公开(公告)号：CN105950560A

公开(公告)日：2016-09-21

申请号：CN201610347749.2

申请日：2016-05-24

Applicant: 苏州系统医学研究所

Inventor： 秦晓峰 ,  黄安飞 ,  彭迪

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  A01K67/027 ,  A61K49/00 ,  A61K39/395 ,  A61P35/00

CPC classification number: C07K14/705 ,  A01K67/027 ,  A01K2227/105 ,  A01K2227/107 ,  A01K2267/0331 ,  A61K49/0008 ,  A61K2039/505

Abstract: 本发明提供了一种人源化PD‑L1肿瘤细胞系，所述细胞系为MC‑38‑hPD‑L1，并建立具有人源化PD‑L1肿瘤细胞系的动物肿瘤模型，同时揭示了一种人源化PD‑L1肿瘤细胞系的构建方法，具体通过CRISPR‑CAS9敲除动物源的PD‑L1，扩大培养获得敲除细胞库，提取DNA进行PCR扩增，回收扩增产物并进行克隆，最后通过慢病毒体系将人源PD‑L1在mPD‑L1 KO的MC‑38细胞系中过表达，随后进行慢病毒的包装及Puromycin筛选获得人源化的PD‑L1的MC‑38细胞系。结果显示抗体治疗后的肿瘤浸润CD8 T淋巴细胞明显表现出更强的杀伤和增殖能力，此外我们也发现抗体治疗后肿瘤浸润的Treg细胞明显被抑制。这从分子机理上进一步证明该方法有效可行。

公开(公告)号：CN106350540A

公开(公告)日：2017-01-25

申请号：CN201610739487.4

申请日：2016-08-26

Applicant: 苏州系统医学研究所

Inventor： 秦晓峰 ,  彭昌伟 ,  李春峰 ,  彭迪 ,  张路路 ,  程根宏

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/66 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明提供了一种由慢病毒介导的高效可诱导型CRISPR/Cas9基因敲除载体，所述CRISPR/Cas9包括Cas9蛋白和sgRNA。通过构建CRISPR/Cas9基因敲除载体，并将CRISPR/Cas9 用慢病毒系统高效地转导进入多种类型的细胞之中，应用于PD-L1基因的敲除，本发明提供的载体能准确有效地完成其基因编辑的使命。

公开(公告)号：CN105950560B

公开(公告)日：2019-07-23

申请号：CN201610347749.2

申请日：2016-05-24

Applicant: 苏州系统医学研究所

Inventor： 秦晓峰 ,  黄安飞 ,  彭迪

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  A01K67/027 ,  A61K49/00 ,  A61K39/395 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明提供了一种人源化PD‑L1肿瘤细胞系，所述细胞系为MC‑38‑hPD‑L1，并建立具有人源化PD‑L1肿瘤细胞系的动物肿瘤模型，同时揭示了一种人源化PD‑L1肿瘤细胞系的构建方法，具体通过CRISPR‑CAS9敲除动物源的PD‑L1，扩大培养获得敲除细胞库，提取DNA进行PCR扩增，回收扩增产物并进行克隆，最后通过慢病毒体系将人源PD‑L1在mPD‑L1 KO的MC‑38细胞系中过表达，随后进行慢病毒的包装及Puromycin筛选获得人源化的PD‑L1的MC‑38细胞系。结果显示抗体治疗后的肿瘤浸润CD8 T淋巴细胞明显表现出更强的杀伤和增殖能力，此外我们也发现抗体治疗后肿瘤浸润的Treg细胞明显被抑制。这从分子机理上进一步证明该方法有效可行。