公开(公告)号：CN118546966A

公开(公告)日：2024-08-27

申请号：CN202410665383.8

申请日：2024-05-27

Applicant: 海南大学

Inventor： 戴兆基 ,  王琳淅 ,  崔红光 ,  王小卿

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/40 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14 ,  C12R1/19 ,  C12R1/94

Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供了一种抗夜来香花叶病毒的弱毒疫苗R181D及其应用，其以Te l MV侵染性克隆质粒pPasFru为模板，以HCPro‑F、HCPro‑R、HCProD‑R和HCProD‑F为引物，使用Phus ion高保真DNA聚合酶进行扩增，获得大小分别为1278bp和117bp的ab和cd片段，再以ab和cd片段的混合物为模板，获得大小为1359bp的ad片段，利用Pst I、Sa l I双酶切ad片段以及pPasFru质粒，通过T4DNA连接酶将片段与载体进行连接，连接产物转化至大肠杆菌DH10B，获得弱毒疫苗pPasFru‑R181D；本发明通过将Te l MV HCPro蛋白的第181位精氨酸突变为天冬氨酸，获得弱毒疫苗，弱毒疫苗接种百香果植株后不表现症状但病毒含量仍较高，该弱毒疫苗作用稳定，可以起到有效的交叉保护作用，为田间防控Te l MV提供了新途径。