一种处理高辅料比啤酒酿造原料的方法

    公开(公告)号:CN103627556A

    公开(公告)日:2014-03-12

    申请号:CN201310615875.8

    申请日:2013-11-27

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明提供了一种处理高辅料比啤酒酿造原料的方法,具体为高比例大米辅料糊化过程中添加复合酶制剂,所述复合酶制剂由淀粉液化芽孢杆菌BS5582发酵生产,大米辅料含量在40-55%,处理温度为45℃-60℃。复合蛋白酶制剂主要包括Bacillopeptidase F、胞外中性金属蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶Bpn'这三种蛋白酶。通过优化的复合酶制剂添加工艺,提高对大米蛋白的水解效率,提高大米蛋白的溶解性,制作α-氨基氮含量适宜、可溶性总氮合理,麦汁蛋白隆丁区分合理的麦汁,该酶在啤酒行业麦汁糖化过程中应用前景广阔。该酶生产方法简便,成本较低,具有广阔的工业应用前景。

    一株高产耐温性β-葡聚糖酶毕赤酵母及其构建

    公开(公告)号:CN101899458B

    公开(公告)日:2011-12-21

    申请号:CN200910264850.1

    申请日:2009-12-24

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了基因工程领域中的一种巴斯德毕赤酵母重组菌及其应用。本研究室通过体外分子进化技术,对淀粉液化芽孢杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因进行了热稳定性提高定向进化,获得多株热稳定性提高突变体。本发明首次在巴斯德毕赤酵母系统中表达了其中一株热稳定提高最明显β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因bgl。将该基因克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA上,构建到AOX I甲醇诱导型启动子下游,得到重组质粒pPICZαA-his6-bgl,将其经Pme I线性化后转化毕赤酵母GS115,bgl基因通过同源重组被整合到毕赤酵母染色体上,并处于酵母α因子的下游,实现了异源分泌表达。通过重组菌株培养条件的优化,β-1,3-1,4-葡聚糖酶的最佳表达条件为:pH7.0,OD600为2.5,甲醇的日诱导添加量为1%,甲醇诱导后菌体的培养时间为2.5-3天。在此条件下β-葡聚糖酶分泌到培养基中的蛋白表达量为190mg/L,比酶活达到4312U/mg蛋白。SDS-PAGE结果显示表达蛋白的大小为27KDa左右,与理论分子量大小吻合。

    一种体外进化β-葡聚糖酶的方法

    公开(公告)号:CN102021191A

    公开(公告)日:2011-04-20

    申请号:CN200910264847.X

    申请日:2009-12-24

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 定向进化技术是由美国工程院院士、加州理工学院化工系教授FrancesH.Arnold于90年代初期开发出来的一项蛋白质工程技术。它是基因工程、蛋白质结构和计算机技术互补发展和渗透的结果,标志着人类可以按照自己的意愿和需要改造蛋白质(酶),甚至设计出自然界中原本不存在的全新蛋白质(酶)。作为可以工业化生产和应用的β-葡聚糖酶,对酶特性的要求是产酶水平高、耐热性好、pH稳定、培养条件简单等,其中耐热性和产酶水平是酶工业化生产和应用的主要问题。本发明基于易错PCR随机突变技术,对β-葡聚糖酶进行了热稳定性定向进化。利用建立的基于96微孔板的高通量筛选模型筛选热稳定性提高的突变株。经过三轮定向进化,共筛选得到三株热稳定性明显提高突变体2-JF-01、2-JF-02和2-JF-03.突变酶2-JF-01、2-JF-02和2-JF-03的T50值分别比野生酶53℃提高2.2℃、5.5℃和3.5℃,达到55.2℃、58.5℃和56.5℃。突变酶2-JF-01、2-JF-02和2-JF-03在60℃下的半衰期t1/2,60℃(min)分别比野生酶18提高4、13和17,达到22、31和35。

    一种高通量筛选β-葡聚糖酶热稳定性提高突变体的方法

    公开(公告)号:CN102010887A

    公开(公告)日:2011-04-13

    申请号:CN200910264848.4

    申请日:2009-12-24

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 高通量筛选是一种同时分析多个样本的方式,从大量样本中挑选出符合目标的个体,目前广泛应用于药物开发、酶的发现和改造方面。体外定向进化作为后基因组时代一个重要的技术平台正得到日益广泛的应用。定向进化技术在改造酶的热稳定性方面已表现出一定的优越性,而将这一技术应用在β-葡聚糖酶热稳定性定向进化上国内外尚未有相关报道。采用定向进化技术对β-葡聚糖酶的热稳定性改造过程中,如何快速有效地筛选得到目标突变体是其瓶颈问题之一。本发明建立了基于酶标仪、96微孔板和环境压力的热稳定性提高突变体高通量筛选模型,见附图1。该发明将96微孔板菌落的诱导表达与菌落的原位复制技术有机结合起来,以β-葡聚糖酶与蓝色葡聚糖底物作用后释放蓝色基团特性为基础,以各孔酶反应液的吸光值大小为指标建立了直观、快速简易的高通量筛选方法。通过该方法可以筛选到热稳定性和催化活性同时提高的变异体且稳定性良好。对该方法的筛选稳定性考察结果显示,其精密度良好,RSD为8.1%,重现性达到100%,假阳性率及假阴性较低,分别为6.25%及2.1%。

    一株适合纯生啤酒酿造的蛋白酶A缺陷型酵母及使用方法

    公开(公告)号:CN100455657C

    公开(公告)日:2009-01-28

    申请号:CN200610155976.1

    申请日:2006-12-27

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 一株适合纯生啤酒酿造的蛋白酶A缺陷型酵母及使用方法,属于生物工程技术领域。本发明菌株为下面发酵酿酒酵母(Saccharomyces Carlsbergensis)QD06-2,保藏编号为CGMCC No1858。该菌为二倍体工业菌株的蛋白酶A缺陷型改造株,不含任何外源基因,在啤酒酿造过程中不分泌蛋白酶A,发酵性能正常,酿造的配套关键控制技术参数为:11°P麦汁,α-氨基氮不低于200mg/100mL,充氧达12mg/L,麦汁接种量为酵母细胞浓度1.8×106~2.1×106个/mL,建议回用代数不超过8代,其它技术参数同普通菌株纯生啤酒酿造过程。由此,可获得与熟啤酒泡沫稳定性一致的纯生啤酒,解决了现有纯生啤酒泡沫稳定性差的行业难题,适合在纯生啤酒生产中推广和应用。

    一种用高效液相法评价啤酒老化程度的方法

    公开(公告)号:CN101303333A

    公开(公告)日:2008-11-12

    申请号:CN200810122421.6

    申请日:2008-05-28

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 一种用高效液相法评价啤酒老化程度的方法,属于啤酒质量评价领域。本发明依赖建立的可用于分离定量啤酒中各异α-酸的高效液相(HPLC)方法,提出与老化相关的T/C值指标,不同类型啤酒的T/C值与口感品评间相关系数R2均在0.72~0.92范围内,表明T/C值能够克服生产批次甚至品牌的差异来反映啤酒的老化程度,最终以T/C值与感官评价间的对应关系为纽带,确定老化指标T/C值与啤酒老化程度的具体对应关系:当T/C值>33.4,认为啤酒处于新鲜状态,当T/C值在26.1~33.4范围,认为啤酒处于中度老化状态,当T/C值<26.1,认为啤酒处于高度老化状态。该方法可用于客观有效的对不同质量和老化情况的成品啤酒进行评价,从而在某种程度上避免口感品评存在的缺陷。

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