公开(公告)号：CN119060995B

公开(公告)日：2025-04-01

申请号：CN202410948053.X

申请日：2024-07-16

Applicant: 扬州大学

Inventor： 宋瑞龙 ,  芮舒颜 ,  彭韵雯 ,  张宛 ,  羊扬 ,  何丽霞 ,  蒋宁 ,  仝锡帅 ,  邹辉 ,  马勇刚 ,  刘宗平

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/70 ,  C07K16/40 ,  C07K16/06 ,  G01N33/573

Abstract: 本发明公开了一种兔抗鸡P4HB蛋白多克隆抗体的制备方法及其应用，包括，利用PCR方法扩增了鸡P4HB基因，并将其同源重组至pCOLDII载体中，构建了原核重组表达质粒pCOLDII‑P4HB。将重组质粒转化E.coli BL21(DE3)并用IPTG进行诱导表达，利用Ni‑NTA亲和层析方法进行蛋白纯化，将纯化的HIS‑P4HB蛋白与等体积的弗氏完全佐剂混合乳化后，将纯化的蛋白免疫新西兰大白兔，采用颈背部多点皮下注射，该抗体经ProteinA+G亲和层析纯化后冻存于‑80℃冰箱。原核表达的HIS‑P4HB蛋白表达在感受态细胞上清中，分子质量约为25KDa；实验兔4次免疫P4HB重组蛋白后采血并分离血清，经过纯化，该抗体能够通过Western blot和IF鉴定天然构象和线性化的P4HB蛋白的表达和细胞定位。

公开(公告)号：CN119060995A

公开(公告)日：2024-12-03

申请号：CN202410948053.X

申请日：2024-07-16

Applicant: 扬州大学

Inventor： 宋瑞龙 ,  芮舒颜 ,  彭韵雯 ,  张宛 ,  羊扬 ,  何丽霞 ,  蒋宁 ,  仝锡帅 ,  邹辉 ,  马勇刚 ,  刘宗平

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/70 ,  C07K16/40 ,  C07K16/06 ,  G01N33/573

Abstract: 本发明公开了一种兔抗鸡P4HB蛋白多克隆抗体的制备方法及其应用，包括，利用PCR方法扩增了鸡P4HB基因，并将其同源重组至pCOLDII载体中，构建了原核重组表达质粒pCOLDII‑P4HB。将重组质粒转化E.coli BL21(DE3)并用IPTG进行诱导表达，利用Ni‑NTA亲和层析方法进行蛋白纯化，将纯化的HIS‑P4HB蛋白与等体积的弗氏完全佐剂混合乳化后，将纯化的蛋白免疫新西兰大白兔，采用颈背部多点皮下注射，该抗体经ProteinA+G亲和层析纯化后冻存于‑80℃冰箱。原核表达的HIS‑P4HB蛋白表达在感受态细胞上清中，分子质量约为25KDa；实验兔4次免疫P4HB重组蛋白后采血并分离血清，经过纯化，该抗体能够通过Western blot和IF鉴定天然构象和线性化的P4HB蛋白的表达和细胞定位。