公开(公告)号：CN103114102A

公开(公告)日：2013-05-22

申请号：CN201310034775.6

申请日：2013-01-29

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 林俊芳 ,  杨海星 ,  郭丽琼 ,  尤琳烽

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/63

Abstract: 本发明公开了一种多基因载体组装方法与应用，属于基因工程技术领域。该方法包括如下步骤（1）采用含有酶切位点的重叠引物对三个基因片段进行PCR扩增，通过1.33×连接buffer将三个片段连接成重组质粒；（2）重组质粒含有单一酶切位点，在每个插入基因对应的重叠引物内加上质粒单一酶切位点末端碱基，将重组质粒用相应的酶进行酶切，依次用1.33×连接buffer将重组质粒酶切片段和PCR扩增片段连接成新的重组质粒。（1）中引入的多个酶切位点，可以为后续的多基因酶切连接做基础；（2）不仅可以减少质粒单酶切后自连以及目的基因反向连接，而且只需要一个合适的酶切位点，就可以连接所有的目的基因片段。

公开(公告)号：CN103114102B

公开(公告)日：2014-12-03

申请号：CN201310034775.6

申请日：2013-01-29

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 林俊芳 ,  杨海星 ,  郭丽琼 ,  尤琳烽

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/63

Abstract: 本发明公开了一种多基因载体组装方法与应用，属于基因工程技术领域。该方法包括如下步骤（1）采用含有酶切位点的重叠引物对三个基因片段进行PCR扩增，通过1.33×连接buffer将三个片段连接成重组质粒；（2）重组质粒含有单一酶切位点，在每个插入基因对应的重叠引物内加上质粒单一酶切位点末端碱基，将重组质粒用相应的酶进行酶切，依次用1.33×连接buffer将重组质粒酶切片段和PCR扩增片段连接成新的重组质粒。（1）中引入的多个酶切位点，可以为后续的多基因酶切连接做基础；（2）不仅可以减少质粒单酶切后自连以及目的基因反向连接，而且只需要一个合适的酶切位点，就可以连接所有的目的基因片段。