公开(公告)号：CN117512077A

公开(公告)日：2024-02-06

申请号：CN202311471207.2

申请日：2023-11-07

Applicant: 西北农林科技大学 ,  宁夏回族自治区畜牧工作站

Inventor： 王小龙 ,  吴庭杰 ,  周世卫 ,  王鑫杰 ,  王倩 ,  寇启芳 ,  陈玉林 ,  杨冲

IPC: C12Q1/6858 ,  C12Q1/6806 ,  C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N9/22

Abstract: 本发明涉及绵羊基因分型技术领域，具体涉及用于绵羊FecB基因分型的crRNA、试剂盒及方法。所述crRNA为SEQ ID NO.1所示的crRNA‑a和SEQ ID NO.2所示的crRNA‑g。所述试剂盒包括RPA引物、crRNA、Cas12a核酸酶和ssDNA荧光探针，所述RPA引物为针对绵羊FecB基因的扩增引物。本发明的crRNA、试剂盒，基于CRISPR/Cas12a系统与RPA扩增技术鉴别绵羊FecB外显子第746位的基因型，在检测过程中不需要大型昂贵的仪器，且检测时间缩至约40min，极大地拓展了适用场景，更适用于现场检测。

公开(公告)号：CN116396915B

公开(公告)日：2023-10-31

申请号：CN202211443801.6

申请日：2022-11-18

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈玉林 ,  刘功炜 ,  杨雨鑫 ,  公涵萱 ,  崔雯元

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/31 ,  C12N15/75 ,  C12N15/66 ,  A23K10/37 ,  A23K10/12 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一株无特定抗性基因枯草芽孢杆菌，所述无特定抗性基因枯草芽孢杆菌命名为BSC6ΔA8菌，在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC M 20221487。以该无特定抗性基因枯草芽孢杆菌对克林霉素、林可霉素、链霉素和螺旋霉素的抗生素浓度响应更敏感，生物安全性更高。在与小麦秸秆混合发酵48h后，能有效破坏小麦秸秆的表面形态结构，可降低小麦秸秆的纤维素结晶度约6％，降低小麦秸秆的中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量分别为6.6％和12.1％，具备进一步应用于生物饲料生产及动物益生菌产品开发的潜力。

公开(公告)号：CN116606770A

公开(公告)日：2023-08-18

申请号：CN202310563559.4

申请日：2023-05-18

Applicant: 西北农林科技大学 ,  陕西杨凌富仕特生物科技有限公司

Inventor： 陈玉林 ,  张科 ,  叶丙奎 ,  杜志彬

IPC: C12N1/20 ,  C12N1/16 ,  C12M1/00 ,  A23K10/37 ,  A23K10/30 ,  A23K20/22 ,  A23K10/12 ,  A23K20/105 ,  C12R1/125 ,  C12R1/10 ,  C12R1/25 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种制备固态有氧发酵饲料的复合菌剂及其制备方法，所述复合菌剂包括第一发酵菌剂和第二发酵菌剂；所述第一发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌；所述第二发酵菌剂包括酿酒酵母和植物乳酸杆菌；所述第一发酵菌剂与所述第二发酵菌剂的体积比例为2‑4:1。本发明所得的复合菌剂可用于制备固态有氧发酵饲料，可在短时间内有效降解发酵底物的纤维素，提高粗蛋白、纤维素酶、蛋白酶和甘露聚糖含量，大大增加发酵底物的营养价值。

公开(公告)号：CN114262708A

公开(公告)日：2022-04-01

申请号：CN202111586529.2

申请日：2021-12-21

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  周世卫 ,  陈玉林 ,  高亚伟 ,  王倩 ,  蔡蓓

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/10 ,  C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N15/89 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/6888 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种生产FecB基因g.A746G定点突变绵羊的试剂盒及其方法。所述的试剂盒中含有FecB‑pegRNA的体外转录模板质粒、FecB‑sgRNA的体外转录模板质粒以及PE2mRNA的体外转录模板质粒，以FecB‑pegRNA的体外转录模板质粒、FecB‑sgRNA的体外转录模板质粒为模板经PCR扩增得到的FecB‑pegRNA体外转录模板序列如SEQ ID No.4所示，FecB‑sgRNA体外转录模板序列如SEQ ID No.5所示。将体外转录获得的pegRNA、sgRNA及PE2mRNA纯化后混合，注射入绵羊受精卵细胞质中，受精卵体外培养后移植入同种雌性绵羊输卵管中，生产的后代经检测后获得FecB基因g.A746G定点突变绵羊。本发明模拟自然界中存在的FecB基因g.A746G绵羊，同时与传统CRISPR/Cas技术相比极大地避免了随机突变、bystander突变、脱靶突变及基因组损伤，因此安全性更高。本发明为绵羊的精确基因编辑提供了重要技术支撑。

公开(公告)号：CN109929878A

公开(公告)日：2019-06-25

申请号：CN201910234408.8

申请日：2019-03-26

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  李冠纬 ,  周世卫 ,  蔡蓓 ,  陈玉林

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种利用基因组碱基编辑器系统生产FGF5基因编辑山羊的方法，该方法包括以下步骤：构建特异性靶向FGF5第一外显子的sgRNA的体外转录载体；通过体外转录得到靶向FGF5第一外显子的sgRNA；体外转录BE3蛋白的体外转录载体，得到BE3 mRNA；将以上步骤的sgRNA及BE3 mRNA，纯化后混合，注射入山羊受精卵细胞质中，经体外培养后移植入同种雌性山羊输卵管中，用于生产FGF5基因敲除的基因编辑山羊。

公开(公告)号：CN109680011A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201910041440.4

申请日：2019-01-16

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  丁毅 ,  蔡蓓 ,  周世卫 ,  陈玉林 ,  寇启芳

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/907 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/103 ,  A01K2267/02 ,  C07K14/71 ,  C12N15/113 ,  C12N2310/10 ,  C12N2310/20

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统敲除绵羊BMPR1B基因的方法，包括以下步骤：构建特异性靶向BMPR1B的sgRNA的体外转录载体；通过体外转录得到BMPR1B的sgRNA；体外转录Cas9蛋白的体外转录载体，得到Cas9mRNA；设计合成ssODN；将以上步骤的ssODN、sgRNA及Cas9mRNA纯化后测浓度，混合，注射入绵羊受精卵细胞质中，然后经体外培养后移植入同种雌性绵羊输卵管中，用于生产敲除BMPR1B的转基因绵羊。利用此方法可以快速有效的生产基因编辑绵羊，省时省力。

公开(公告)号：CN105112350A

公开(公告)日：2015-12-02

申请号：CN201510571587.6

申请日：2015-09-06

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈玉林 ,  曹平华 ,  王小龙 ,  杨雨鑫

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  C12R1/225

Abstract: 本发明公开了一种罗伊乳酸杆菌无抗性标记基因整合体系的建立方法及其应用，利用点突变技术获得罗伊乳酸杆菌pheS基因的点突变基因pheSM，并将其与红霉素抗性基因构建整合框架LR-pheSM-em-RR，电转化至L.reuteri XNY感受态细胞，红霉素筛选获得pheSM基因重组乳酸杆菌L.reuteri XNYM；然后，构建插入基因整合框架，再将其电转化至pheSM基因重组罗伊乳酸杆菌感受态细胞，利用对-氯-苯丙氨酸抗性筛选即可获得无抗性标记的重组乳酸杆菌。本发明不将抗性基因引入宿主菌基因组中，避免抗性基因的生物安全隐患以及对上下游基因的极性作用；利用该体系可对宿主菌进行多次基因定点整合。

公开(公告)号：CN119432723A

公开(公告)日：2025-02-14

申请号：CN202411476592.4

申请日：2024-10-22

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  金妙函 ,  孙珂珂 ,  沈文文 ,  宋聖姣 ,  寇启芳 ,  周世卫 ,  魏迎辉 ,  陈玉林

IPC: C12N5/0735 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明涉及细胞生物学技术领域，具体公开了一种山羊胚胎干细胞培养体系及建系方法和应用，所述山羊胚胎干细胞培养体系以mTeSRTM Plus为基础培养液，并添加：20ng/mL～25ng/mL的白血病抑制因子、1μM～1.5μM的PD0325901、4μM～5μM的IWR‑1、45μg/mL～50μg/mL的Vc、15ng/mL～20ng/mL的激活素A、1～1.2μM的CGP77675、1.5～2μM的GO6983。本发明通过山羊胚胎干细胞培养体系培养获得形成清晰边缘的细胞克隆，能稳定传代，具备分化为三胚层的潜力。

公开(公告)号：CN119432677A

公开(公告)日：2025-02-14

申请号：CN202411876345.3

申请日：2024-12-19

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈玉林 ,  张科 ,  雷宇

IPC: C12N1/20 ,  A23K10/18 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株能够提高反刍动物产奶量及乳脂率的布氏普氏菌B14及其应用。一株布氏普氏菌B14，拉丁文名为Prevotella bryantii；保藏编号为CCTCC NO：M 20242730。本发明提供的布氏普氏菌B14能够通过增加反刍动物瘤胃中总挥发性脂肪酸、乙酸、丙酸及戊酸的浓度，以提高反刍动物的产奶量及乳脂率。此外，还具有合成烟酸的功能，能够在反刍动物乳腺中以GPR109A依赖的方式激活mTORC1信号通路，促进脂类合成基因表达，以促进乳脂合成。布氏普氏菌B14还具有降低瘤胃中产甲烷古菌丰度的功能，故其有望通过降低反刍动物的甲烷排放从而提升能量利用效率。

公开(公告)号：CN114262708B

公开(公告)日：2024-07-02

申请号：CN202111586529.2

申请日：2021-12-21

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  周世卫 ,  陈玉林 ,  高亚伟 ,  王倩 ,  蔡蓓

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/10 ,  C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N15/89 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/6888 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种生产FecB基因g.A746G定点突变绵羊的试剂盒及其方法。所述的试剂盒中含有FecB‑pegRNA的体外转录模板质粒、FecB‑sgRNA的体外转录模板质粒以及PE2mRNA的体外转录模板质粒，以FecB‑pegRNA的体外转录模板质粒、FecB‑sgRNA的体外转录模板质粒为模板经PCR扩增得到的FecB‑pegRNA体外转录模板序列如SEQ ID No.4所示，FecB‑sgRNA体外转录模板序列如SEQ ID No.5所示。将体外转录获得的pegRNA、sgRNA及PE2mRNA纯化后混合，注射入绵羊受精卵细胞质中，受精卵体外培养后移植入同种雌性绵羊输卵管中，生产的后代经检测后获得FecB基因g.A746G定点突变绵羊。本发明模拟自然界中存在的FecB基因g.A746G绵羊，同时与传统CRISPR/Cas技术相比极大地避免了随机突变、bystander突变、脱靶突变及基因组损伤，因此安全性更高。本发明为绵羊的精确基因编辑提供了重要技术支撑。