公开(公告)号：CN111705044B

公开(公告)日：2022-12-27

申请号：CN202010482177.5

申请日：2020-05-23

Applicant: 南京大学

Inventor： 周俊 ,  鞠熀先 ,  陈杰林 ,  程明攀 ,  王佳伟

IPC: C12N9/22

Abstract: 本发明涉及一种间位胞嘧啶增强并利用单碱基修饰技术进一步实现高催化活性G四链体DNA酶的构建。首先，在富含G碱基DNA序列的3’端修饰胞嘧啶及其衍生物，在含有100mM K离子的缓冲中，95℃退火5min，形成G四链体结构。然后将该G四链体与血红素混合，形成DNA酶。通过测试不同H2O2浓度下DNA酶的催化活性并利用米氏模型进行拟合、计算获得不同G四链体DNA酶的米氏常数。最终，当3’端间位碱基是氮杂胞苷时，其活性与天然蛋白酶HRP的活性达到同个数量级(kcat(F3T‑azaC)＝22.7s‑1)。该高活性G四链体DNA酶设计简单，制备快速，价格低廉，便于储存，具有一定的应用前景。

公开(公告)号：CN111705044A

公开(公告)日：2020-09-25

申请号：CN202010482177.5

申请日：2020-05-23

Applicant: 南京大学

Inventor： 周俊 ,  鞠熀先 ,  陈杰林 ,  程明攀 ,  王佳伟

IPC: C12N9/22

Abstract: 本发明涉及一种间位胞嘧啶增强并利用单碱基修饰技术进一步实现高催化活性G四链体DNA酶的构建。首先，在富含G碱基DNA序列的3’端修饰胞嘧啶及其衍生物，在含有100mM K离子的缓冲中，95℃退火5min，形成G四链体结构。然后将该G四链体与血红素(hemin)混合，形成DNA酶。通过测试不同H2O2浓度下DNA酶的催化活性并利用米氏模型进行拟合、计算获得不同衍生物的米氏常数。最终，当3’端间位碱基是氮杂胞苷时，其活性与天然蛋白酶HRP的活性达到同个数量级。该高活性G四链体DNA酶设计简单，制备快速，价格低廉，便于储存，具有一定的应用前景。