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公开(公告)号：CN107119031B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN201710491309.9
申请日：2017-06-21
Applicant: 南京大学
IPC: C12N9/22
Abstract: 本发明涉及一种腺嘌呤邻位增强催化活性且在高温下具有高催化活性的新型嗜热四元G四链体DNA酶。首先在富含G碱基的DNA序列的两端修饰腺嘌呤，在含150mM铵离子的缓冲液中，95℃退火5min，形成四元G四链体结构。然后将该结构和血红素混合，形成DNA酶。通过程序控制反应体系的温度，监测其催化活性，证明该酶在高温下的催化性能：75℃下10小时，能够保持50％以上的活性，18小时后该酶显示接近室温的活性；95℃下5分钟，活性没有变化，1.5小时后能够保持50％以上的活性，4小时后该酶显示接近室温的活性。该嗜热四元G四链体DNA酶制备简单，价格低廉，热稳定性好，具有一定的应用前景。
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公开(公告)号：CN111705044B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN202010482177.5
申请日：2020-05-23
Applicant: 南京大学
IPC: C12N9/22
Abstract: 本发明涉及一种间位胞嘧啶增强并利用单碱基修饰技术进一步实现高催化活性G四链体DNA酶的构建。首先，在富含G碱基DNA序列的3’端修饰胞嘧啶及其衍生物，在含有100mM K离子的缓冲中，95℃退火5min，形成G四链体结构。然后将该G四链体与血红素混合，形成DNA酶。通过测试不同H2O2浓度下DNA酶的催化活性并利用米氏模型进行拟合、计算获得不同G四链体DNA酶的米氏常数。最终，当3’端间位碱基是氮杂胞苷时，其活性与天然蛋白酶HRP的活性达到同个数量级(kcat(F3T‑azaC)＝22.7s‑1)。该高活性G四链体DNA酶设计简单，制备快速，价格低廉，便于储存，具有一定的应用前景。
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公开(公告)号：CN111705044A
公开(公告)日：2020-09-25
申请号：CN202010482177.5
申请日：2020-05-23
Applicant: 南京大学
IPC: C12N9/22
Abstract: 本发明涉及一种间位胞嘧啶增强并利用单碱基修饰技术进一步实现高催化活性G四链体DNA酶的构建。首先，在富含G碱基DNA序列的3’端修饰胞嘧啶及其衍生物，在含有100mM K离子的缓冲中，95℃退火5min，形成G四链体结构。然后将该G四链体与血红素(hemin)混合，形成DNA酶。通过测试不同H2O2浓度下DNA酶的催化活性并利用米氏模型进行拟合、计算获得不同衍生物的米氏常数。最终，当3’端间位碱基是氮杂胞苷时，其活性与天然蛋白酶HRP的活性达到同个数量级。该高活性G四链体DNA酶设计简单，制备快速，价格低廉，便于储存，具有一定的应用前景。
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公开(公告)号：CN107119031A
公开(公告)日：2017-09-01
申请号：CN201710491309.9
申请日：2017-06-21
Applicant: 南京大学
IPC: C12N9/22
CPC classification number: C12N9/22
Abstract: 本发明涉及一种腺嘌呤邻位增强催化活性且在高温下具有高催化活性的新型嗜热四元G四链体DNA酶。首先在富含G碱基的DNA序列的两端修饰腺嘌呤，在含150mM铵离子的缓冲液中，95℃退火5min，形成四元G四链体结构。然后将该结构和血红素混合，形成DNA酶。通过程序控制反应体系的温度(25‑95℃)，监测其催化活性，证明该酶在高温下的催化性能：75℃下10小时，能够保持50％以上的活性，18小时后该酶显示接近室温的活性；95℃下5分钟，活性没有变化，1.5小时后能够保持50％以上的活性，4小时后该酶显示接近室温的活性。该嗜热四元G四链体DNA酶制备简单，价格低廉，热稳定性好，便于储存，具有一定的应用前景。
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