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公开(公告)号：CN101531708A
公开(公告)日：2009-09-16
申请号：CN200910111462.X
申请日：2009-04-14
Applicant: 福建农林大学
Abstract: 一种高效的土壤蛋白质提取方法是把土壤加入预冷的土壤蛋白质提取缓冲液混匀后置4℃，摇床振荡过夜。振荡液用粗滤纸于布氏漏斗真空抽滤，取抽滤液过大孔树脂(D101)，取过柱液过0.22μm微孔滤膜，滤液为胞外蛋白质母液；滤膜上细胞经洗涤、破碎、离心分离和真空干燥获得干粉，干粉即为胞内土壤蛋白质沉淀物。胞外蛋白质母液经离心、分离和真空干燥获胞外土壤蛋白质干粉；胞内蛋白质干粉经裂解在10％聚丙烯酰胺凝胶SDS－PAGE电泳即可清楚分离，该方法具有高分离效率，所提微生物的得率为37.5％，高于传统方法0.1－1％的得率，建立了一种简易的操作流程，提高了得率，SDS－PAGE分辨率和质谱鉴定效果好。
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公开(公告)号：CN102747164A
公开(公告)日：2012-10-24
申请号：CN201210258308.7
申请日：2012-07-25
Applicant: 福建农林大学
Abstract: 本发明涉及一种牡蛎鳃部菌群的PCR-DGGE分析方法。所述方法包括DNA提取、巢式PCR扩增、变性梯度凝胶电泳DGGE、对DGGE指纹图谱进行聚类分析；其中所述DNA提取的步骤为：（1）取牡蛎鳃部组织经生理盐水震荡、过滤，取滤液离心，去沉淀，清液离心，收集菌体；（2）菌体样品经裂解、抽提、异丙醇沉淀和乙醇洗涤；本发明是以牡蛎为研究对象，解决传统分离培养方法应用于研究微生物所带来的不足，该方法可以用于保鲜或者养殖过程中牡蛎鳃部主要菌群的分析，可避免传统分离培养的耗时大，工作繁重，操作繁琐，实现对含高蛋白的牡蛎样品中菌群总DNA的高效提取、有效扩增以及菌群微生态准确分析。
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公开(公告)号：CN101531708B
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN200910111462.X
申请日：2009-04-14
Applicant: 福建农林大学
Abstract: 一种高效的土壤蛋白质提取方法是把土壤加入预冷的土壤蛋白质提取缓冲液混匀后置4℃，摇床振荡过夜。振荡液用粗滤纸于布氏漏斗真空抽滤，取抽滤液过大孔树脂(D101)，取过柱液过0.22μm微孔滤膜，滤液为胞外蛋白质母液；滤膜上细胞经洗涤、破碎、离心分离和真空干燥获得干粉，干粉即为胞内土壤蛋白质沉淀物。胞外蛋白质母液经离心、分离和真空干燥获胞外土壤蛋白质干粉；胞内蛋白质干粉经裂解在10％聚丙烯酰胺凝胶SDS-PAGE电泳即可清楚分离，该方法具有高分离效率，所提微生物的得率为37.5％，高于传统方法0.1-1％的得率，建立了一种简易的操作流程，提高了得率，SDS-PAGE分辨率和质谱鉴定效果好。
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