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公开(公告)号：CN117106701A
公开(公告)日：2023-11-24
申请号：CN202311046566.3
申请日：2023-08-18
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种多功能干细胞及其应用。所述多功能干细胞biPSCs‑70的保藏编号为：CGMCC NO.45635。本发明利用非整合的质粒电转小棕蝠胚胎成纤维细胞后，成功获得了一种无外源基因整合蝙蝠诱导多能性干细胞，该多能性干细胞具备在多种动物胚胎进行嵌合的能力，能够分化为内胚层、外胚层和中胚层细胞。本发明提供的多功能干细胞biPSCs‑70自我更新能力和分化能力较强，对于蝙蝠特性的研究具有重要意义。
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公开(公告)号：CN114763559A
公开(公告)日：2022-07-19
申请号：CN202110057414.8
申请日：2021-01-15
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种不依赖于同源重组的靶向性基因捕获系统及其应用。本发明提供一种不依赖于同源重组的靶向性基因捕获系统，该系统包含以下模块：Cas9蛋白识别位点模块，识别Cas9蛋白识别位点的sgRNA表达模块，基因捕获模块，Cas9蛋白表达模块以及识别基因捕获靶位点的sgRNA表达模块。该系统可实现高效的靶向性基因捕获，在多种哺乳动物细胞中均具有较高的敲入效率，极大地简化了突变型等位基因的制备，为高效向哺乳动物细胞中引入靶向性突变提供了新的路径。
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公开(公告)号：CN111349616A
公开(公告)日：2020-06-30
申请号：CN201811583970.3
申请日：2018-12-24
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/90 , C12Q1/6869
Abstract: 本发明公开了一种筛选目标病毒相关宿主因子的方法及应用，属于基因文库构建与应用领域，利用载体系统和CRISPR文库创建特异性、覆盖全基因组或部分功能基因的可控型突变细胞库，对突变细胞库进行目标病毒的攻毒实验，收集存活细胞，获得抗病毒突变细胞库；对其进行深度测序，确定该目标病毒相关宿主因子。本发明的筛选方法简单高效、能在全基因组范围筛选目标病毒相关宿主因子，准确度高、可控性强，成本低，可实现规模化筛选。
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公开(公告)号：CN106845151B
公开(公告)日：2019-03-26
申请号：CN201510888755.4
申请日：2015-12-07
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明涉及CRISPR‑Cas9系统sgRNA作用靶点的筛选方法，包括：(1)利用已公布物种的全基因组序列及基因注释信息，获取基因组中具有5’‑Nx‑NGG‑3’序列的区段(x为19～22之间的整数，N代表A/T/C/G)，作为CRISPR‑Cas9系统sgRNA的候选靶点；(2)将基因组打断成22～25bp的片段并筛选以NGG结尾的，且在基因组上无重复的序列；(3)将步骤(1)的候选靶点序列与步骤(2)中筛到的序列进行比对，根据错配信息及评选公式对相应的优选序列进行筛选及排序，获取最优的全基因组sgRNA作用靶点集合。本发明还提供用于实现上述筛选方法的装置。本方法适用于所有已知基因组及其基因注释信息的物种，快速高效获得其全基因组水平的sgRNA序列全集来构建基因敲除突变体文库或基因敲除动物模型。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104419719A
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201310392856.3
申请日：2013-09-02
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/85 , A61D19/00 , A01K67/027 , C12Q1/68
Abstract: 本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，利用猪精子特异诱导启动子启动Cre/loxP位点特异重组酶系统，建立的自我剪切元件PCN，正常进行打靶筛选阳性克隆，进行SCNT获得founder阳性转基因猪后，通过配种，自我剪切敲除标记基因。其中剪切元件PCN中：P代表猪精子特异启动子，C代表Cre酶基因，N代表打靶时所需的正筛选标记neo基因。由于Cre酶是在精子成熟时特异启动，因此后代即可获得敲除筛选标记neo基因的猪，因此方便的获得筛选标记基因敲除的猪。
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公开(公告)号：CN119372234A
公开(公告)日：2025-01-28
申请号：CN202411503005.6
申请日：2024-10-25
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于脱硫弧菌I‑C型CRISPR基因编辑系统及其应用，属于基因编辑技术领域。上述基因编辑系统包括CRISPR RNA(crRNA)piggyBac(PB)载体、I‑C型编辑器piggyBac载体以及piggyBac(PB)转座酶表达载体；I‑C型编辑器piggyBac载体包括两端的PB接头序列、Cascade组件、Cas3蛋白及Puro抗性基因，所述Cascade组件由Cas5c蛋白、Cas7c蛋白、Cas8c蛋白和Cas11c蛋白复合而成，通过不同的2A肽连接，受同一CMV启动子调控。本发明所得基因编辑系统在哺乳动物细胞和动物中能够进行精确高效基因组编辑和碱基编辑，利用优化的该编辑器和成对的PAM内向crRNAs，在人类和猪细胞系的多个内源位点实现了定义性的缺失，此外，结合外源同源臂供体载体，也可以实现大的基因片段的精确替换。
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公开(公告)号：CN119351469A
公开(公告)日：2025-01-24
申请号：CN202411919108.0
申请日：2024-12-25
Applicant: 中国农业大学三亚研究院 , 中国热带农业科学院三亚研究院
IPC: C12N15/85 , A61K31/7105 , A61P3/04 , A61P25/28 , A61P9/10 , A61P11/00 , A61P19/02 , A61P3/10 , A61P25/14 , A61P25/16 , A23K20/153 , A23K20/147 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种抑制KCNK3基因的物质及其在调控脂肪代谢或铁死亡中的应用。本发明利用CRISPR/Cas9技术构建基因敲除和过表达细胞系，发现KCNK3敲除抑制猪前脂肪细胞的脂质合成与积累、促进脂肪水解产热。进一步利用转录组和脂质组联合分析的技术，对KCNK3基因敲除细胞进行了分析，发现KCNK3调控脂肪代谢和铁死亡生物学过程。通过检测KCNK3敲除PK15细胞内铁含量、ROS水平、谷胱甘肽水平，线粒体形态特征等，证明了KCNK3敲除促进铁死亡。本发明首次发现KCNK3基因在促进猪脂肪形成、抑制铁死亡中的作用，该发现对于利用KCNK3基因对猪进行脂肪沉积调控以及人类肥胖和铁死亡相关疾病的治疗具有重要意义。
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公开(公告)号：CN111004816A
公开(公告)日：2020-04-14
申请号：CN201911194844.3
申请日：2019-11-28
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明提供一种基于Cas12a技术的外源基因定点敲入方法。利用Cas12a设计一种依赖微同源臂的外源基因精确定点整合的方法(简称MITI)，该方法通过简单的PCR或T4连接反应即可将识别序列插入到供体载体中，其中Cas12a在供体载体中的识别序列的方向与基因组中的靶点的方向是相反的，但远离PAM端的Cas12a识别切割的5个碱基与基因组靶位点的最后5个碱基是相同的，因此可以利用内外源DNA产生的互补粘性末端实现无缝连接。在将外源基因整合到基因组中的特定位点以及在对内源基因进行标记时，相较已有的Cas9HITI策略，MITI可以产生更高的精准插入效率，其有望成为精准基因插入的新工具。
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公开(公告)号：CN106845151A
公开(公告)日：2017-06-13
申请号：CN201510888755.4
申请日：2015-12-07
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明涉及CRISPR-Cas9系统sgRNA作用靶点的筛选方法，包括：(1)利用已公布物种的全基因组序列及基因注释信息，获取基因组中具有5’-Nx-NGG-3’序列的区段(x为19～22之间的整数，N代表A/T/C/G)，作为CRISPR-Cas9系统sgRNA的候选靶点；(2)将基因组打断成22～25bp的片段并筛选以NGG结尾的，且在基因组上无重复的序列；(3)将步骤(1)的候选靶点序列与步骤(2)中筛到的序列进行比对，根据错配信息及评选公式对相应的优选序列进行筛选及排序，获取最优的全基因组sgRNA作用靶点集合。本发明还提供用于实现上述筛选方法的装置。本方法适用于所有已知基因组及其基因注释信息的物种，快速高效获得其全基因组水平的sgRNA序列全集来构建基因敲除突变体文库或基因敲除动物模型。
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