鸡球虫ADF重组卡介苗及制备方法

    公开(公告)号:CN102552893A

    公开(公告)日:2012-07-11

    申请号:CN201110439688.X

    申请日:2011-12-26

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明提供了一种鸡球虫ADF重组卡介苗,同时还提供了该疫苗的制备方法,获得鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊,提取RNA,反转录成cDNA,根据已克隆的柔嫩艾美耳球虫ADF基因序列的开放阅读框设计引物进行PCR,与PMD-18T载体连接进行克隆,测序鉴定正确后,酶切回收目的片段,再分别与用同种酶进行酶切反应的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体PMV261和整合表达载体PMV361相连,连接正确的重组质粒转化到BCG中,经抗性筛选和PCR鉴定,获得阳性鸡柔嫩艾美耳球虫重组卡介苗。该活载体疫苗稳定性好,运输和保存较为容易,易于生产,产品不需纯化,可直接用于免疫保护试验.免去了蛋白质后处理的复杂工序,从而大大降低了成本,适宜于广大农村。

    鸡球虫ADF重组卡介苗及制备方法

    公开(公告)号:CN102552893B

    公开(公告)日:2013-09-18

    申请号:CN201110439688.X

    申请日:2011-12-26

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明提供了一种鸡球虫ADF重组卡介苗,同时还提供了该疫苗的的制备方法,获得鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊,提取RNA,反转录成cDNA,根据已克隆的柔嫩艾美耳球虫ADF基因序列的开放阅读框设计引物进行PCR,与PMD-18T载体连接进行克隆,测序鉴定正确后,酶切回收目的片段,再分别与用同种酶进行酶切反应的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体PMV261和整合表达载体PMV361相连,连接正确的重组质粒转化到BCG中,经抗性筛选和PCR鉴定,获得阳性鸡柔嫩艾美耳球虫重组卡介苗。该活载体疫苗稳定性好,运输和保存较为容易,易于生产,产品不需纯化,可直接用于免疫保护试验.免去了蛋白质后处理的复杂工序,从而大大降低了成本,适宜于广大农村。

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