采用分子信标对核酸信号进行恒温放大与检测的方法

    公开(公告)号:CN1865934A

    公开(公告)日:2006-11-22

    申请号:CN200610027997.5

    申请日:2006-06-22

    Inventor: 王剑 刘建华

    Abstract: 本发明涉及一种采用分子信标对核酸信号进行恒温放大与检测的方法,利用核糖核酸酶H分解RNA/DNA杂交体系中的RNA链的特性,根据含有1个或以上核糖核苷酸的核酸链水解情况确定被检测目标分子DNA的特性和含量。首先针对要检测的核酸分子序列设计嵌合分子信标,其环区域核苷酸序列与被测序列互补配对,且中间含有1个或几个核糖核苷酸。针对单链DNA,双链DNA,RNA等不同种类的被测样品,制备单链DNA以用作检测模板,将待检测样品放入核酸酶H反应混合液中混合,置于荧光检测仪于37℃温浴,实时检测反应溶液的荧光强度,根据荧光值可以指示被检测核酸分子的含量及其特性。

    检测DNA芯片的制造方法
    12.
    发明授权

    公开(公告)号:CN1150336C

    公开(公告)日:2004-05-19

    申请号:CN00119541.7

    申请日:2000-08-01

    Abstract: 检测DNA芯片的制造方法的步骤如下:①寡核苷酸的合成与修饰,②寡核苷酸片段氧化,③寡核苷酸片段的标记,④玻片表面的脂肪氨基化,⑤寡核苷酸片段的固定。这种方法基于核酸保护原理的DNA芯片检测技术,DNA芯片各个位点的DNA探针量已知而且待测样品无需预先用同位素或荧光基团标记,因其操作简单、结果可靠而易于在临床诊断中推广。

    明日叶/无籽刺梨复合保健黑番茄酱及其制备方法

    公开(公告)号:CN104256526B

    公开(公告)日:2016-07-06

    申请号:CN201410482833.6

    申请日:2014-09-19

    Abstract: 一种明日叶/无籽刺梨复合保健黑番茄酱,由主料黑番茄浆、无籽刺梨果浆、明日叶汁以及配料糖、盐、醋、增稠剂制备而成。其制备方法包括制作黑番茄浆、无籽刺梨果浆、明日叶汁,以及将配比量的黑番茄浆、无籽刺梨果浆和明日叶汁混合加热浓缩,然后依次加入配比量的糖和盐熬制,加再入配比量的增稠剂熬,最后加入配比量的醋熬制得黑番茄酱料,将黑番茄酱料装瓶封口后杀菌,低温冷藏,即得复合保健黑番茄酱成品。本发明的复合保健黑番茄酱酸甜适中、营养功能较全面。通过不同营养成分的互补和风味的配合,营养价值高。

    一株黄单胞菌突变体及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN102925399A

    公开(公告)日:2013-02-13

    申请号:CN201210407313.X

    申请日:2012-10-23

    Abstract: 本发明提供了一株黄单胞菌突变体及其构建方法和应用。本发明通过敲除葡萄糖转运基因,限制葡萄糖的胞内转运系统来改善葡萄糖胞外的累积量。以植物病原微生物黄单胞菌为目标菌株,敲除其主要的葡萄糖转运基因,构建了一株突变体,命名为XC2460,其保藏编号为CGMCC No.6583。在营养丰富的培养基中,突变体与野生型在性状方面没有差异;但在以葡萄糖为单一碳源的培养基中,突变体生长明显比野生型缓慢。同时,在水解羧甲基纤维素时,突变体的胞外葡萄糖累积浓度比野生型高出了67%,单个细胞产生葡萄糖的量比野生型细胞高出近5倍。本发明对提高纤维素生物转化过程中葡萄糖的累积量具有重大的意义和广阔的应用前景。

    一株铜绿假单胞菌及其获取方法与应用

    公开(公告)号:CN102925391A

    公开(公告)日:2013-02-13

    申请号:CN201210436663.9

    申请日:2012-11-05

    Inventor: 梁如冰 刘建华

    Abstract: 本发明提供了一株铜绿假单胞菌菌株,命名为SJTD-1,其保藏编号为CGMCCNo.6584。本发明中的铜绿假单胞菌能利用烷烃类物质、石油作为唯一碳源生长,在石油污染土壤的修复中具有较高的应用价值。菌株SJTD-1可在浓度高达10g/L的石油及烷烃类物质为唯一碳源的培养基中正常生长,24小时内能将初始浓度为500mg/L的C16-C20的长链烷烃或石油完全分解,36小时可将高达2g/L的C16-C20的长链烷烃或500mg/L原油全部分解;七天对5g/L的原油的分解率大于85%。本发明铜绿假单胞菌SJTD-1能够快速高效降解石油,对石油污染的土壤具有修复作用。

    一株可分解石油类物质的荧光假单胞菌及其获取与应用

    公开(公告)号:CN102925390A

    公开(公告)日:2013-02-13

    申请号:CN201210436601.8

    申请日:2012-11-05

    Abstract: 本发明提供了一株可分解石油类物质的荧光假单胞菌及其获取与应用,荧光假单胞菌命名为SJTD-2,其保藏编号为CGMCC No.6586。该荧光假单胞菌SJTD-2可在浓度高达5g/L的石油及烷烃类物质为唯一碳源的培养基中正常生长,24小时内能将初始浓度为500mg/L的C18-C24的长链烷烃或石油完全分解,36小时可分解高达2g/L的C18-C24的长链烷烃或200mg/L原油;七天对2g/L的原油的分解率大于85%。本发明荧光假单胞菌SJTD-2能够快速高效降解石油,对石油类物质污染的土壤具有修复作用。

    快速制备黄单胞菌电转化感受态细胞的方法及其应用

    公开(公告)号:CN102876610A

    公开(公告)日:2013-01-16

    申请号:CN201210379735.0

    申请日:2012-10-08

    Abstract: 本发明提供了一种快速制备黄单胞菌电转化感受态细胞的方法及其应用。本发明利用蔗糖溶液在室温下经重悬-离心方法处理过夜培养细胞,来制备黄单胞菌高效电转化感受态细胞,全程仅需十五分钟。该方法克服了传统电转化方法的耗时较长,效率偏低,操作复杂等缺点。与现有转化方法相比,本发明方法的转化效率提高了约100倍。本方法可用于可复制质粒与不可复制质粒的高效快速转化。在最佳条件下,可复制质粒的转化效率可达109CFU/μg DNA,不可复制质粒的转化效率达150CFU/μg DNA。因此,本方法简化了黄单胞菌电转化操作,推进了基因敲除的进程。

    泛醌类代谢中间产物的发酵生产方法

    公开(公告)号:CN101993898B

    公开(公告)日:2013-01-09

    申请号:CN201010255510.5

    申请日:2010-08-17

    Inventor: 梁如冰 刘建华

    Abstract: 一种基因工程技术领域的利用含有条件性重组酶的基因工程菌株发酵生产泛醌类代谢中间产物的方法。包括如下步骤:步骤一,构建和培养基因工程菌株;步骤二,加入L-阿拉伯糖于步骤一中的培养物中,诱导培养;步骤三,收集步骤三的培养物,处理后进行HPLC检测,获得泛醌类代谢中间产物。利用本发明的基因工程菌株发酵生产泛醌类代谢中间产物的方法,可实现对必需途径中的具有复杂结构的泛醌类代谢中间产物进行生物发酵生产,操作步骤简便,成本低廉,无有特殊的仪器要求,产量可达mg/L。

    检测藤黄绿菌素和吩嗪类化合物的反相液相色谱方法

    公开(公告)号:CN102411037A

    公开(公告)日:2012-04-11

    申请号:CN201110210633.1

    申请日:2011-07-26

    Abstract: 本发明涉及一种检测藤黄绿菌素和吩嗪类化合物的反相液相色谱方法,采用常规的反相液相色谱方法进行检测,所述方法中流动相为5~40mM的乙酸铵-乙腈体系,洗脱条件为用体积分数为5%~100%乙腈进行梯度洗脱。本发明的方法能够分别或者同时检测藤黄绿菌素、吩嗪类化合物;本发明的方法灵敏度较高,最低检测限为0.006~0.1μg/mL,最低定量限为0.02~0.3μg/mL;当待检物质在2~100μg/mL之间时,本发明的方法标准曲线的线性相关系数大于0.9900。同时,本发明的方法也可用来分离藤黄绿菌素、吩嗪类化合物。

    基于dI修饰引物和内切核酸酶V的等温PCR核酸扩增方法

    公开(公告)号:CN101182514A

    公开(公告)日:2008-05-21

    申请号:CN200710047953.3

    申请日:2007-11-08

    Inventor: 刘喜朋 刘建华

    Abstract: 本发明涉及一种基于dI修饰引物和内切核酸酶V的等温PCR核酸扩增方法,扩增目标核酸的引物与模板完全配对,5'端第10-30位含有1-5个dI核苷酸,dI核苷酸下游具有10-30个核苷酸。等温PCR反应组分包括dI修饰的正向引物与反向引物、目标核酸模板分子、dATP、dTTP、dCTP、dGTP共4种脱氧核糖核苷三磷酸、DNA聚合酶、内切核酸酶V、单链DNA结合蛋白和解螺旋酶。等温PCR混合物经过最初的热变性、杂交退火后,在恒定温度下进行PCR。扩增过程中由内切核酸酶V实现引物-模板复合物的循环再生,引发DNA合成反应;单链DNA结合蛋白与解螺旋酶可提高等温PCR效率。本发明目标核酸的扩增不依赖于热循环仪,操作简便,可用于目标核酸的大规模高产量扩增。

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