防和清除牛副结核病，保护我国畜牧业健康快速的发展提供了技术支撑。
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