公开(公告)号：CN111549058B

公开(公告)日：2023-04-25

申请号：CN202010286443.7

申请日：2020-04-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 姜爱文 ,  刘红林 ,  陶景丽 ,  李荣阳 ,  张轩

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统在猪胎儿成纤维细胞中实现基因敲除的方法，包括下述步骤：构建Cas9/sgRNA真核表达载体；构建RGS‑CR双荧光代替性报告载体；将Cas9/sgRNA真核表达载体和RGS‑CR报告载体共转至293T细胞中，筛选最高效的sgRNA序列；将筛选出的Cas9/sgRNA质粒电转至猪胎儿成纤维细胞中，实现敲除。本发明的方法操作简单，可在猪体细胞上可实现高效的基因编辑。

公开(公告)号：CN111549058A

公开(公告)日：2020-08-18

申请号：CN202010286443.7

申请日：2020-04-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 姜爱文 ,  刘红林 ,  陶景丽 ,  李荣阳 ,  张轩

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统在猪胎儿成纤维细胞中实现基因敲除的方法，包括下述步骤：构建Cas9/sgRNA真核表达载体；构建RGS-CR双荧光代替性报告载体；将Cas9/sgRNA真核表达载体和RGS-CR报告载体共转至293T细胞中，筛选最高效的sgRNA序列；将筛选出的Cas9/sgRNA质粒电转至猪胎儿成纤维细胞中，实现敲除。本发明的方法操作简单，可在猪体细胞上可实现高效的基因编辑。